正交試驗法優化連翹葉中連翹苷提取工藝的研究

紀麗麗

（黑龍江林業職業技術學院，黑龍江 牡丹江 157011）

連翹（Forsythiasuspense），木犀科植物，常以果實入藥，具有清熱解毒、消腫散結、抗菌及抑制真菌等功效，為雙黃連口服液、銀翹解毒沖劑等中藥制劑的主要原料。有研究表明，連翹葉中有效成分如連翹苷、連翹脂素、齊墩果酸等含量高于果實，連翹葉資源開發前景廣闊。本文將對連翹葉中的連翹苷的提取工藝進行研究，為連翹葉的開發提供依據。

1 材料、試劑與儀器

材料：連翹葉片，13年6月份采于本學院植物園內，洗凈，烘干至恒重，研磨，備用。

試劑：連翹苷標準品（中國食品藥品檢定研究所），乙醇為分析純。

儀器：UV762雙光束紫外-可見分光光度計，SG250HE超聲波清洗器，FA2004電子天平。

2 方法

2.1 標準曲線的繪制

采用分光光度法測定連翹苷含量，以連翹苷標準品繪制標準曲線。標準曲線方程為：A＝0.02593x＋0.00746（R2＝0.99701，n＝5）。其中：A為波長229nm處的吸光值；x為連翹苷的含量（mg／L）。

2.2 樣品含量的測定

稱取5g連翹葉粉末，乙醇溶液浸泡30min，超聲波輔助提取，冷卻補重，過濾，測定樣品溶液的吸光度，根據標準曲線方程計算連翹苷的含量。

2.3 單因素試驗

研究乙醇濃度、料液比、提取溫度、提取時間4個因素對連翹苷得率的影響，確定各因素的最佳范圍，每個因素重復試驗3次，取其平均值。

2.4 正交試驗

根據單因素試驗結果，選取乙醇濃度、料液比、提取溫度、提取時間4個因素的較優水平，按L9（34）設計進行正交試驗。

3 結果與分析

3.1 乙醇濃度

在50℃下，以1∶10（g∶mL，以下同）的料液比例，用不同濃度的乙醇溶液，超聲波提取10min，按照2.2的方法計算連翹苷的含量，來研究乙醇濃度與連翹苷得率的關系。結果如圖1所示，隨著乙醇濃度的增加，連翹苷得率也增大，但當乙醇濃度超過80%后，連翹苷的得率增加變化不明顯，因此，確定最佳乙醇濃度為80%。

圖1 乙醇濃度對連翹苷得率的影響

3.2 液料比

在50℃下，用60%乙醇溶液，以不同的料液比，超聲波提取10min，測定連翹苷的得率。

結果如圖2所示，隨著料液比的增加，連翹苷的得率也隨之增加。提取溶劑體積越大，溶劑與提取物接觸越充分，相同的時間內會溶解出更多的連翹苷而使得率增大。但是料液比過大，會增加成產成本，也會增加超聲波破碎細胞的阻力，降低細胞破碎程度，從而降低連翹苷的得率，因此綜合考慮，料液比最適為1∶10。

圖2 料液比對連翹苷得率的影響

3.3 提取溫度

以60%乙醇溶液，1∶10料液比，在不同的溫度下，超聲波提取10min，測定連翹苷的得率。

結果如圖3所示，隨著提取溫度的升高，連翹苷的得率也隨之增大。但溫度超過70℃后連翹苷得率下降。溫度過高，連翹苷被破壞，而且乙醇揮發會導致乙醇濃度降低使得連翹苷含量降低。因此，單因素提取試驗中最佳溫度為70℃。

3.4 提取時間

在50℃下，用60%乙醇溶液，1∶10料液比，超聲波提取若干分鐘后，測定連翹苷的得率，研究提取時間與連翹苷得率的關系。

結果如圖4所示，開始時隨著提取時間的延長，連翹苷的得率隨之增加。當提取時間超多12min后，提取時間的增加卻引起連翹苷得率的下降，這可能是由于時間過長導致連翹苷不穩定，因此，最佳提取時間為12min。

圖4 提取時間對連翹苷得率的影響

3.5 正交試驗

根據單因素試驗結果，選取4個因素的3個較優水平，按L9（34）設計進行正交試驗，因素與水平見表1，正交試驗見表2，方差分析見表3。

表1 正交試驗因素與水平

表2 正交試驗結果

表3 正交設計方差分析

極差分析及方差分析結果表明，影響連翹苷得率的因素的主次順序為：乙醇濃度＞料液比＞提取溫度＞提取時間，其中乙醇濃度對連翹苷得率的影響差異極顯著（P＜0.01）。因此確定最優提取條件為：80%乙醇，1∶10（g∶mL）料液比，60℃，超聲提取8min，在此條件下的連翹苷得率為0.3112%。

4 結論

正交試驗法是最常用的確定中藥提取最佳方案的方法，該方法準確、有效。以乙醇作為溶劑提取苷類物質時，乙醇濃度、料液比、提取溫度以及提取時間是主要的影響因素。因此，本研究選擇這4個因素進行正交試驗，采用分光光度法測定連翹苷的含量，得出乙醇80%，料液比1∶10（g∶mL），提取溫度60℃，提取時間8min為最佳提取方案。其中乙醇濃度為最主要的影響因素，其他因素對提取結果有影響但影響不顯著。本研究對促進連翹葉資源的充分開發和利用提供了依據。

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［2］ 吳艷芳，王新勝.超聲輔助提取連翹總黃酮工藝優選［J］.中國實驗方劑學雜志，2011，17（14）：30-32.

［3］ 齊建紅.HPLC測定連翹葉不同提取物中連翹苷的含量比較［J］.陜西農業科學，2012（3）：7-8.