取卵術中卵泡沖洗對IVF-ET的安全性分析

暨南大學醫學院附屬第五醫院廣東省清遠市人民醫院婦產科， 廣東 清遠 511518

取卵術中卵泡沖洗對IVF-ET的安全性分析

王秋香冼英杰陳彩蓉

暨南大學醫學院附屬第五醫院廣東省清遠市人民醫院婦產科， 廣東 清遠 511518

目的探討取卵術中卵泡沖洗的安全性、卵泡沖洗的適宜次數。方法選擇因輸卵管因素不孕而接受IVF-ET助孕治療的不孕癥患者60例，將60例患者所獲得的全部卵母細胞根據其在取卵過程中經過卵泡沖洗的次數分為4組，A組為無需卵泡沖洗即獲得的卵母細胞，B組為經過1次卵泡沖洗獲得的卵母細胞，C組為經過2次卵泡沖洗獲得的卵母細胞，D組為經過3次以上(包括3次)卵泡沖洗獲得的卵母細胞，觀察四組卵母細胞的情況。結果A組、B組、C組的成熟卵率、受精率、卵裂率、優胚率及可用胚胎數差異無統計學意義。D組的成熟卵率、受精率、卵裂率、優胚率及可用胚胎數較前3組低，差異有統計學意義(P<0.05)。結論適宜的卵泡沖洗不影響卵子受精、卵裂及胚胎發育情況，是安全的。但反復的卵泡沖洗(≥3次以上)所獲得胚胎質量差，建議將卵泡沖洗次數控制在3次以下。

卵泡沖洗；IVF-ET；安全性

在輔助生殖技術中，取卵術是體外受精-胚胎移植(IVF-ET)的主要技術之一，取卵是否成功，能否獲得卵子是關鍵。有研究認為取卵術中使用雙腔取卵針進行卵泡沖洗可以直接提高獲卵率，不影響卵子受精、卵裂及胚胎發育情況，并且顯著改善妊娠結局[1-3]。本研究選擇因輸卵管因素不孕而接受IVF-ET助孕治療的不孕癥患者60例，將60例患者所獲得的全部卵母細胞根據其在取卵過程中經過卵泡沖洗的次數分為4組，觀察4組卵母細胞的情況。從而探討取卵術中卵泡沖洗的安全性、卵泡沖洗的適宜次數.

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年12月至2013年12月因不孕癥在清遠市人民醫院生殖中心接受常規IVF-ET助孕治療的不孕癥患者60例為研究對象。納入標準： ①年齡≤35 歲；②基礎FSH<10IU/L；③因輸卵管因素導致不孕而接受IVF-ET；④子宮正常；⑤既往無子宮手術史；排除標準：①年齡>35歲；②高PRL血癥或合并甲狀腺功能異常、卵巢腫瘤等全身系統疾病；③先天性子宮畸形；④既往有子宮手術史。均采用黃體中期短效長方案行控制性超促排卵，將60例患者所獲得的全部卵母細胞根據其在取卵過程中經過卵泡沖洗的次數而分為4組。A組為無需卵泡沖洗即獲得的卵母細胞，B組為經過1次卵泡沖洗獲得的卵母細胞，C組為經過2次卵泡沖洗獲得的卵母細胞， D組為經過3次以上(包括3次)卵泡沖洗獲得的卵母細胞.

1.2 方法

1.2.1 超促排卵治療 所有患者均采取黃體中期短效長方案降調節治療，于前次月經周期的黃體中期開始使用短效促性腺激素釋放激素激動劑達菲林針劑0.03-0.1 mg /d至HCG日，注射GnRH-a后10-15天經證實達到垂體降調節標準后，使用重組FSH(果納芬)或結合尿促性腺激素刺激卵泡發育。當1個優勢卵泡直徑≥19mm，或2-3個優勢卵泡≥17mm，血E2達到平均每個優勢卵泡(≥14mm卵泡)250-300pg/ml時，當晚肌肉注射HCG 5000-10000IU。注射HCG 后36-38h 左右在陰道B超引導下經陰道穿刺取卵,穿刺HCG日≥12mm的卵泡。

1.2.2 取卵及卵泡沖洗方法：所有病例均空腹，于取卵前靜脈全麻鎮痛，患者取膀胱截石位，常規消毒鋪巾、放入陰道探頭及穿刺架，找到一側卵巢后，再尋找穿刺針與卵泡間最佳進針位置，手術者將穿刺針快速刺入卵泡，穿刺針用COOK16G雙腔針，一腔吸取卵子，另一腔供沖洗，啟動吸引器(COOK負壓吸引器)，抽吸壓力為120-130mmHg，使卵泡液吸入15ml試管內，當一個卵泡液抽凈后，將抽吸出的卵泡液交與胚胎實驗室技術員在顯微鏡下查找卵子，若一次抽吸即可獲得卵子則無需沖洗，如果未獲得卵子，則從雙腔取卵針的沖洗腔注入卵泡沖洗液來沖洗，通過用卵泡沖洗液來反復沖洗，再反復抽吸卵泡，直到獲得卵子。沖洗液為卵泡培養液，產品類別G-MOPS PIUS (125ml/瓶)+肝素25ul，瑞典Vitrolife公司生產。一般一次的沖針量約4ml。

1.2.3 卵母細胞收集 將收集的卵泡液或卵泡沖洗液迅速倒入100mm×15mm 培養皿，肉眼初步識別卵冠丘復合體 (OCCC )， 在體視鏡下證實后轉移至撿卵皿中，用G-IVF plus 洗滌后轉入受精皿收集。

1.2.4 體外受精 將收集的卵母細胞培養3-6h后取出 ，加入獲能后的精子，加精后將精卵放回37℃、6%CO2濃度的培養箱繼續培養。

1.2.5 受精卵裂觀察、胚胎移植 加精后16- 18h觀察受精情況，顯微鏡下見2原核為正常受精，受精后24h開始觀察卵裂情況，在第3天根據卵裂球數目、大小 、形狀、均勻程度、有無碎片等對胚胎進行分級，將D3卵裂球數為6-9的Ⅰ級或Ⅱ級，D1原核評分為Z1或Z2的胚胎評為優質胚胎，在第3天挑選評分最優的胚胎進行胚胎移植。

1.2.6 監測內容 觀察4組卵母細胞的成熟卵率、受精率、卵裂率、可用胚胎數、優質胚胎率。

1.3 統計學方法 應用SPSS15.0統計軟件包進行統計 ，兩組均數的比較采用t檢驗，率的比較采用χ2檢驗 ,以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

A組、B組、C組的成熟卵率、受精率、卵裂率、優胚率及可用胚胎數無顯著性差異。D組成熟卵率、受精率、卵裂率、優胚率及可用胚胎數較前3組低，有顯著性差異(<0.05)。見下表1。

表1 組卵母細胞受精及胚胎相關參數比較

注：與A、B、C組比較,*P<0.05。

3 討論

在體外受精胚胎移植技術中，我們的共識是以最小的代價獲取高質量的卵母細胞，進而得到高質量的胚胎以提高臨床妊娠率。而獲卵困難為體外受精-胚胎移植取卵手術中較為常見的問題，對于IVF取卵手術中獲卵困難的女性不孕患者，通過反復卵泡沖洗可以提高獲卵率。為什么有的成熟卵子要通過沖洗才可以獲得？原因在于成熟卵泡發生了一系列形態、細胞結構和化學成分的變化。FSH的濃度升高使顆粒細胞發生脂肪變性，卵泡液侵入到卵丘細胞之間，導致卵丘細胞之間失去粘連而彼此分散開來，最終使卵母細胞連同放射冠從卵泡壁上游離出來，懸浮于卵泡液中，有利于卵母細胞在卵泡壁破裂時隨卵泡液一起流出[4]。

本研究結果顯示A、B、C組3組的成熟卵率、受精率、卵裂率、可用胚胎數、優質胚胎率差異無統計學意義，說明≤2次的卵泡沖洗不影響卵子受精、卵裂及胚胎發育情況，是安全的。

Hussein E[5]通過對陰道超聲下卵泡穿刺抽吸與卵泡沖洗抽吸所回收的卵母細胞活力、受精后的分裂率等進行比較，認為在陰道超聲引導下通過卵泡穿刺和4ml的培養液沖洗所得卵母細胞的回收率及其質量是適合于進行IVF的，沒必要進行反復的卵泡沖洗。本研究結果也顯示D組(經過≥3次的卵泡沖洗獲得的卵母細胞 )的成熟卵率、受精率、卵裂率、優胚率及可用胚胎數較前3組低，差異有統計學意義(<0.05)。其原因可能為①獲卵困難可能預示卵的質量，胚胎質量下降，從而導致較差的IVF實驗室結局，進行卵泡沖洗獲得了一部分成熟度低的卵子，雖然在一定程度上提高了獲卵困難的獲卵數，但不能改變其卵子質量差的本質。②反復的卵泡沖洗延長了卵母細胞與外界環境的接觸，卵子對溫度、pH及滲透壓非常敏感，輕微的改變即引起不可逆的改變。

由此認為適宜的卵泡沖洗不影響卵子受精、卵裂及胚胎發育情況，是安全的。但反復的卵泡沖洗(≥3次以上)所獲得未成熟卵增多，胚胎質量差，因此沒必要進行反復的卵泡沖洗，建議將卵泡沖洗次數控制在3次以下。

[1]陳娟. 卵泡沖洗對來曲唑促排卵方案患者妊娠結局的影響[J].鄖陽醫學院學報, 2011,(2)：160-162.

[2]陳娟.來曲唑促排卵方案取卵術中卵泡沖洗安全性分析[J].中國優生與遺傳雜志,2011,19(11)：113-114.

[3]舒黎.雙腔取卵針患者IVF/ICSI-ET結局分析[J].江蘇醫學,2010,(24)：2895-2897.

[4]李媛.人類輔助生殖技術[M].北京：科學出版社， 2008, 11,93.

[5]Hussein E ，Br J Obetet Gynaecol.1992：814-844.

廣東省清遠市2013年科技計劃項目，項目編號44011120133183k。

王秋香,女,本科,主治醫師，研究方向：婦科生殖內分泌。

R713.7

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1007-8517(2014)11-0084-02

2014.04.10)