核桃青皮提取物通過氧化應(yīng)激作用抑制Lewis肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)

王 爽 于洪泉 王瑋瑤 溫 娜 紀(jì)鵬艷 金 宏 曹志友

(吉林醫(yī)藥學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心,吉林 吉林 132013)

細(xì)胞中的主要抗氧化酶有超氧化物歧化酶( SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH)和過氧化氫酶(CAT)等〔1〕，這些酶通過氧化還原反應(yīng)將機(jī)體中過多的過氧化物轉(zhuǎn)換為毒害較低或無(wú)毒害的物質(zhì)?，F(xiàn)代中藥研究表明，很多中藥成分都具有抗氧化作用，這對(duì)抗腫瘤治療十分重要。核桃青皮是民間密方白桃湯劑中的主要成分，本實(shí)驗(yàn)擬研究核桃青皮提取物通過氧化應(yīng)激作用抑制Lewis肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的作用抗制。

1 材料與方法

1.1主要試劑 DMEM培養(yǎng)基(Hyclone公司)，小牛血清和0.25%胰蛋白酶(Gibco公司)，核桃青皮粉劑(吉林醫(yī)藥學(xué)院自制)，四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)、二甲基亞砜(DMSO)和順鉑(美國(guó)Sigma公司)，GSH 、SOD 和CAT試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

1.2Lewis肺癌細(xì)胞的培養(yǎng) 從液氮中取出凍存的小鼠Lewis肺癌細(xì)胞，37℃水浴振蕩至融解，然后將細(xì)胞接種于75 cm2培養(yǎng)瓶中，加入10 ml含10%小牛血清的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液，將其置入37℃、5%CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，隔日換液。

1.3氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測(cè) 將生長(zhǎng)狀態(tài)良好的Lewis肺癌細(xì)胞以1×104/孔密度接種于24孔板中，培養(yǎng)過夜后加入不同濃度的核桃青皮提取物，空白對(duì)照組只加5%基礎(chǔ)培養(yǎng)基，培養(yǎng)48 h后離心取上清用于實(shí)驗(yàn)。按各試劑盒說明分別進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)說明所給公式分別計(jì)算GSH 的含量、SOD 和CAT 的活力。

2 結(jié) 果

SHG-44細(xì)胞在核桃青皮提取物作用48 h后，各給藥組細(xì)胞培養(yǎng)上清中GSH 含量明顯升高；SOD和CAT的活力也明顯升高；與空白對(duì)照組比較，2、4 μg/L核桃青皮提取物組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)。見表1。

表1 核桃青皮提取物對(duì)小鼠Lewis肺癌細(xì)胞GSH含量、SOD和CAT活力的影響

3 討 論

核桃青皮含有多種化學(xué)成分，具有多種藥理學(xué)作用。研究表明，核桃屬植物含有萘醌類、黃酮類、二芳基庚烷類、萜類、有機(jī)酸類等化合物，這些化合物或多或少都具有一些抗氧化作用〔2〕。核桃青皮乙醇提取物及乙酸乙酯提取物對(duì)菜籽油都有一定的抗氧化作用，其抗氧化效果隨劑量的增加而增強(qiáng)；并且乙醇提取物與維生素C、維生素E和檸檬酸都有較明顯的協(xié)同作用，抗氧化效果均好于單獨(dú)使用〔3〕。

民間秘方白桃湯劑具有一定的抗腫瘤作用，研究表明，白桃湯劑通過上調(diào)動(dòng)物體內(nèi)腫瘤壞死因子(TNF)-α水平和降低白細(xì)胞介素(IL)-6水平，同時(shí)提高動(dòng)物的免疫功能而達(dá)到對(duì)Lewis肺癌小鼠的明顯抑瘤作用；也可以通過抑制小鼠Lewis肺癌的血管生成、生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移來發(fā)揮其抗腫瘤作用〔4，5〕。在白桃湯劑方中，核桃青皮是主藥之一，在體外研究中，青核桃中的多種物質(zhì)對(duì)腫瘤細(xì)胞有誘導(dǎo)凋亡或直接殺死作用，其作用呈時(shí)間和劑量效應(yīng)〔6〕。體內(nèi)研究表明，核桃青皮水提浸膏對(duì)小鼠肉瘤180和小鼠實(shí)體型肝癌有明顯的抑制作用，抑制作用亦呈劑量依賴關(guān)系〔7〕，也可降低小鼠體內(nèi)脂質(zhì)過氧化程度〔8〕。

在此前的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，核桃青皮提取物在體內(nèi)外均可抑制腫瘤的生長(zhǎng)〔9〕，結(jié)合本文結(jié)果認(rèn)為，這可能是藥物通過增加GSH 含量、SOD和CAT的活力，發(fā)揮抗氧化作用使腫瘤的生長(zhǎng)受到抑制。

4 參考文獻(xiàn)

1姜宜成，沈成興.抗氧化酶基因轉(zhuǎn)染治療心血管疾病的研究進(jìn)展〔J〕．中國(guó)心血管雜志，2012;17(1)：70-2.

2姚煥英，唐靜成，張鞍靈，等.核桃屬植物化學(xué)成分及生物活性研究〔J〕.西北植物學(xué)報(bào)，2003;23(9)：1650-5.

3劉 艷，方 晨，曹 凱，等.新疆核桃青皮提取物抗氧化作用研究〔J〕.食品工業(yè)，2012;33(9)：114-6.

4曹志友，王 爽，歐陽(yáng)瑾，等.白桃湯劑治療Lewis肺癌小鼠的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009;20(4)：914-5.

5歐陽(yáng)瑾，曹志友，王 爽，等.白桃湯劑抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤的生長(zhǎng)及其血管生成的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009;20(10)：2476-7.

6劉瑞梅.青核桃及刺五加抗癌作用的藥理研究〔J〕.中草藥，1980;11(7)：213-4.

7王紹林，王紹東，劉今方.核桃楸青果皮的生藥鑒別和抗腫瘤作用研究〔J〕.藥學(xué)實(shí)踐雜志，1995;13(1)：40-2.

8蘭 英，趙 銳.核桃楸青果皮水提物對(duì)降低小鼠體內(nèi)丙二醛質(zhì)量濃度的研究〔J〕.北華大學(xué)學(xué)報(bào)，2000;6(1)：476-7.

9歐陽(yáng)瑾，曹志友，王 爽，等.核桃青皮提取物抑制小鼠Lewis肺癌生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009;20(11)：2749-50.