補腎活血湯對激素性股骨頭缺血壞死成骨與破骨的影響

陳漢堯 ，齊振熙，吳敏瑞 ，周李學(xué)

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)骨傷學(xué)院，福建 福州 350122；2.福建中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院，福建 福州350122）

由激素導(dǎo)致的股骨頭缺血壞死已成為非創(chuàng)傷性骨壞死的首要病因，研究認為超生理劑量的激素對破骨細胞和成骨細胞調(diào)節(jié)的影響是研究該病理機制的關(guān)鍵。臨床及實驗研究均表明中醫(yī)藥可有效地防治此病，補腎活血化瘀法被廣泛地應(yīng)用于該病的治療。

補腎活血湯源于《傷科大成》，以“腎主骨生髓”“血行則瘀自去”為依據(jù)組方，具有補腎益肝、活血化瘀的功效。本實驗通過檢測SD大鼠體內(nèi)血清骨堿性磷酸酶（BALP）含量高低，光鏡下觀察SD大鼠股骨頭形態(tài)改變，探討補腎活血湯對激素性股骨頭缺血壞死成骨與破骨的影響，評價補腎活血湯促進激素性股骨頭缺血壞死修復(fù)的作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 實驗所需60只SD大鼠購于上海斯萊克實驗動物有限公司，許可證號碼SCXK（滬）：2012-0002，飼養(yǎng)及造模在福建中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心SPF級實驗室完成，合格證編號：2007000555040。

1.2 實驗試劑及儀器 補腎活血湯由福建中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合研究院中藥提取平臺制備，藥物組成：熟地黃 9 g，杜仲 3 g，枸杞子 3 g，補骨脂 9 g，菟絲子 10 g，歸尾 3 g，沒藥 3 g，山茱萸 3 g，紅花 1.5 g，獨活3 g，肉蓯蓉3 g，藥物濃縮，制成含生藥濃度為1.0 g／mL的制劑，密封保存?zhèn)溆茫恢嗵牵ū本┒⑸锛夹g(shù)有限責(zé)任公司）；甲強龍（甲潑尼龍琥珀酸鈉注射液，Pfizer）；BALP檢測試劑盒（上海西唐生物科技有限公司）。

1.3 實驗方法 購買成年SD大鼠60只，雌雄各半，標準飼料喂養(yǎng)，自由進水，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按隨機數(shù)字表法隨機分為5組：正常組、模型組和補腎活血湯高、中、低劑量組，每組12只。實驗第1周，模型組和補腎活血湯高、中、低劑量組連續(xù)注射20 μg／kg脂多糖2次，每次間隔24 h，24 h后立即注射甲強龍40 mg／kg，連續(xù)注射3次，每次間隔24 h。實驗第2～6周，注射甲強龍用量減至20 mg／kg，每周1次，連續(xù)5周。正常組注射相同劑量相同頻次的生理鹽水［1］。

1.4 實驗給藥 實驗第7～10周，按人與大鼠體表面積用藥量的換算，計算出每只大鼠所需的劑量，補腎活血湯高、中、低劑量組給予含生藥濃度分別為2.5 g／kg、5 g／kg、10 g／kg 的補腎活血湯灌胃，每天早晚各1次；正常組和模型組在第7～10周，以5 g／（kg／d）的生理鹽水灌胃，每天早晚各 1 次［2］。 用含生藥濃度為1.0 g／mL補腎活血湯制劑計算，低劑量組灌胃劑量為2.5 mL／kg，中劑量組灌胃劑量為5 mL／kg，高劑量組灌胃劑量為 10 mL／kg。

1.5 指標檢測

1.5.1 實驗第11周，采用10%水合氯醛10 mL／kg腹腔麻醉，成功后，經(jīng)腹腔動脈采血5～6 mL，放入肝素抗凝試劑管中，采用全自動離心機以3000 r／min，離心10 min，取上清液，置于-20℃冰箱分裝保存，用時按大鼠BALP檢測試劑盒檢測步驟進行指標的檢測。

1.5.2 麻醉后，取雙側(cè)股骨頭，4%甲醛溶液固定24 h，10%乙二胺四乙酸（EDTA）4℃脫鈣 2 月，經(jīng)梯度乙醇脫水，石蠟包埋切片，切片厚5 μm，蘇木-伊紅（HE）染色，光鏡下觀察股骨頭骨組織變化情況。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 本研究使用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)，計數(shù)資料采用χ2檢驗，計量資料符合正態(tài)分布的用±s表示，采用單因素方差分析。

2 結(jié) 果

2.1 各組骨組織光鏡下形態(tài)變化情況 ① 正常組：軟骨厚度均勻，同源軟骨細胞數(shù)量正常，骨小梁結(jié)構(gòu)連續(xù)無斷裂，空骨陷窩較少，骨髓腔內(nèi)造血組織豐富，脂肪組織較少。②模型組：同源軟骨細胞及基質(zhì)大量減少甚至消失，可見大片云片狀的壞死細胞，潮線不連續(xù)甚至撕裂；骨小梁斷裂、消失，骨質(zhì)分解成黑色云片狀的壞死組織。③高劑量組：軟骨細胞排列紊亂，軟骨基質(zhì)不均勻可見大量致密結(jié)締組織增生；軟骨層內(nèi)富含充血擴張的血管或靜脈竇，部分栓塞或機化，管腔內(nèi)炎性細胞聚集，機化的血管周圍可新生類骨質(zhì)，骨小梁基本連續(xù)，骨髓腔內(nèi)可見少量脂肪細胞。④中劑量組：可見同源軟骨細胞及基質(zhì)減少，軟骨內(nèi)骨髓腔形成，可見破骨性軟骨吸收，骨小梁稀疏或斷裂，骨髓腔內(nèi)有較多的脂肪細胞堆積，造血組織減少，可見少量因骨質(zhì)壞死分解成的黑色壞死物。⑤低劑量組：同源軟骨細胞及基質(zhì)大量減少，可見較多的破骨性軟骨吸收陷窩，骨髓組織較少，可見分解為黑色的壞死組織，骨小梁稀疏斷裂，壞死分解為片狀，骨髓腔內(nèi)填充大量的脂肪細胞，融合成大泡，有較多的空骨陷窩。

2.2 各組血清BALP含量比較 見表1。

表1 各組血清BALP含量比較（±s）pg／mL

表1 各組血清BALP含量比較（±s）pg／mL

注：與正常組比較，1） P＜0.05；與模型組比較，2） P＜0.05。

組別正常組高劑量組中劑量組低劑量組模型組n 1212121212 BALP 0.835±0.0232）0.826±0.0252）0.776±0.0291）0.758±0.5601）0.755±0.0841）

3 討 論

祖國醫(yī)學(xué)認為激素性股骨頭缺血壞死屬痹證范疇。本病的發(fā)生以正虛為本，邪實為標。《素問·五臟生成篇》載“骨痹不已，復(fù)感于邪，內(nèi)舍于腎。”中醫(yī)學(xué)認為“痹者，閉也”，閉阻不通，則為疼痛，即“不通則痛”。《瘍醫(yī)大全》曰：“跌打骨折…宜活血祛瘀為先，血不活則瘀不去，瘀不去則骨不能接也”。故治療本病以補腎為本，配合活血化瘀藥物，從而達到標本兼治的目的。

補腎活血湯中入熟地黃、杜仲、枸杞子、補骨脂、菟絲子，以填精補髓，壯陽生精，使“陽得陰生，陰得陽化，而泉源不絕”；再入紅花、沒藥、歸尾以活血化瘀、行氣止痛，使“瘀血去，新血生”，筋骨得養(yǎng)，血脈通暢，而痛自除；再佐以山茱萸以健脾生血，使氣血生化有源；使以肉蓯蓉潤燥、滑腸，使散中有收，收中有散，補瀉同施。本方具有補腎、活血、化瘀之功，理論上符合上述原則。

藥理學(xué)研究表明補腎藥物可增強機體內(nèi)分泌功能，增加機體內(nèi)激素水平，從而抑制骨吸收，增加骨形成。經(jīng)菟絲子黃酮灌胃的去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠血Ca、BALP值均明顯升高，枸杞子多糖可增強非特異性免疫作用和促進造血功能，減弱激素類藥物的免疫抑制作用［3］。動物實驗研究證明活血化瘀藥物能改善血液微循環(huán)，糾正脂質(zhì)代謝紊亂，改善毛細血管通透性，降低骨內(nèi)壓，從而抑制骨內(nèi)壓增高、微循環(huán)障礙致缺血性壞死的惡性循環(huán)。紅花黃色素可明顯延長大鼠血漿的TT、PT和APTT的效應(yīng)時間，明顯降低Fib含量，并可顯著抑制由二磷酸腺苷引起的SD大鼠血小板聚集［4］。獨活抗炎鎮(zhèn)痛的主要成分蛇床子素，能使血清中IGF-1濃度值升高，使股骨骨小梁面積明顯增加，礦化沉積率增高［5］。

本實驗表明：高劑量組大鼠體內(nèi)BALP水平較高，軟骨層可見新生類骨質(zhì)，骨小梁基本連續(xù)，骨髓腔內(nèi)脂肪細胞較少，未見因骨質(zhì)壞死分解成的黑色壞死物。表明高劑量補腎活血湯可以提高雌激素依賴BALP的活性，增強非特異性免疫作用，抑制骨量丟失。補腎活血湯的活血化瘀功效，可抑制股骨頭內(nèi)因骨內(nèi)壓增高、微循環(huán)障礙導(dǎo)致的股骨頭缺血性壞死的惡性循環(huán)，從而起壞死修復(fù)作用。

［1］楊衛(wèi)強，蔣振剛，黃昌林.激素性股骨頭壞死模型兔骨組織病理及功能變化［J］.中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2011，15（50）：9319-9322.

［2］魏弘.醫(yī)學(xué)實驗動物學(xué)［M］.成都：四川科學(xué)技術(shù)出版社，1998：174.

［3］蔡西國.菟絲子黃酮干預(yù)去卵巢大鼠骨代謝研究［J］.中藥藥理與臨床，2007，23（6）：27-29.

［4］趙金明，秦文艷，齊越，等.紅花黃色素抗凝血作用及對血小板聚集影響的研究［J］.實驗動物科學(xué)，2009，26（6）：30-32.

［5］MING L G，ZHOU J，CHENG G Z，et al.Osthol，a coumarin isolated from common cnidium fruit，enhancesthe differentiation and maturation of osteoblasts in vitro［J］.Pharmacology，2011，88（1-2）：33-43.