食管癌術中胸腔沖洗液細胞學檢查及DNA倍體分析

何枝生 匡裕康 陳愛會 陰兵林 謝 梅 王東升 黃 建 郭昌瑩 程效良 王歡元

2007年4月2013年8月，我們將96例食管癌手術切除患者術中胸腔沖洗液行細胞學檢查及DNA倍體分析，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

96例均為我科2007年4月至2013年8月收治的行手術治療的食管癌患者，男性為71例，女性為25例，平均年齡為62.9歲。行左頸左胸二切口57例；左頸右胸腹正中三切口21例，右胸腹正中二切口8例，單純左開胸10例。

1.2 儀器和試劑

流式細胞儀為美國BCKMAN COULTER公司產品，DNA stain kit 為美國BCKMAN COULTER公司產品，免洗溶血素。

1.3 方法

開胸后即注入生理鹽水300 ml，用手輕輕攪拌，使生理鹽水與臟、壁層胸膜及縱膈胸膜充分接觸，特別注意肋膈角及胸腔頂部，用鹽水反復沖刷，同時將手術床調成頭高腳底位，用特制的小勺子將胸腔沖洗液取出，盡量避免使用注射器，以免細胞被破壞；同時開胸時止血，盡量減少沖洗液中的紅細胞，以免影響細胞學檢查結果；取出的胸腔沖洗液分成AB兩瓶，A瓶送細胞學檢查，B瓶送DNA倍體分析。將A瓶中胸腔沖洗液離心，3 000轉/min,每次3 min，共2～3次，棄去上清液，沉淀物2～4張，及時固定，HE染色，光鏡下觀察脫落細胞的形態。流式細胞儀測定DNA含量：800～1 000 r/min離心沉淀收集到的胸腔沖洗液，如為血性液體，用37 ℃預溫過的溶血劑溶解紅細胞，用pH 7.4 0.01 mol/L PBS洗滌2次，350目的濾網過濾除去細胞團塊，將細胞數調整至106個/ml；按照DNA stain Kit st說明書進行染色和固定，即時應用流式細胞儀檢測；不能即刻上機檢測的，用終濃度為70%的酒精固定，4 ℃冰箱保存，上機前再染色固定。

2 結果

96例食管癌中細胞學檢查9例找到癌細胞，流式細胞儀檢測發現21例異倍體。細胞學檢測陽性率及DNA異倍體檢出率與患者病程、年齡及性別無明顯相關性；但臨床分期越高，細胞學檢測陽性率及DNA異倍體檢出率越高，見表1。

表1 食管癌PLC細胞學檢查及DNA異倍體檢出情況/例

3 討論

開胸后未作任何胸內操作前胸腔是一個剛被打開封閉了很久的潛在腔隙，被覆蓋的間皮細胞及其內脫落細胞保持了術前在胸腔內的狀態，選擇此時沖洗胸腔，沖洗液中的細胞均來自胸膜腔，較客觀反映胸膜腔的真實情況。術中胸腔沖洗液細胞學檢查(pleural lavae cytology，PLC)在國內外有多篇報道[1-2]，但因受到取材等多種因素影響，檢出率偏低，結合流式細胞儀檢查，特異性及敏感性均提高。

關于胸腔沖洗液癌細胞來源有學者提出3種途徑：①各種創傷性操作及手術本身引起的癌細胞擴散；②癌細胞直接脫落；③淋巴源性。1975年Wang首次在胸膜上才淋巴孔，為胸腔沖洗液的研究提供了理論依據。食管粘膜下層具有豐富的毛細血管和毛細淋巴管，食管癌一旦侵犯到粘膜下層，就容易累及淋巴系統；由于胸膜下淋巴管有微小空隙與胸膜腔相通；本組病例中有1例早期患者胸腔沖洗液中找到癌細胞可能跟此有關。

部分術前無胸膜腔轉移征象患者胸腔沖洗液中細胞學陽性和(或)NNA異倍體陽性，提示胸膜腔受侵或胸膜播散或胸膜下淋巴網有腫瘤浸潤；此類患者為不完全切除；此類患者腫瘤侵襲性強，遠處轉移及局部復發的風險高。

綜上所述我們認為，食管癌術后應給予化療或胸腔內灌注化療，以提高患者生存率及改善患者生存質量。

[1] 謝 冬,周 曉,姜格寧，等.肺癌胸腔沖洗液的研究進展〔J〕.中華胸心血管外科雜志,2012,28(11):696-697,699.

[2] 王東升,匡裕康,謝 梅，等.肺癌術中胸腔沖洗液細胞學檢查及DNA倍體分析〔J〕.實用癌癥雜志,2008,23(6):605-606.