東祁連山高寒草地土壤產漆酶真菌的篩選、鑒定及產酶條件的初步研究

蘆光新，王軍邦， 陳秀蓉，楊成德，薛莉

(1.青海大學農牧學院草業科學系，青海 西寧 810016；2.中國科學院地理科學與資源研究所，北京 100094；3.甘肅農業大學草業學院 草業生態系統教育部重點實驗室 中-美草地畜牧業可持續發展研究中心，甘肅 蘭州 730070)

漆酶(Laccase EC 1.10.3.2)，即對苯二酚，又名酚酶，多酚氧化酶等[1]。就結構而言，漆酶是一種含銅的糖蛋白氧化酶，也稱為多銅氧化酶；就屬性而言，它和植物中的抗壞血酸氧化酶、哺乳動物的血漿銅藍蛋白同屬藍色多銅氧化酶(blue multi-copper oxidase)家族[2]；就功能而言，漆酶是木質素降解酶之一，與木質素過氧化物酶(lignin peroxidase，LiP)和錳過氧化物酶(manganese dependent peroxidase，MnP)共同構成木質素降解酶系[3]。

漆酶作為生物代謝產物，在生物體內參與應激防御反應、細胞壁重建、形態發生、與宿主相互作用、腐殖質的代謝更新等生物學功能；在體外漆酶可催化多種酚類和芳香胺類化合物的氧化，降解多環芳烴[4]。漆酶氧化木質素中的酚型單元形成苯氧自由基，從而導致木質素相關結構的降解和轉化，在合適的氧化還原介體存在時，漆酶還可催化氧化非酚型的木質素模型化合物[5-7]。可見，漆酶在木質素的生物降解有重要應用前景。除此之外，漆酶被廣泛應用于工業氧化處理過程中，例如各類漂白、生物去污、乙醇生產、生物傳感器、生物燃料電池等[8]，在食品工業、制漿和造紙工業、紡織工業、土壤的生物修復等領域，備受研究者和生產加工者的關注[9]。但是，由于天然來源的生物漆酶產量低、價格昂貴，很難滿足市場需求，漆酶的規模化和產業化相應受到限制，因此，尋求產漆酶的生物資源是擺在人們面前亟待解決的問題。

已有的研究證實，漆酶存在于植物、微生物、動物、昆蟲的質體的各種器官或組織中。漆酶由Yoshi[10]首次在紫膠漆樹(Rhusverniciflua)的滲出液中發現的, 隨后人們發現微生物(真菌、細菌)、動物、昆蟲也能分泌這種酶。植物來源漆酶主要出現在植物木質部，葉子、根中也有，植物漆酶主要參與愈傷組織形成、木質化等過程[11]。動物體中發現的漆酶很少，報道的有豬腎和麻蠅(Phormiacegina、Muscadomestica、Luciliasericata)、煙草天蛾(Manducasexta)、綠頭蒼蠅(Calliphoravicina)、蚊子和雙翅目的遷移類蝗蟲等[12-14]。相對于植物和動物來講，微生物漆酶來源相對豐富，主要分為真菌來源和細菌來源,已知在多種真菌菌株分泌物中都檢測到了漆酶的活性[15], 值得一提的是，真菌產漆酶具有以下幾個優點：1)真菌分泌的漆酶都是胞外酶，使得漆酶的分離純化相比胞內酶而言稍顯容易，而且在胞外的穩定性也較好；2)產酶效率高, 產生漆酶酶系結構較合理, 相互間可發生強烈的協同作用; 3)可同時產生許多纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶、淀粉酶等，這些酶的協同效應對降解木質素具有重要的意義。因此，真菌漆酶的研究備受矚目，成為研究的熱點[16]。

由于漆酶巨大的應用價值, 因此進行漆酶產生菌的分離篩選一直是漆酶研究的熱點之一。到目前為止，已有從土壤中分離篩選產漆酶真菌的報道[17-20]，但高寒草地土壤中產漆酶菌株的篩選鮮有報道。研究發現，東祁連山高寒草地土壤微生物多樣性較為豐富[21]，并且草地生態系統土壤微生物與其生態環境協同進化, 形成的一種適應性機制[22]。以高寒草地土壤分離出的56個真菌菌株為研究對象，選用與漆酶作用的幾種底物為選擇性培養基，并通過測定漆酶活力，篩選高寒草地土壤中的產漆酶菌株，并對篩選出的產漆酶菌株進行了產酶條件的研究，旨在為進一步工業化的開發和應用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

供試的56個真菌菌株由本課題組從東祁連山高寒草地土壤中分離篩選獲得，保存于4℃冰箱。實驗時間為2012年2-5月。

1.2 培養基

1.2.1菌株活化、保存培養基 PDA培養基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂15 g，蒸餾水1000 mL，pH自然，用于菌株的活化、復壯。

1.2.2產漆酶菌株篩選培養基 愈創木酚-PDA培養基：PDA 培養基滅菌后添加經無菌過濾器除菌的愈創木酚-乙醇溶液, 使愈創木酚的最終濃度為3 mmol/L。

α-萘酚-PDA培養基：以α-萘酚替代愈創木酚。

愈創木酚為底物的選擇性培養基：NaNO32 g，K2HPO41 g，KCl 0.5 g，MgSO40.5 g，FeSO40.01 g，愈創木酚 10 g，瓊脂 10 g，蒸餾水1000 mL。pH用稀鹽酸調制6.0～7.0。

鄰苯二酚為底物的選擇性培養基：NaNO32 g，K2HPO41 g，KCl 0.5 g，MgSO40.5 g，FeSO40.01 g，鄰苯二酚 10 g，瓊脂 10 g，蒸餾水1000 mL。pH用稀鹽酸調制6.0～7.0。

鄰苯甲苯胺為底物的選擇性培養基：NaNO32 g，K2HPO41 g，KCl 0.5 g，MgSO40.5 g，FeSO40.01 g，鄰苯甲苯胺 10 g，瓊脂 10 g，蒸餾水1000 mL。pH用稀鹽酸調制6.0～7.0。

1.2.3液體產酶培養基 NaNO32.5 g，KH2PO41 g，CaCl2·6H2O 0.1 g，MgSO40.3 g，NaCl 0.1 g，FeCl30.01 g，油菜秸稈粉0.5 g，蒸餾水1000 mL，pH用稀鹽酸調制6.0～7.0。

1.3 研究方法

1.3.1產漆酶真菌的初步篩選 將活化的菌株接種于愈創木酚-PDA培養基和α-萘酚-PDA培養基, 25℃培養，定時觀察菌落生長和菌落周圍顏色深淺變化情況。選出能在愈創木酚-PDA培養基和α-萘酚-PDA培養基產生褐色氧化帶的陽性菌株，分別接種于以愈創木酚、鄰苯二酚、鄰苯甲苯胺為唯一碳源的選擇性培養基，25℃培養，每天定時觀察菌落形態的同時, 測量菌落直徑、褐色氧化帶變色圈的直徑, 記錄變色圈顏色深淺，以此作為定性指標，判斷菌株產漆酶的情況。

1.3.2粗酶液的制備及漆酶活力測定 將篩選出的菌株接種于已滅菌的盛有50 mL發酵產酶培養基的150 mL錐形瓶中，以油菜秸稈粉為底物，不接菌為對照，于25℃，150 r/min震蕩培養7～10 d，每個處理重復3次。培養結束后，在無菌操作的條件下，吸取5 mL上清液，于4℃，10000 r/min，離心10 min，取上清液制備粗酶液。

酶活力測定方法，以愈創木酚為漆酶底物，按照王劍鋒等[23]的方法進行測定，1個酶活單位(IU)定義為1 min內氧化1 μmol 愈創木酚所需要的酶量。

1.3.3rDNA-ITS分子鑒定 真菌rDNA-ITS的分子鑒定方法參考相關文獻[24]。

1.3.4產酶條件的研究 應用搖瓶液體發酵的方法，以油菜秸稈粉為底物，分別在不同培養條件下，測定漆酶酶活力。

1.4 數據處理及分析

所有數據均用Microsoft Excel 錄入并作圖，采用DPS 6.55進行數據分析。

2 結果與分析

2.1 產漆酶菌株的初步篩選結果

從56個供試菌株在α-萘酚-PDA培養基和愈創木酚-PDA培養基上的培養結果來看，菌株編號為1.9、2.1a、310b、301g、2.1c、3.7c、無孢、2.3a、2.4d、10a、H-待定、W-QLZ14等菌株能夠在愈創木酚-PDA培養基上產生褐色的氧化帶，菌株編號為1.9、2.1a、310b、301g、2.3a、2.4d、10a、H-待定、W-QLZ14等菌株能夠在α-萘酚-PDA培養基上產生褐色的氧化帶。

2.2 供試菌株在α-萘酚-PDA和愈創木酚-PDA篩選培養基上出現褐色氧化帶的時序

由表1可以看出，在α-萘酚-PDA培養基上，接種后24 h，菌株1.9、2.1a、310b、W-QLZ14周圍出現褐色氧化帶，接種后48 h，菌株 H-待定周圍出現褐色氧化帶，接種72 h后，菌株301g、2.1c、2.3a、2.4d周圍出現褐色氧化帶。在愈創木酚-PDA培養基上，接種后24 h，菌株1.9、2.1a、310b、2.1c、2.3a、H-待定、W-QLZ14周圍出現褐色氧化帶，接種48 h后，菌株301g、2.4d、10a周圍出現褐色氧化帶，接種72 h后，菌株3.7c和無孢周圍出現褐色氧化帶。由此可見，不同菌株在不同底物作為誘導劑的培養基上出現褐色氧化帶的時間不同，有的菌株產酶較早，有的菌株產酶較晚。另外，菌株3.7c、無孢和10a能在GUA+PDA培養基上產生褐色氧化帶，而不在α-萘酚+PDA培養基上產生褐色氧化帶。

2.3 供試菌株在3種篩選培養基上的生長情況及褐色氧化帶

將篩選出的菌株，分別接種于以愈創木酚、鄰苯二酚、鄰苯甲苯胺為底物的選擇性培養基上，由圖1可以看出，11個菌株在3種底物的培養基上的菌落直徑以及出現褐色氧化帶直徑不同，并且褐色氧化帶顏色的深淺程度也不同。

表1 供試菌株在α-萘酚PDA培養基和愈創木酚-PDA培養基出現褐色氧化帶的時序Table 1 The appear timing of brown oxidation zone of strains on the α-naphthol PDA medium and GUA-PDA medium

注：+表示出現褐色氧化帶。

Note：“+” indicates the emergence of brown oxidation zone.

圖1 供試菌株在3種選擇性培養基上的生長情況及出現的氧化帶Fig.1 The growth status and emergence brown oxidation zone of strains on three different selective mediumA:愈創木酚培養基Guaiacol selective medium；B:鄰苯二酚培養基Catechol selective medium；C:鄰甲苯胺培養基O-toluidine selective medium.

表2 供試菌株在選擇性培養基上的菌落直徑和氧化帶直徑Table 2 Colony diameter and oxidation zone diameter of strains on three different selective mediumcm

注：表中列出的氧化帶直徑一欄中，前面的數字表示氧化帶直徑, 括號中的“+” 表示顏色的深淺程度，“-”表示沒有產生氧化帶；菌落直徑一欄中，括號中的“+”表示能生長，“-”表示不能生長，數字表示菌落直徑大小。

Note：The table lists the oxidation zone and colony diameter，the previous number indicates oxidation zone diameter in the column of oxidation zone，“+” indicates color depth，“-” indicates there did not produce the oxidation zone in the brackets；In the column of colony diameter，“+” indicates strains can grow on the medium，“-” indicates strains did not grow，the previous number indicates colony diameter.

由表2可以看出，在愈創木酚培養基上，除Fsp9和H-待定2個菌株不能生長之外，其余9個菌株均能生長，并且產生褐色氧化帶，1.9、310b、2.3a、2.4d 4個菌株的菌落直徑較大，褐色氧化帶直徑較大，氧化帶的顏色較深。在鄰苯二酚培養基上，1.9、310b、301g、2.1c、2.1a、W-QLZ14 6個菌株能夠生長，并且產生褐色氧化帶，310b和2.1a的褐色氧化帶直徑較小，而1.9、301g、2.1c、W-QLZ14褐色氧化帶直徑較大。在鄰苯甲苯胺培養基上，菌株2.3a不能生長外，其余10個菌株均能生長。310b、2.4d、10a 3個菌株產生褐色氧化帶的直徑大，顏色較深，菌株301g和H-待定產生的褐色氧化帶的顏色較淺。

2.4 產漆酶酶活菌株的復選結果

測定漆酶酶活力的結果表明，以油菜秸稈為底物，液體搖瓶發酵后，只有菌株310b能夠產生漆酶，其余菌株檢測不到漆酶酶活。

2.5 產漆酶菌株的分子鑒定結果

將該序列在GenBank 中進行BLAST同源性比較，發現與GenBank中報道的1株Marasmiustricolor(登錄號：JN943601)同源性達到99%以上。為了進一步確定目標菌株的分類地位，采用Neighbor-Joining 法(圖2A)和UPGMA 法(圖2B)分別構建系統發育樹，結果顯示，菌株310b在2種系統發育樹中的結果一致，即與登錄號為JN943601的菌株的親緣關系最近，支持率高達99%～100%。通過rDNA-ITS 序列分析，菌株310b初步鑒定為Marasmiustricolor。

圖2 菌株310b系統發育樹的構建Fig.2 Construction of phylogenetic tree of strain 310b A、B分別為基于Neighbor-Joining法和UPGMA法的系統發育樹。A, B is phylogenetic tree based on Neighbor-Joining method and the UPGMA method respectively.

2.6 產漆酶條件的研究結果

2.6.1溫度對菌株310b產漆酶的影響 菌株310b在15～35℃范圍內可以產漆酶，15～25℃隨溫度上升，漆酶活力增加，25℃時產漆酶活力最大，且差異極顯著(P<0.01)，25～35℃范圍內，隨溫度上升，漆酶活力減少；在20～28℃范圍內產酶活力達80%以上(圖3)。

2.6.2初始pH值對菌株310b產漆酶的影響 初始pH值對菌株310b產漆酶活力有影響，較小的pH值有利于產酶，pH=4.0時漆酶活力最大，且差異極顯著(P<0.01)，之后隨pH的增加，產漆酶活力呈下降趨勢，但pH值在5.0～9.0范圍內，漆酶活力下降幅度不大(圖4)。我們推測，菌株310b分泌的漆酶有可能是一種偏酸性酶。

圖3 溫度對310b 產漆酶的影響Fig.3 The effect of temperature on laccase

圖4 pH對310b 產漆酶的影響Fig.4 The effect of pH value on laccase

2.6.3C源對菌株310b產漆酶的影響 以油菜秸稈粉作為唯一的碳源，分別添加葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、可溶性淀粉、糊精、D-半乳糖、D-木糖、D-果糖、羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)進行搖瓶液體發酵, 由圖5可以看出，不同碳源誘導菌株310b產漆酶活力不同，其中添加蔗糖可以促進菌株310b分泌漆酶，但差異不顯著，而添加其他碳源會抑制菌株310b產漆酶的活力(圖5)。

2.6.4N源對菌株310b產漆酶的影響 不同氮源對菌株310b產漆酶水平的影響結果如圖6，可以看出分別以硫酸銨、酒石酸銨、硝酸鈉、磷酸銨、蛋白胨、L-酪氨酸、DL-苯丙氨酸、L-賴氨酸、尿素作為不同氮源誘導菌株310b產漆酶活力不同，9種氮源中，蛋白胨最有利于菌株310b分泌漆酶，誘導漆酶活力最高，其次為L-酪氨酸和L-苯丙氨酸，尿素誘導產漆酶活力最低。

圖5 C源對3.10b產漆酶的影響Fig.5 The effect of C-source on laccase

A:葡萄糖Glucose;B:蔗糖Saccharose;C:麥芽糖Maltose;D:可溶性淀粉Soluble starch;E:糊精Dextrin;F:D-半乳糖 D-galactose;G:D-木糖 D-xylose;H:D-果糖 D-fructose;I:羧甲基纖維素鈉CMC-Na;J:油菜秸稈粉Rape straw powder.

圖6 N源對3.10b產漆酶的影響 Fig.6 The effect of N-source on laccase laccase

A:硫酸銨Ammonium sulfate;B:酒石酸銨Ammonium tartrate;C:硝酸鈉Sodium nitrate;D:磷酸銨Ammonium phosphate;E:蛋白胨 Peptone;F:L-酪氨酸 L-tyrosine;G:DL-苯丙氨酸DL-phenylalanine;H:L-賴氨酸 L-lysine;I:尿素Urea.

圖7 非營養有機物對310b產漆酶的影響Fig.7 The effect of non nutrient organic on laccase A:吲哚乙酸 Indoleacetic acid;B:鄰甲苯胺 O-Tolidine;C:鄰苯二酚 Catechol;D:α-萘酚α-naphthol;E:單寧酸 Tannin;F:愈創木酚 Guaiacol;G:吐溫-80 Tween 80;H:對照CK.

2.6.5非營養有機物對菌株3.10b產漆酶的影響 分別在產酶培養基中添加1%的吲哚乙酸(In-doleacetic acid)、愈創木酚(Guaiacol)、鄰甲苯胺(O-Tolidine)、鄰苯二酚(Catechol)、α-萘酚(α-naphthol)、單寧酸(Tannin)、吐溫-80(Tween 80)，考察它們對菌株310b漆酶合成的影響，結果表明,鄰甲苯胺、α-萘酚和吐溫-80促進菌株310b漆酶的合成；愈創木酚、鄰苯二酚、單寧酸、吲哚乙酸抑制菌株產酶，其中吲哚乙酸抑制作用最強烈(P<0.01)(圖7)。

2.6.6Cu2+對菌株310b產漆酶的影響 在產酶培養基中添加一定量的CuSO4·5H2O，均有利于菌株產酶。結果顯示，培養基中添加CuSO4·5H2O，在0.001～0.025 g/L范圍內，隨Cu2+增加，產漆酶活力增加，0.025 g/L時產酶活力最大(圖8)。

2.6.7接種量對菌株310b產漆酶的影響 不同接種量對菌株310b產漆酶活力不同，隨著接種量的增加，誘導漆酶活力增加(圖9)。圖9中，S1～S5分別表示不同的接種量，以在PDA平板上將培養7～10 d的供試菌用6 mm直徑的打孔器切取1個菌餅(6 mm)為標準，按1，2，3，4，5個菌餅分別接種處理。

圖8 Cu2+對310b產漆酶的影響Fig.8 The effect of Cu2+ on laccase

圖9 接種量對310b產漆酶的影響Fig.9 The effect of incolum size on laccase

圖10 轉速對310b產漆酶的影響Fig.10 The effect of rotation speed on laccase

圖11 天然碳源對310b產漆酶的影響Fig.11 The effect of natural C-source on laccase A:燕麥秸稈Oat straw;B:油菜秸稈Rape straw;C:玉米秸稈Maize straw;D:天然草地枯落物Litter of natural grassland;E:芨芨草秸稈Achnatherum splendens straw.

2.6.8轉速對菌株310b產漆酶的影響 分別在0，60，90，120，150，180 r/min不同轉速條件下考察對菌株310b產漆酶活力，由圖10可以看出，從60～180 r/min隨著轉速的增加，漆酶活力增加，在轉速為180 r/min的條件下，菌株310b產漆酶活力達到最大(圖10)。

2.6.9天然碳源對菌株310b產漆酶的影響 天然草地枯落物最適于菌株310b產漆酶，其次為油菜秸稈、燕麥秸稈和芨芨草秸稈產酶量較低。玉米秸稈誘導菌株產漆酶活力最低(圖11)。

2.6.10底物添加量對菌株310b產漆酶的影響 不同秸稈添加量對菌株310b產漆酶活力不同，從0～1 g隨著秸稈添加量的增加，漆酶活力增加；1～2 g范圍內，隨著秸稈添加量的增加，漆酶活力減小(圖12)。

3 討論

3.1 產漆酶真菌的篩選

愈創木酚既是漆酶的氧化底物又是漆酶生物合成的誘導劑，α-萘酚對于漆酶的產生具有一定促進作用，以愈創木酚-PDA培養基和α-萘酚-PDA培養基結合使用可以保證所選出的產酶菌株是漆酶生產菌種, 而非愈創木酚氧化酶的生產菌株[18]。本研究根據漆酶本身的性質、催化底物以及微生物生產漆酶的特性，設計初步篩選產漆酶菌株的選擇性培養基平板, 根據菌體生長及菌落大小、漆酶催化氧化還原反應產生的變色圈直徑平均值及其變色圈顏色深淺程度，進行產漆酶菌株的篩選。實驗中發現, 不同菌株在愈創木酚-PDA培養基和α-萘酚-PDA培養基2種平板上的顯色反應有差別，這可能是在培養過程中這2種底物對不同菌株漆酶生物合成的誘導作用不同，這種現象的產生除了與菌株所合成漆酶的產量、活力和類型有關外, 可能還與不同菌株所產的漆酶對于愈創木酚和α-萘酚的催化專一性差別有關。另外，不同菌株在兩種平板培養基上的生長速度不同，因此漆酶催化氧化還原反應產生的變色圈直徑與菌落大小沒有必然的相關性。同一菌株在不同底物的平板培養基上的顯色圈相對大小不完全相同, 但大多數菌株呈現出了較好的一致性，在變色圈所顯色澤和強度方面, 所有顯色菌株在同種選擇培養基的不同平行平板中都能顯示出幾乎一致的色澤與直徑大小, 說明選擇平板的穩定性和高度可重復性。

圖12 秸稈添加量對310b產漆酶的影響Fig.12 The effect of straw amount on laccase

3.2 發酵條件對產酶活力的影響

環境因素諸如溫度、pH值、碳源、氮源等顯著影響真菌漆酶的產生，影響效果因菌株而異[25]。在本實驗中，菌株310b在25℃時產漆酶活力最大，pH 4.0時漆酶活力最大，蔗糖和蛋白胨分別為最有利于漆酶合成的碳、氮源，鄰甲苯胺、α-萘酚和吐溫-80促進菌株310b漆酶的合成；愈創木酚、鄰苯二酚、單寧酸、吲哚乙酸抑制菌株產酶，其中吲哚乙酸抑制作用最強烈α-萘酚和吐溫-80對菌株產酶沒有明顯影響；愈創木酚、單寧酸、吲哚乙酸抑制菌株產酶，其中吲哚乙酸抑制作用最強烈。隨Cu2+增加，產漆酶活力增加，0.025 g/L時產酶活力最大。隨著接種量的增加，誘導漆酶活力增加。從60～180 r/min隨著轉速的增加，漆酶活力增加。從0～1 g隨著秸稈添加量的增加，漆酶活力增加；1～2 g范圍內，隨著秸稈添加量的增加，漆酶活力減小。不同來源漆酶的最適溫度、最適pH 值有差異, 無機離子對其影響也不完全相同, 這說明不同來源漆酶的化學組成可能不同; 所以在分離和篩選高酶活菌株時應考慮這些因素的影響。

3.3 產漆酶真菌的種類

據報道，產漆酶真菌不下于1000 種，而且超過100 種真菌漆酶，已經從相應的培養物中被純化，并對其理化特性做了深入研究[15]。有許多報道稱子囊菌綱(Ascomycetes)的許多真菌產漆酶，例如Gaeumannomycesgraminis、Magnaporthegrisea、Ophiostomanovoulmi、Melanocarpusalbomyces、Monocilliumindicum、Neurosporacrassa、Podosporaanserina等，但是沒有做系統研究，很難確定具體有多少種子囊菌產漆酶。此外，漆酶在擔子菌綱(Basidiomycetes)和半知菌綱(Deuteromycetes)中也分布廣泛，例如研究較多的白腐菌、革菌屬、栓菌屬、蜜環菌屬、多孔菌屬、鬼傘屬等，而漆酶產量普遍較高的主要是彩絨革蓋菌[26]。近年來關于真菌產漆酶的報道較多，如：血紅密孔菌(Pycnoporussanguineus)[27]、Paecilomycesmajor[28]、Penicilliumsimplicissimum[29]、煙管菌(Bjerkanderaadstar)[30]、Trichodermasp. LaTr01[31]、Sopharajaponica[32]、Geotrichumcandidum[33]、Trichodermaviride[34]、Trichodermasp. Z-3[35]、Trichodermasp.[36]、Curvularialunata[37]、PolyporusarculariusA08[23]、TrichodermaasperellumW03[38]等。研究內容集中在產酶菌株的篩選和發酵條件的優化，從東祁連山高寒草地土壤中篩選到了1株產漆酶菌株，經rDNA-ITS 序列分析結果，初步鑒定為：小皮傘屬(Marasmiustricolor)。小皮傘屬真菌(MarasmiusFr.)在分類學上隸屬于擔子菌門(Basidiomycota)、擔子菌綱(Basidiomycetes)、傘菌亞綱(Agaricomycetidae)、傘菌目(Agaricales)、小皮傘科(Marasmiaceae)[39]，其地生、木生或生于林中的枯枝落葉上，在我國29個省區有分布[40]。目前為止尚未見到小皮傘屬真菌產漆酶的相關報道。

盡管漆酶的應用價值廣，但是植物、動物、昆蟲等天然來源的漆酶產量低、價格昂貴，而真菌大多在惡劣環境下才會啟動漆酶的表達系統。依賴野生天然來源的漆酶生產，難以滿足工業需求，漆酶的產業化受到限制。隨著分子生物學的發展，漆酶的異源表達系統的構建和利用為漆酶工業化大規模生產提供了一條新的可發展途徑，但是，為實現這一目標，必須明確產漆酶真菌的資源。因此，從不同環境中分離和篩選產漆酶真菌，挖掘產漆酶真菌資源，仍然是人們繼續努力的方向和目標。