高危型HPV結合液基細胞學技術在宮頸癌前病變診斷中的應用

顏 萍 龔旭華

宮頸癌是婦科常見惡性腫瘤，具有極高的發病率和死亡率，僅次于乳腺癌[1]。近年來，發病年齡日趨年輕，若及早發現并治療，其治愈率可高達90%[2]。人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染是誘發宮頸癌發病和癌前病變的重要致病因子[3-4]。本文采用液基細胞學檢查(liquid-based cytology test，TCT)結合高危型HPV檢測宮頸癌前病變，診斷效果顯著，現將研究結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 納入標準

①無宮頸手術史；②無子宮切除手術史；③無盆腔放射治療史；④無宮頸上皮內病變史；④細胞學檢查無異常。

1.2 一般資料

納入2011年6月-2012年6月我院婦科門診及住院部收治的女性宮頸癌患者204例，年齡18～64歲，平均(36±7)歲。受孕0～6次，平均2次。生產0～4次，平均1次。臨床癥狀包括異常陰道出血，白帶增多，性交后出血等，婦科檢查顯示不同程度宮頸糜爛。

1.3 方法

1.3.1 主要儀器與試劑 TCT儀(新柏氏公司，美國)，SLC-2000B型電子陰道鏡(金科威實業有限公司，深圳)，HPV分型基因芯片試劑盒(凱普生物技術有限公司，深圳)，實時定量PCR儀(Bio-Rad，美國)。

1.3.2 液基細胞標本采集及處理 收集宮頸頸管和外口處脫落的細胞，盛入裝有細胞保存液的小瓶中。標本中的血液、黏液和炎癥細胞經程序化處理后與上皮細胞分離，再經由高精密度濾器過濾后轉移至經靜電處理的載玻片上。制作薄層細胞涂片，固定染色后封片。

1.3.3 HPV檢測 標本移入1.5 ml微量離心管，14 000 r/min離心5 min，吸棄上清液。細胞塊中加入裂解液，100 ℃水浴加熱15 min，14 000 r/min離心5 min。吸取上清液進行PCR擴增。分別檢測包括高危亞型和低危亞型在內的共21種基因型。

1.4 診斷標準

細胞學診斷標準：①正常范圍內；②鱗狀上皮細胞異常，包括意義不明的不典型鱗狀細胞(ASCUS)、不典型鱗狀細胞(ASCH)、低度鱗狀上皮內病變(LSIL)、高度鱗狀上皮內病變(HSIL)、鱗狀細胞癌(SCC)；③腺細胞異常，包括宮頸管原位癌(AIS)、不典型腺細胞(AGC)、傾向于腫瘤的不典型腺細胞。陽性指標：HPV DNA≥1.0 mg/L。細胞學>ASCUS者，行宮頸搔刮術，陽性結果：CINⅠ及以上病變。

1.5 統計學方法

采用SPSS 17.0統計學軟件進行數據分析，P<0.05表示顯著性差異，具有統計學意義。

2 結果

2.1 TCT檢測結果

138例患者顯示TCT陽性合并HPV感染。LSIL顯示HPV陽性40例(29.0%)，HSIL顯示HPV陽性10例(7.2%)，ASCUS顯示HPV陽性80例(58.0%)，SCC顯示HPV陽性8例(5.8%)。

2.2 TCT陽性時HPV高危型感染情況

138例TCT陽性標本中具有42例HPV高危型，陽性率為30.4%。LSIL顯示HPV高危12例(30.0%)，HSIL顯示HPV高危4例(40.0%)，ASCUS顯示HPV高危18例(22.5%)，SCC顯示HPV高危8例(100.0%)。不同類型標本HPV高危型感染率具有顯著性差異(P<0.05)。

2.3 TCT結合HPV檢測

由表1可見，TCT和HPV均為(-)時，則未發生高度病變。HPV陽性和TCT異常同時存在時，≥CINⅠ的檢出率為53.3%(48/90)。僅TCT異常而HPV(-)時，檢出率為47.8%(11/23)，P<0.05，具有統計學差異。

表1 TCT結合HPV檢測與組織病理檢查結果情況比較(例，%)

3 討論

宮頸癌是女性常見惡性腫瘤，嚴重威脅女性的健康。通過醫學干預可及早發現并治療癌前病變，并可有效預防宮頸癌發生[5]。研究證實，HPV感染是導致宮頸癌變的重要因子[6]。高危型HPV包括多種類型，如16、33、45、56、68等。描述性診斷系統(the bethesda system，TBS)分為正常范圍、ASCUS、SIL和SCC，SIL又分為LSIL和HSIL。為了細胞學和組織學相統一，LSIL即CINⅠ，較少發展為浸潤癌。HSIL即CINⅡ和CINⅢ，極有可能發展為浸潤癌[7]。高危型HPV病毒從感染到癌變全過程均可檢測，同時還可確定細胞形態變化的原因。高危型HPV檢測直接檢查病因，可將已患宮頸癌變或存在潛在風險的婦女篩選出來，是篩查宮頸癌變的重要手段[8]。

傳統的檢測方法，如巴氏涂片，有較高的假陰性率，原因可能包括：①病變細胞未被轉移至載玻片，多數細胞被丟棄；②涂片質量差，不正常細胞被過多的血液、黏液或炎細胞遮蓋[9-10]。近年來，巴氏涂片法已逐步被TCT技術所代替。采用TCT技術，標本取出后可立即放入細胞保存液中，充分保留了標本，從而避免常規涂片所致的細胞過度干燥[11]。此外，TCT技術還可避免涂片背景中大量白細胞、紅細胞等干擾因素，大大提高診斷率[12]。研究顯示，TCT檢測假陰性率僅為0.26%。TCT采用特制頸管刷收集脫落的細胞，幾乎保存了所有標本[13]。經程序化處理后制成細胞涂片，固定染色后顯微鏡下閱片診斷。該法易于觀察不正常細胞，且細胞核結構清晰，易于鑒定，大大降低了假陰性率，提高了靈敏度和特異性[14]。TCT檢測可有效判斷疾病是否進入臨床期。將二者聯合應用既可預防又可指導治療，對宮頸癌的防治具有及其重要的作用[15]。

本研究結果顯示，共138例患者顯示TCT陽性合并HPV感染，其中42例HPV高危型，陽性率為30%。不同類型標本HPV高危型感染率具有顯著性差異，LSIL顯示HPV高危12例(30%)，HSIL顯示HPV高危4例(40%)，ASCUS顯示HPV高危18例(23%)，SCC顯示HPV高危8例(100%)。TCT和HPV均為(-)時，則未發生高度病變。HPV陽性和TCT異常同時存在時，≥CINⅠ的檢出率為53.3%，僅TCT異常而HPV(-)時，檢出率為47.8%。由此可見，高危型HPV基因分型檢測結合液基細胞學檢查是極具價值的宮頸癌早期篩查方法，聯合檢測比單項檢查更可靠。

[1] Jemal A,Simard EP,Dorell C,et al.Annual report to the Nation on the Status of cancer,1975-2009,Featuring the Burden and trends in Human Papillomavirus (HPV)-Associated cancers and HPV Vaccination coverage levels〔J〕.J Natl Cancer Inst,2013,105(3): 175-201.

[2] 王澤曼,陳 玉,鄭建鵬,等.液基細胞學技術聯合高危HPV-DNA檢測對宮頸癌前病變的診斷效度〔J〕.中國病理生理雜志,2011,27(12):2414-2416.

[3] 李 貞,毛玲芝,李 屹,等.液基細胞學檢測及巴氏涂片在宮頸癌篩查中的應用比較〔J〕.實用醫學雜志,2011,27(23):4314-4316.

[4] 趙 勇,吳雪琴,黃家玲,等.宮頸液基細胞學檢查在宮頸癌篩查中的作用研究〔J〕.中國現代醫學雜志,2011,21(11):1370-1373.

[5] 朱福梅.宮頸薄層液基細胞學技術在宮頸癌篩查中的臨床意義〔J〕.中國婦幼保健,2012,27(5):780-781.

[6] 梁東霞,張彥娜.宮頸癌與 HPV 關系的研究進展〔J〕.實用癌癥雜志,2010,25(2):202-205.

[7] 陳 峪,曹江霞,曾 承,等.高危型HPV檢測與液基細胞學在宮頸癌前病變篩查中的效果比較〔J〕.中國實驗診斷學,2012,(9):1654-1656.

[8] 王 宇,蘇 嬌.液基細胞學聯合 HPV-DNA 檢測在宮頸癌篩查中的研究〔J〕.中國婦幼保健,2012,27(2): 307-308.

[9] 張敏鴿.高危 HPV 與宮頸癌發生的相關性〔J〕.實用癌癥雜志,2012,27(6):670-672.

[10] 陸潔清.TCT 聯合 HPV 檢測在宮頸癌前病變診斷中的價值〔J〕.實用癌癥雜志,2013,28(5): 550-552.

[11] 李桂玲.HPV-DNA 亞型檢測聯合液基細胞學對宮頸癌篩查 276 例分析〔J〕.中國婦幼保健,2012,27(17): 2586-2587.

[12] 國宏莉,李江華,李久蕊,等.液基細胞學聯合 DNA 檢測在宮頸癌篩查中的作用〔J〕.江蘇醫藥,2011,37(16): 1901-1903.

[13] 馮雪梅.聯合采用液基細胞學和人乳頭瘤病毒檢測對宮頸癌前病變診治的臨床價值〔J〕.現代預防醫學,2011,38(20): 4156-4156.

[14] 楊 娟,肖 蘭,楊繼洲,等.高危型HPV負載量與宮頸癌前病變發展的相關性〔J〕.實用癌癥雜志,2012,27(6):656-657.

[15] 鄭文華,李可瑜,唐璇霓,等.薄層液基細胞學聯合HPV檢測在宮頸癌篩查中的應用〔J〕.廣東醫學,2013,34(14):2189-2191.