卵巢癌中核因子－κB與血管內皮生長因子及IL-2的表達

羅浩，劉四清

（川北醫學院附屬第二醫院婦產科，綿陽 621000）

卵巢癌是女性生殖器官常見的惡性腫瘤之一，卵巢癌的病死率在各類婦科腫瘤中較高。核因子－κB（NF-κB）是核轉錄調節因子，它在調控細胞增殖與凋亡的過程中發揮著重要作用，一般情況下，NF-κB在細胞胞漿中沒有活性，當化療藥物、射線等因素刺激時，即發生磷酸化、泛素化，NF-κB隨之活化并轉位入核，調節靶基因的轉錄。目前，已有學者［1，2］提出 NF-κB及其信號通路是腫瘤治療的一個策略。為此，本研究擬探討NF－κB通道的激活及其與腫瘤血管形成的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

收集本院2008年～2014年卵巢癌患者47例，年齡25～75歲。患者均接受了卵巢切除術，且均為首次發病，未接受過化療、放療及藥物治療。患者術后行病理檢測，Ⅰ期組12例，Ⅱ期組20例，Ⅲ/Ⅳ期組15例，另選正常卵巢20例為對照組。所有患者在我院手術室切取標本后，立即在腫瘤組織處取1 cm×1cm×1cm大小組織塊。

1.2 實驗試劑與器材

NF-κB抗體、IL-2抗體、血管內皮生長因子（VEGF）抗體、SABC免疫組化染色試劑盒和DAB顯色試劑盒等（所有試劑均購于上海研卉生物科技有限公司），Olympus光學顯微鏡、光學顯微鏡照相系統和Image-Pro Plus圖像分析系統等。

1.3 免疫組織化學方法（SABC）測定 NF－κB、IL-2和VEGF的表達

采用SABC法，步驟簡述如下：1）切片常規脫蠟至水，3%H2O2室溫孵育5～10min，以消除內源性過氧化物酶的活性；2）蒸餾水沖洗，PBS浸泡5 min；3）用山羊血清封閉液封閉，室溫孵育10min，倒去血清，0.02%PBS漂洗5min×3次；4）滴加一抗，其中P-JAK2（1∶500）、P-STAT3（1∶350）于4℃冰箱過夜，0.02%PBS漂洗5min×3次，再用PBS取代一抗用作空白對照；5）加入二抗，室溫孵育20min，0.02%PBS漂洗5min×3次；6）滴加試劑SABC（1∶100），室溫孵育2h，0.02%PBS漂洗5min×3次；7）DAB染色；8）自來水沖洗，蘇木素輕度復染，然后進行脫水、透明和封片。

1.4 統計學方法

采用Image-Pro Plus 5.0軟件分析 NF－κB、IL-2和VEGF蛋白陽性表達的累積光密度值（IOD），并計算平均值，以均數±標準差（±s）表示。采用SPSS 19.0統計軟件進行統計分析，組間均數兩兩比較采用獨立樣本的t檢驗，取檢驗水準α＝0.05。

2 結果

2.1 卵巢癌組織中 NF－κB、VEGF和IL-2蛋白的表達

對照組可見少量NF－κB、VEGF和IL-2蛋白的表達；與對照組比較，Ⅰ期組、Ⅱ期組和Ⅲ/Ⅳ期組NF-κB、VEGF和IL-2表達均增多（P＜0.05）；與Ⅰ期組比較，Ⅱ期組和Ⅲ/Ⅳ期組NF－κB、VEGF表達均增多（P＜0.05），IL-2表達均減少（P＜0.05）；與Ⅱ期組比較，Ⅲ/Ⅳ期組NF－κB、VEGF表達增多（P＜0.05），IL-2表達均減少（P＜0.05）（見表1、圖1）。

表1 各組NF-κB、VEGF和IL-2蛋白的表達（±s）

與對照組比較，▲P＜0.05；與Ⅰ期組比較，★P＜0.05；與Ⅱ期組比較，●P＜0.05

20 0.75±0.14 1.47±0.69 0.62±0.29Ⅰ期組 12 35.79±1.99▲ 30.92±2.07▲ 54.39±2.63▲Ⅱ期組 20 64.94±1.09▲★ 48.20±4.31▲★ 41.84±2.29▲★Ⅲ/Ⅳ期組 15 85.08±1.39▲★● 65.67±3.12▲★● 20.51±1.65 B VEGF IL-2對照組分組 n NF-κ▲★●

2.2 Ⅰ期組、Ⅱ期組和Ⅲ/Ⅳ期組NF-κB與VEGF、IL-2表達的相關分析

Ⅰ期組、Ⅱ期組和Ⅲ/Ⅳ期組NF-κB與VEGF呈正相關（r＝0.845，r＝0.763，r＝0.819，P＜0.05），與IL-2呈負相關（r＝-0.634，r＝-0.781，r＝-0.598，P＜0.05）。

3 討論

NF-κB是由大鼠B淋巴細胞核提取的一種能與免疫球蛋白K輕鏈增強子κB序列（GGGACTTTCC）特異性結合的核蛋白因子，它由NF-κB1（p50）、NF-κB2（p52）、RelB、RelA（p65）和c-Rel（Rel）組 成，其 中 NF－κB1 基 因 編 碼 NF－κB1（p50），NF-κB2基因編碼 NF-κB2（p52），RelA 基因編碼 RelA（p65），REL基因編碼c-Rel。NF-κB家族可分為兩類：1）含轉錄激活的區域，它可正向調節基因的表達，包括p65（RelA）、c-Rel（Rel）、RelB；2）不含轉錄激活的區域，它的二聚體可抑制轉錄，包括NF-κB1（p50）、NF-κB2（p52）。NF-κB 轉錄調節因子在細胞的生存、增殖、分化和凋亡，蛋白酶的降解，免疫反應、炎癥反應和應激反應以及氧化還原反應等方面 有轉錄 調節作 用［3－6］。通 常情況下，NF-κB與IκB或DNA結合為二聚體而存在，當多種因素刺激時，如細胞因子、病毒、雙鏈ANA、氧化劑、細菌脂多糖、多種抗原和紫外線照射等，通過信號轉導途徑使IκB磷酸化，然后通過蛋白水解酶作用發生降解，使NF－κB活化發揮調控作用［7］。本實驗研究結果顯示：Ⅰ期組、Ⅱ期組和Ⅲ/Ⅳ期組NF－κB的表達均較對照組增多（P＜0.05），說明卵巢癌患者瘤組織內NF－κB通道被激活；Ⅱ期組和Ⅲ/Ⅳ期組NF－κB的表達均較Ⅰ期組增多（P＜0.05），Ⅲ/Ⅳ期組NF-κB的表達較Ⅱ期組增多（P＜0.05），說明卵巢癌患者越到后期，NF-κB通道的表達越活躍。

圖1 免疫組化法檢測 NF-κB、VEGF、IL-2蛋白的表達

國內外學 者［8，9］研究表 明，NF-κB 對血管 的 形成有重要調節作用。常見的血管生長因子有堿性成纖維母細胞生長因子（bFGF）、酸性成纖維母細胞生長因子、VEGF、血管生成素、轉化生長因子α和β、腫瘤壞死因子α、血小板來源的內皮細胞生長因子、粒細胞集落刺激因子、胎盤生長因子、白細胞介素-8、肝細胞生長因子和增殖素等。血管抑制因子有血管抑素、內皮抑素、血小板因子-4、凝血栓蛋白、金屬蛋白酶組織抑制劑、轉化生長因子β、干擾素、胎盤增殖素相關蛋白、催乳素、bFGF溶解性受體蛋白、IL-2和可容性 VEGF受體（flt-1）等［10］。本實驗研究表明：1）Ⅰ期組、Ⅱ期組和Ⅲ/Ⅳ期組的VEGF、IL-2表達較對照組均增多（P＜0.05），說明卵巢癌組織中有血管的形成。2）Ⅱ期組和Ⅲ/Ⅳ期組VEGF的表達均較Ⅰ期組增多（P＜0.05），IL-2的表達較Ⅰ期組均減少（P＜0.05）；Ⅲ/Ⅳ期組VEGF的表達較Ⅱ期組增多（P＜0.05），IL-2的表達較Ⅱ期組均減少（P＜0.05），說明卵巢癌組織中血管生長因子越到后期表達越多，而血管抑制因子越到后期表達越少。3）Ⅰ期組、Ⅱ期組和Ⅲ/Ⅳ期組NF－κB與 VEGF呈正相關（P＜0.05），與IL-2呈負相關（P＜0.05），說明卵巢癌相關蛋白 NF-κB可通過上調VEGF的表達及下調IL-2的表達共同調節腫瘤血管的生成。

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