Cyt C和Caspase 3在STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠晶狀體上皮細(xì)胞中的表達(dá)

李云 劉菲

隨著糖尿病發(fā)病率的上升及病程的延長，糖尿病患者發(fā)生各種慢性并發(fā)癥日益增多。糖尿病性白內(nèi)障已成為糖尿病并發(fā)癥中僅次于視網(wǎng)膜病變的第二大眼病［1］，是導(dǎo)致糖尿病患者視力下降甚至失明的重要原因［2］。研究發(fā)現(xiàn)，晶狀體上皮細(xì)胞(lens epithelial cells，LEC)凋亡可能是各種非先天性白內(nèi)障的共同細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)，而Cyt C及Caspase 3在細(xì)胞凋亡中發(fā)揮了關(guān)鍵作用。本實(shí)驗建立糖尿病動物模型，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法和Western blot技術(shù)檢測LEC中Cyt C及Caspase 3的表達(dá)情況，為糖尿病性白內(nèi)障的發(fā)病機(jī)制提供新的線索。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗動物和主要試劑 60只 SD大鼠購自南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院動物科學(xué)部，均為雄性，體質(zhì)量(180±10)g。鏈脲佐菌素(STZ)購自美國 Sigma公司;Cyt C抗體、Caspase 3(Ab-150)抗體及生物素標(biāo)記兔抗大鼠IgG購自Anbobio公司;免疫組織化學(xué)試劑盒購自美國Santa Cruz公司;線粒體提取試劑盒購自美國Keygen公司。

1.1.2 主要儀器 德國羅氏公司卓越型血糖儀，美國Biorad公司ChemiDoc-It化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng)及垂直電泳儀，德國 Eppendorf低溫超速離心機(jī)，日本奧林巴斯倒置光學(xué)顯微鏡、裂隙燈眼前段照相系統(tǒng)。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗分組 將60只8周齡健康 SD大鼠隨機(jī)分為對照組和實(shí)驗組，每組各30只。

1.2.2 動物模型制作 實(shí)驗組:大鼠禁食12 h，一次性腹腔注射 20 g·L－1STZ溶液(臨用時用0.1 mol·L－1、pH 4.5 檸檬酸緩沖液配制，在 30 min 內(nèi)注射完畢)，劑量為60 mg·kg－1，3 d后在大鼠尾靜脈采血檢測血糖濃度，空腹血糖達(dá)到16.7 mmol·L－1為糖尿病大鼠。不達(dá)標(biāo)者待血糖恢復(fù)至正常后再常規(guī)劑量注射。若出現(xiàn)死鼠則需按樣本量補(bǔ)足。對照組:給予腹腔注射等量 0.1 mol·L－1、pH 4.5 檸檬酸緩沖液。……