高效液相色譜法測定阿托伐他汀鈣片有關物質

劉振宇

摘 要：采用高效液相色譜法對阿托伐他汀鈣片有關物質進行檢測，十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（250mm×4.6mm，5μm），流動相為0.05mol/L檸檬酸溶液（用氨水調節pH值至4.0）-乙腈-四氫呋喃（53：27：20），檢測波長為244nm，柱溫為35℃，流速為1.5mL/min。結果表明，在所建立的色譜條件下，阿托伐他汀鈣與各雜質分離良好，所建立的方法專屬性、精密度、準確度、耐用性均較好，可用于阿托伐他汀鈣片有關物質的測定。

關鍵詞：阿托伐他汀鈣片；有關物質；高效液相色譜法

心血管疾病是危害人類健康（特別是中老年）最常見、最嚴重的疾病之一，血脂異常是動脈粥樣硬化、冠心病以及其他心腦血管疾病的重要危險因素。阿托伐他汀通過抑制肝臟內HMG-CoA還原酶和膽固醇的合成從而降低血漿中膽固醇和脂蛋白水平，并通過增加細胞表面的肝臟LDL受體以增強LDL的攝取和代謝。醫學界公認比天然微生物發酵、半合成的他汀類藥物好，患者使用時，起始劑量即有優異的調脂達標率。文章建立了以0.05mol/L檸檬酸溶液（用氨水調節pH值至4.0）-乙腈-四氫呋喃（53：27：20）為流動相的HPLC分析方法，用于對阿托伐他汀鈣的測定[1-2]。該方法專屬性良好，而且方法方便、快速、準確。

1 材料

1.1 儀器

高效液相色譜儀（Hitachi Chromaster-5430檢測器，Hitachi Chromaster-5310柱溫箱，Hitachi Chromaster-5210自動進樣器，Hitachi Chromaster-5110泵），Chromaster色譜工作站，日本Hitachi公司；十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱（250mm×4.0mm，5μm），美國Thermo公司； AR1140電子天平，美國Ohaus公司。

1.2 試劑

阿托伐他汀鈣對照品（中國藥品生物制品鑒定所）；阿托伐他汀鈣雜質A、C、F、H對照品（USP標準物質）；乙腈、四氫呋喃為色譜純試劑； 其余試劑為市售分析純試劑；水為純凈水。

2 方法

2.1 色譜條件與系統適應性

色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：0.05mol/L檸檬酸溶液（用氨水調節pH值至4.0）-乙腈-四氫呋喃（53：27：20）；流速：1.5ml/min；檢測波長：244nm；柱溫：35℃；進樣量：20μl。理論塔板數按阿托伐他汀峰和阿托伐他汀鈣雜質C峰計應不低于5000和7000，兩峰的拖尾因子分別不得過1.5，兩峰之間的分離度應不小于1.5。溶液重復進樣5次，阿托伐他汀峰和阿托伐他汀鈣雜質C峰的峰面積相對標準偏差應分別不得過1.0%和2.0%。

2.2 溶液配制

阿托伐他汀鈣對照品溶液：取阿托伐他汀鈣對照品10mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加混合溶劑[（0.05mol/L檸檬酸銨溶液（用氨水調節pH值至7.4）-乙腈（50：50）]適量，充分振搖使溶解后，用混合溶劑稀釋至刻度，搖勻即得。阿托伐他汀鈣供試品溶液：取阿托伐他汀鈣片20片，研細，精密稱取粉末適量（約相當于阿托伐他汀10mg），置100ml量瓶中，加混合溶劑適量，充分振搖使溶解后，用混合溶劑稀釋至刻度，搖勻即得。

3 結果

3.1 專屬性試驗

取阿托伐他汀對照品與雜質對照品適量，精密稱定，配成含阿托伐他汀100μg/ml與各個雜質10μg/ml的混合溶液， 進樣， 阿托伐他汀與各雜質間分離良好。取阿托伐他汀對照品約10mg，精密稱定，置100ml量瓶中，對阿托伐他汀分別進行酸、堿、氧化、熱及光照破壞試驗， 分別加入1mol/L鹽酸適量，1mol/L氫氧化鈉適量，30%雙氧水適量，冷卻到室溫，調節pH至中性，直火燒至熔融，在4500lx光照條件暴露24h后，用稀釋液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液20μl進樣，記錄色譜圖。阿托伐他汀在不同條件下均有不同程度的降解，主成分峰與降解雜質峰分離良好。

3.2 線性相關性試驗

精密稱取阿托伐他汀鈣雜質F、A、C、H對照品適量，加混合溶劑稀釋，配制成濃度約為1.0μg/ml、2.0μg/ml、4.0μg/ml的標準溶液，精密吸取各標準溶液20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。試驗結果表明阿托伐他汀鈣雜質F、A、C、H分別在濃度范圍1.05-4.20μg/ml、1.04-4.16μg/ml、1.13-4.52μg/ml、1.11-4.44μg/ml內呈現良好的線性相關性。

3.3 儀器精密度試驗

精密稱取阿托伐他汀鈣雜質F、A、C、H對照品，加入混合溶劑稀釋，使濃度分別約為1.5μg/ml、1.5μg/ml、1.5μg/ml、0.5μg/ml，分別配6個樣，精密量取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。RSD分別為1.12%、0.83%、0.99%、1.32%。結果表明儀器精密度良好。

3.4 定量限和檢測限試驗

精密稱取阿托伐他汀鈣各雜質F、雜質A、雜質C、雜質H對照品適量，用混合溶劑逐步稀釋，精密量取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。當信噪比為10：1時，即為定量限；當信噪比為3：1時，即為檢測限。雜質F、雜質A、雜質C、雜質H的定量限分別為0.40μg/ml、0.40μg/ml、0.40μg/ml、0.40μg/ml，雜質F、雜質A、雜質C、雜質H的檢測限分別為0.15μg/ml、0.15μg/ml、0.15μg/ml、0.15μg/ml。

3.5 回收率試驗

配制阿托伐他汀鈣片溶液（阿托伐他汀約濃度為500μg/ml），精密稀釋阿托伐他汀鈣雜質F、A、C、H對照品貯備液做為阿托伐他汀鈣雜質溶液，分別取阿托伐他汀鈣片樣品溶液、雜質溶液各一份混勻，配制成低、中、高三個濃度，濾過，作為樣品溶液Ⅱ；另取阿托伐他汀鈣片溶液適量，加混合溶劑稀釋成每1ml中約含100μg的溶液，濾過，取續濾液，作為樣品溶液Ⅰ，精密稱取阿托伐他汀鈣雜質F、A、C、H對照品適量，加入混合溶劑稀釋，使濃度約為1.5μg/ml、1.5μg/ml、1.5μg/ml、0.5μg/ml作為對照品溶液；分別取上述各溶液20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法計算含量，測定回收率。計算雜質F、A、C、H的回收率，平均回收率分別為100.2%、99.7%、101.3%、100.5%，RSD分別為0.87%、0.93%、1.56%、1.33%。

3.6 溶液穩定性試驗

精密稱取阿托伐他汀鈣雜質F、A、C、H對照品適量，加入混合溶劑稀釋，使濃度分別約為1.5μg/ml、1.5μg/ml、1.5μg/ml、0.5μg/ml的對照溶液，于室溫、陽光不直射的情況下放置，分別于2、4、8、10、12、18、24小時取樣，精密吸取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算變化率均在5.0%以內。結果表明樣品溶液在室溫條件下放置24h穩定。

3.7 耐用性試驗

采用不同品牌色譜柱，調節流動相pH，調節水相和有機相比例，調節柱溫，調節流速，進行樣品有關物質測定。結果表明，符合系統適用性要求，色譜柱、流動相pH、流動相比例、柱溫、流速的微小調整，對測定結果影響較小，方法耐用性良好。

參考文獻

[1]S. V. Londhe， R. S. Deshmukh， S. V. Mulgund， K. S. Jain. Development and validation of a reversed-phase HPLC method for simultaneous determination of aspirin， atorvastatin calcium and clopidogrel bisulphate in capsules. Indian J Pharm Sci. 2011，73（1）： 23-29.

[2]Bahia A. Moussa， Asmaa A. El-Zaher， Marianne A. Mahrouse， and Maha S. Ahmed. Simultaneous determination of amlodipine besylate and atorvastatin calcium in binary mixture by spectrofluorimetry and HPLC coupled with fluorescence detection. Anal Chem Insights. 2013， 8： 107-115.