HPLC法測定感冒軟膠囊中胡薄荷酮的含量

牛麗彬

摘要：目的：建立HPLC法同時測定感冒軟膠囊中胡薄荷酮含量的方法。方法：采用Diamonsil C18 色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），用甲醇-水梯度洗脫，檢測波長250nm，柱溫35℃，流速1.0mL·min-1，進樣量10μL。結果：胡薄荷酮與其他雜質峰分離良好。胡薄荷酮在0.393～6.286μg·mL-1與峰面積呈良好的線性關系（r=

0.9998），胡薄荷酮平均加樣回收率為98.43%，RSD為0.80%（n=6）。結論：該方法操作簡便，結果準確，可作為感冒軟膠囊的質量控制方法。

關鍵詞：HPLC 感冒軟膠囊 胡薄荷酮 含量測定

感冒軟膠囊是衛生部藥品標準中藥成方制劑第六冊收錄的品種，主要由羌活、麻黃、桂枝、荊芥穗、防風等14味中藥材組成。用于外感風寒引起的頭痛發熱，鼻塞流涕，惡寒無汗，骨節酸痛，咽喉腫痛。荊芥穗是感冒軟膠囊中具有抗病原微生物、解熱、抗炎、鎮痛作用的成分，本文采用HPLC法測定感冒軟膠囊中胡薄荷酮的含量，獲得滿意效果，可用于產品質量控制。

1 儀器與試藥

Agilent1200 高效液相色譜儀；賽多利斯股份公司CPA225D型電子分析天平（德國）；KQ-300 DA型超聲波清洗器； UV-2550 型紫外分光光度儀（日本島津）。胡薄荷酮對照品；甲醇為色譜純；水為重蒸水。感冒軟膠囊由石藥中諾有限公司生產。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Phenomenex Luna C18（4.6mm×250mm，

5μm）；以甲酸溶液為流動相A，以水為流動相B，按表1中規定進行梯度洗脫；流速：1mL·min-1，柱溫35℃；檢測波長為250nm；進樣量10μL。

表1 梯度洗脫條件

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2.2 溶液的制備

2.2.1 制備對照品溶液

準確稱量胡薄荷酮對照品約1.965mg，置于50mL容量瓶中，加入甲醇溶解并稀釋待規定的刻度，并搖勻，即得39.3μg·mL-1胡薄荷酮儲備液；再取8mL胡薄荷酮儲備液，置50mL量瓶中，同時加入甲醇至規定的刻度，得到含胡薄荷酮6.288μg·mL-1的對照品溶液。

2.2.2 制備供試品溶液

精密稱定1g感冒軟膠囊內容物，并將其置于塞錐形瓶中，并精確加入20mL甲醇，稱定其重量，對其超聲處理30min，然后冷卻到室溫，再稱量其重量，通過甲醇補足減失的重量，并搖勻，然后用0.22μm有機系微孔濾膜對其進行濾過處理。

2.2.3 陰性對照液

對于除荊芥穗、薄荷以外的其余藥味，按照處方比例進行稱取，同時依據感冒軟膠囊制備工藝制成相應的陰性樣品，根據供試品溶液制備方法制成陰性對照液。

2.3 系統適用性實驗

分別取10μL對照品溶液、供試品溶液、陰性對照液，注入液相色譜儀，按“2.1”項下色譜條件測定，其色譜圖如圖1所示。

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A——對照品，B——供試品，C——陰性對照；1——胡薄荷酮

圖1

2.4 線性關系考察

分別精密吸取對照品溶液，并用甲醇進行稀釋，得到標準的溶液。含胡薄荷酮分別為0.393、0.786、1.572、3.144、6.288μg·mL-1，在液相色譜儀中注入10μL標準液，記錄相應的色譜圖。

2.5 精密度實驗

按上述色譜條件，精密吸取含胡薄荷酮為1.572μg·mL-1的對照品溶液10μL，連續重復進樣5 次，記錄胡薄荷酮峰面積值分別為40.8，40.8，41.3，40.9，41.5，平均值為41.1，RSD為1.07%（n=5）。

2.6 重復性實驗

取本品（批號0311428）內容物，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按色譜條件檢測，精密吸取供試品溶液10μL，注入色譜儀，共進樣5次，記錄胡薄荷酮峰面積值分別為62.3，61.7，61.9，61.8，62.1，平均值為62.0，RSD為0.55%（n=5）。結果表明，本方法重復性良好。

2.7 穩定性實驗

取本品（批號0311428）內容物，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按色譜條件，精密吸取供試品溶液10μL，分別在0，4，8，12，16，24h進樣。

2.8 回收率實驗

取6份已知含量的感冒軟膠囊（批號0311428）內容物約0.5g，準確稱量，分別加入到編號1～6的具塞錐形瓶中，分別精密加0.4mL、濃度0.0393mg·mL-1的胡薄荷酮對照品儲備液，然后加入19.6mL甲醇，按照供試品溶液制備方法，計算回收率。平均回收率如表2所示：

表2 回收率試驗結果

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2.9 樣品含量測定

分別稱取6批不同批號的感冒軟膠囊內容物約1g，精密稱定，用“2.2.2”方法制備，用“2.1”方法測定感冒軟膠囊中胡薄荷酮的含量；結果見表3。

表3 樣品測定結果

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3 討論

3.1 檢測波長的選擇

取對照品溶液，在200～400nm范圍內掃描，胡薄荷酮在250nm有最大吸收。故采用250nm作為測定波長。

3.2 流動相的選擇

綜合考慮，采用梯度洗脫，流動相中甲醇的濃度先低后高，使胡薄荷酮出峰時間23min左右，分離度好，靈敏度高。

本試驗方法測定了薄荷與荊芥穗中的胡薄荷酮的含量，作為檢測感冒軟膠囊的質量標準，為感冒清熱顆粒的質量檢測提供了一種簡便、有效的方法。

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