海洋星蟲多糖膠囊的穩定性研究

劉玉明++錢甜甜（等）

[摘要] 目的 研究海洋星蟲多糖膠囊的穩定性。 方法 按照《中國藥典》2005年版二部附錄原料藥與藥物制劑穩定性試驗指導原則，以膠囊劑重點考察項目性狀、鑒別、水分、崩解時限、微生物限度、含量測定為評價指標，進行加速試驗和長期試驗。 結果 三批樣品經過6個月的加速試驗和12個月的長期試驗，各項指標均符合質量標準規定。 結論 海洋星蟲多糖膠囊藥物性質穩定。

[關鍵詞] 海洋星蟲多糖膠囊；穩定性；加速試驗；長期試驗

[中圖分類號] R284 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2014）10（a）-0004-04

Investigation on stability of Sipunculus nudus Polysaccharide Capsules

LIU Yuming1 QIAN Tiantian1 JIANG Dingwen1 HE Ying1 SHEN Xianrong1 JIANG Shuqi2

1.Department of Radiation Protection Medicine， Naval Medical Research Institute， Shanghai 200433， China； 2.In-vitro Metabolism Laboratory of Traditional Chinese Medicine， Zhejiang Traditional Medicine University， Zhejiang Province， Hangzhou 310053， China

[Abstract] Objective To investigate the stability of Sipunculus nudus Polysaccharide Capsules. Methods According to the stability testing of pharmaceutical preparations and guiding principles in Appendix of Chinese Pharmacopeia （2005 edition， 2 volume）， with the major investigation items of character， identification， moisture， disintegration time， microbial limit test， the content of polysaccharide as the evaluation indexes， the accelerated test and long-term test were performed. Results All indexes in 3 batches of samples after 6-month accelerated testing and 12-month long trial were in line with the quality standard requirements. Conclusion The drug properties of Sipunculus nudus Polysaccharide Capsules are stable.

[Key words] Sipunculus nudus Polysaccharide Capsules； Stability； Accelerated test； Long-term test

海洋星蟲多糖膠囊是以海洋星蟲多糖[1]為原料制備而成的一種硬膠囊，前期研究表明海洋星蟲多糖在抗輻射[2]、抗疲勞[3]、提高免疫力[4]、促智[5]等方面具有顯著的功效。藥品穩定性是其質量評價的重要指標之一，為了更好地控制藥品質量，保證臨床用藥的安全性、有效性，本研究參照《中國藥典》藥物穩定性試驗指導原則[6]，對海洋星蟲多糖膠囊的穩定性進行探討，旨在為該膠囊的有效期確定提供依據，并為其新藥申報提供必要的實驗方法和數據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

藥物四用崩解儀（上海黃海藥檢儀器廠）；萬分之一電子天平（上海天平儀器廠）；分光光度計（上海奧譜勒儀器有限公司，759型號，編號10010510）；PH計（型號PHS-3E，上海精科）；旋轉蒸發器（上海申勝生物技術有限公司），GL-21M離心機（上海市離心機械研究所），膠體磨JM-13013（廊坊通用機械廠），電熱恒溫水浴鍋（上海醫療器械五廠），85-2型恒溫磁力攪拌器（上海司樂儀器廠）。

1.2 試藥

海洋星蟲多糖膠囊（自制，批號090820、090915、090925）；蒽酮（AR級，中國醫藥集團上海化學試劑公司，批號20080618）；95%醫用乙醇（上海勝德化工有限公司，批號F20080921）；氫氧化鈉（AR級，中國醫藥集團上海化學試劑公司，批號F20080921）；鹽酸（AR級，中國醫藥集團上海化學試劑公司，批號T050704）；葡萄糖（AR級，上海化學試劑分裝廠，批號0690404）；淀粉、聚乙二醇（PEG）6000、硬脂酸鎂、甘露醇、交聯聚乙烯吡咯烷酮（PPVP）、微晶纖維素（MCC）、低取代羥丙基纖維素（HPC）、微粉硅膠、CaHPO4、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）等輔料均購自上海維編，符合《中國藥典》2005年版二部質量標準；濃硫酸（AR級，中國醫藥集團上海化學試劑公司，批號20020412）。

2 方法與結果

2.1 多糖的含量測定[7-8]

2.1.1 溶液配制

對照品溶液的制備：精密稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖對照品50 mg，置500 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，即得。

海洋星蟲多糖膠囊供試品溶液制備：分別取三批海洋星蟲膠囊，精密稱取膠囊內容物30 mg，置100 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，即得。

2.1.2 標準曲線制備

2.1.2.1 測定波長的選擇 分別精密量取葡萄糖對照品溶液和供試品溶液0.3 mL，置10 mL刻度試管中，加水稀釋至2.0 mL，加0.1%蒽酮-硫酸溶液（精密稱取0.1 g蒽酮，加80%的硫酸溶液100 mL使溶解，搖勻，新鮮配制）顯色，以相應試劑為空白，掃描光譜圖，葡萄糖對照品與供試品均在625 nm處有最大吸收。

2.1.2.2 標準曲線的制備 分別精密吸取對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，置10 mL具塞試管中，加水至2.0 mL，精密加入0.1%蒽酮-硫酸溶液6 mL，搖勻，置水浴中加熱15 min，取出，放入冰浴中冷卻15 min，以相應的試劑為空白，按照分光光度法，在625 nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，得標準曲線回歸方程為：y=81.728x+0.0281（r = 0.9985）。試驗結果表明，葡萄糖質量在0.02～1.2 mg，用0.1%蒽酮-硫酸溶液顯色后的線性關系良好。

2.1.3 測定法

精密稱取海洋星蟲多糖膠囊內容物3份，每份分別為30 mg，分別置100 mL容量瓶中，加水使溶解，搖勻，精密量取0.4 mL溶液，置10 mL具塞試管中。自“加水至2.0 mL”起，照標準曲線制備項下的方法，依法測定吸光度，據標準曲線計算供試品溶液中多糖含量，并計算標示量的百分含量。

2.2 水分測定方法

取供試品3 g，平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中，厚度不超過5 mm，精密稱定，打開瓶蓋在105℃干燥5 h，將瓶蓋蓋好，移置干燥器中，冷卻30 min，精密稱定，再在上述溫度干燥1 h，冷卻，稱重，至連續兩次稱重的差異不超過5 mg為止，根據減失重量，計算供試品中含水量（%）。

2.3 崩解時限測定方法

崩解系指固體制劑在檢查時限內全部崩解溶散或成碎粒，應通過篩網。采用升降式崩解儀，升降上下移動距離為（55±2）mm，往返頻率為每分鐘30～32次。吊籃含玻璃管6根，將吊籃通過上端的不銹鋼軸懸掛于金屬支架上，浸入1000 mL燒杯中，并調節吊籃位置使其下降時篩網距燒杯底部25 mm，燒杯內盛有溫度為（37±1）℃的水，調節水位高度使吊籃上升時篩網在水面下25 mm處。取膠囊6粒，分別置上述吊籃的玻璃管中，啟動崩解儀進行檢查，各粒均應在30 min內全部崩解。如有1粒崩解不完全，應另取6粒，按上述方法復試，均應符合規定。

2.4 膠囊的鑒別

2.4.1 Molish反應

取海洋星蟲膠囊內容物30 mg，加水100 mL，超聲溶解，過濾，取澄清溶液1 mL置試管中，然后加兩滴Molish試劑（取5 g ɑ-萘酚用95%乙醇溶解至1000 mL，臨用前配制，棕色瓶保存），搖勻，傾斜試管，沿管壁小心加入約1 mL濃硫酸，切勿搖動，小心豎直后仔細觀察兩層液面交界處形成紫紅色復合物。

2.4.2 斐林試劑反應

取海洋星蟲膠囊內容物30 mg，加水100 mL，超聲溶解，過濾，取樣品澄清溶液1 mL置試管中，加入新配制的斐林試劑溶液，溶液的顏色由深藍色變為黃色最終成為磚紅色。其中斐林試劑溶液是由斐林A和斐林B等量混合而得（斐林A：將3.5 g含5個結晶水的硫酸銅溶于100 mL的水中即得淡藍色的斐林A試劑。斐林B：將17 g含5個結晶水的酒石酸鉀溶于20 mL熱水中，然后加入20 mL含有5 g氫氧化鈉的水溶液，稀釋至100 mL即得無色清亮的斐林B試劑）。

2.4.3 硫酸-蒽酮試劑反應

取星蟲膠囊內容物30 mg，加水100 mL，超聲溶解，過濾，取澄清溶液1 mL置試管中，加入蒽酮試劑4 mL，混勻，沸水浴煮10 min，冷卻至室溫，觀察結果溶液呈藍色。

2.4.4 硫酸-苯酚試劑反應

取星蟲膠囊內容物30 mg，加水100 mL，超聲溶解，過濾，取澄清溶液1 mL置試管中，然后加入5%苯酚1.0 mL及濃硫酸5.0 mL，搖勻冷卻，室溫放置20 min后觀察試管中出現的顏色變化，觀察結果溶液顯橙黃色。

2.5 加速試驗[9-10]

2.5.1 實驗方法

取海洋星蟲多糖膠囊三批，模擬臨床用藥包裝（鋁塑壓板包裝，并密封于鋁箔袋內。）放入有NaCl飽和溶液的干燥器內[相對濕度（75±5）%]，并置于恒溫烘箱中，溫度為（40±2）℃條件下，并于0、1、2、3、6個月取樣測定。

2.5.2 實驗結果

經過對6個月內樣品進行測定，膠囊內容物外觀性狀均呈灰白色粉末狀顆粒，氣腥，味微苦。微生物限度檢查細菌數不得過10 000 cfu/g，霉菌和酵母菌數不得過100 cfu/g，大腸埃希菌、沙門菌和活螨均不得檢出，大腸菌群應小于100 cfu/g，均符合規定。鑒別反應采用顏色鑒別反應：在Molish試劑反應中，樣品溶液與濃硫酸的液面間均形成紫環；在斐林試劑反應中，樣品溶液呈磚紅色；在硫酸-蒽酮試劑反應中，樣品溶液呈藍色；在硫酸-苯酚試劑反應中，樣品溶液呈橙黃色。水分及崩解時限、含量測定結果見表1。

2.6 長期試驗

2.6.1 實驗方法

取海洋星蟲多糖膠囊三批，模擬臨床用藥包裝（鋁塑壓板包裝，并密封于鋁箔袋內），置于溫度為（25±2）℃、濕度為（60±10）%的條件下，并于0、3、6、9、12個月取樣測定。

2.6.2 實驗結果

對12個月內樣品進行測定，膠囊內容物外觀性狀均呈灰白色粉末狀顆粒，氣腥，味微苦。微生物限度檢查細菌數不得過10 000 cfu/g，霉菌和酵母菌數不得過100 cfu/g，大腸埃希菌、沙門菌和活螨均不得檢出，大腸菌群應小于100 cfu/g，均符合規定[11-12]。鑒別反應采用顏色鑒別反應，在Molish試劑反應中，樣品溶液與濃硫酸的液面間均形成紫環；在斐林試劑反應中，樣品溶液呈磚紅色；在硫酸-蒽酮試劑反應中，樣品溶液呈藍色；在硫酸-苯酚試劑反應中，樣品溶液呈橙黃色。水分及崩解時限、含量測定結果見表2。

3 討論

海洋星蟲是星蟲動物門，方格星蟲目，方格星蟲科，方格星蟲屬的裸體方格星蟲的全體，中醫認為海洋星蟲性味甘、咸、寒，有清肺補虛、滋陰降火功效，素有“動物人參”和“海洋里的冬蟲夏草”的美譽。海洋星蟲多糖是從海洋星蟲中提取分離得到的一種動物多糖，是海洋星蟲膠囊的原料藥，加強對海洋星蟲膠囊的穩定性研究，對于考察該藥物的質量控制具有重要的意義。

穩定性試驗的目的是考察原料藥或制劑在溫度、濕度、光線的影響下隨時間變化的規律，為藥品的生產、包裝、貯存、運輸條件提供科學依據，同時通過試驗建立藥品的有效期[13]。加速試驗的目的是明確藥品在偏離正常貯藏條件下的變化情況、確定長期試驗的條件，長期穩定性試驗的目的是確認影響因素試驗和加速試驗的結果，明確藥品穩定性的變化情況[14]。本研究采用加速試驗方法和長期試驗方法對海洋星蟲多糖膠囊的穩定性進行考察[15]，采用《中國藥典》2005年版二部方法，對其性狀、鑒別、微生物限度、水分、崩解限度、多糖含量進行實驗，3批樣品在（40±2）℃和相對濕度（75±5）%的條件下放置6個月，在（25±2）℃、濕度為（60±10）%的條件下放置12個月，各指標均符合質量標準規定。因此，海洋星蟲多糖膠囊藥物性質穩定，本品的貯藏條件可確定為遮光、密閉保存，有效期可定為2年。

[參考文獻]

[1] 劉玉明，錢甜甜，何穎，等.方格星蟲多糖不同提取工藝的比較研究[J].時珍國醫國藥，2011，22（6）：1454.

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[15] 馬桂云，馬英.養正消積膠囊穩定性試驗研究[J].中國中醫藥現代遠程教育，2013，11（2）：163.

（收稿日期：2014-05-12 本文編輯：衛 軻）

3 討論

海洋星蟲是星蟲動物門，方格星蟲目，方格星蟲科，方格星蟲屬的裸體方格星蟲的全體，中醫認為海洋星蟲性味甘、咸、寒，有清肺補虛、滋陰降火功效，素有“動物人參”和“海洋里的冬蟲夏草”的美譽。海洋星蟲多糖是從海洋星蟲中提取分離得到的一種動物多糖，是海洋星蟲膠囊的原料藥，加強對海洋星蟲膠囊的穩定性研究，對于考察該藥物的質量控制具有重要的意義。

穩定性試驗的目的是考察原料藥或制劑在溫度、濕度、光線的影響下隨時間變化的規律，為藥品的生產、包裝、貯存、運輸條件提供科學依據，同時通過試驗建立藥品的有效期[13]。加速試驗的目的是明確藥品在偏離正常貯藏條件下的變化情況、確定長期試驗的條件，長期穩定性試驗的目的是確認影響因素試驗和加速試驗的結果，明確藥品穩定性的變化情況[14]。本研究采用加速試驗方法和長期試驗方法對海洋星蟲多糖膠囊的穩定性進行考察[15]，采用《中國藥典》2005年版二部方法，對其性狀、鑒別、微生物限度、水分、崩解限度、多糖含量進行實驗，3批樣品在（40±2）℃和相對濕度（75±5）%的條件下放置6個月，在（25±2）℃、濕度為（60±10）%的條件下放置12個月，各指標均符合質量標準規定。因此，海洋星蟲多糖膠囊藥物性質穩定，本品的貯藏條件可確定為遮光、密閉保存，有效期可定為2年。

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[15] 馬桂云，馬英.養正消積膠囊穩定性試驗研究[J].中國中醫藥現代遠程教育，2013，11（2）：163.

（收稿日期：2014-05-12 本文編輯：衛 軻）

3 討論

海洋星蟲是星蟲動物門，方格星蟲目，方格星蟲科，方格星蟲屬的裸體方格星蟲的全體，中醫認為海洋星蟲性味甘、咸、寒，有清肺補虛、滋陰降火功效，素有“動物人參”和“海洋里的冬蟲夏草”的美譽。海洋星蟲多糖是從海洋星蟲中提取分離得到的一種動物多糖，是海洋星蟲膠囊的原料藥，加強對海洋星蟲膠囊的穩定性研究，對于考察該藥物的質量控制具有重要的意義。

穩定性試驗的目的是考察原料藥或制劑在溫度、濕度、光線的影響下隨時間變化的規律，為藥品的生產、包裝、貯存、運輸條件提供科學依據，同時通過試驗建立藥品的有效期[13]。加速試驗的目的是明確藥品在偏離正常貯藏條件下的變化情況、確定長期試驗的條件，長期穩定性試驗的目的是確認影響因素試驗和加速試驗的結果，明確藥品穩定性的變化情況[14]。本研究采用加速試驗方法和長期試驗方法對海洋星蟲多糖膠囊的穩定性進行考察[15]，采用《中國藥典》2005年版二部方法，對其性狀、鑒別、微生物限度、水分、崩解限度、多糖含量進行實驗，3批樣品在（40±2）℃和相對濕度（75±5）%的條件下放置6個月，在（25±2）℃、濕度為（60±10）%的條件下放置12個月，各指標均符合質量標準規定。因此，海洋星蟲多糖膠囊藥物性質穩定，本品的貯藏條件可確定為遮光、密閉保存，有效期可定為2年。

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[15] 馬桂云，馬英.養正消積膠囊穩定性試驗研究[J].中國中醫藥現代遠程教育，2013，11（2）：163.

（收稿日期：2014-05-12 本文編輯：衛 軻）