T-SPOT對青少年結核病診斷價值的研究

孫嬌 李瑩 王悅 孫秀華 孫炳奇

沈陽市胸科醫院結核病實驗室，沈陽 110044

T-SPOT對青少年結核病診斷價值的研究

孫嬌 李瑩 王悅 孫秀華 孫炳奇▲

沈陽市胸科醫院結核病實驗室，沈陽 110044

目的探討結核感染T細胞斑點試驗 (T-SPOT)在青少年結核病診斷中的價值。方法回顧性分析本院2012年1月～2015年2月臨床確診為結核病并進行T-SPOT檢測的162名青少年患者，并與結核抗體檢測結果進行對比。結果T-SPOT對全體患者、肺結核患者和肺外結核患者檢測的陽性率分別為63.58%、58.89%和69.44%，明顯高于結核抗體檢測的20.99%、23.33%和18.06%。結論T-SPOT診斷青少年結核病具有快速、準確、陽性率高的特點，對青少年人結核病具有極高的診斷價值。

結核感染T細胞斑點試驗;青少年患者;結核病

全球約有1500萬青少年暴露在結核病患者的環境中，其中不少人為“潛伏性結核感染”，即隨時有可能發展為傳染性結核病。全球每年新增的肺結核青少年人感染者超過65萬，比世界衛生組織此前估計的人數多出近1/4。青少年肺結核患者體內存在的結核桿菌往往較少，因此取樣、檢測都更加困難，給臨床醫生正確診斷帶來了巨大的困難。近年來，結核感染T細胞斑點試驗(T-SPOT testing，T-SPOT)因其具有高特異度和高靈敏度，被越來越廣泛地應用于結核病的臨床診斷。本研究對青少年結核病患者T-SPOT檢測結果進行探討，希望能夠為臨床診治提供更多的參考依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析本院2012年1月～2015年2月臨床確診為結核病并進行T-SPOT檢測的青少年患者(年齡≤16歲)共162例，平均年齡(14.38±2.26)歲，其中男性78例，平均年齡(14.55±2.31)歲，女性84例，平均年齡(14.21±2.22)歲。初治患者147例，平均年齡(14.33±2.30)歲；復治患者15例，平均年齡(14.80± 1.78)歲；肺結核患者90人，平均年齡(14.77±1.60)歲；肺外結核患者72例，平均年齡(13.89±2.82)歲。初治和復治患者，肺結核和肺外結核分組標準均參照《肺結核診斷和治療指南》［1］。各組患者的年齡差異無統計學意義(P＜0.05)。所有患者均排除糖尿病、艾滋病等免疫系統缺陷性疾病。在72例肺外結核患者中患病率最高的3種肺外結核病分別為結核性胸膜炎、頸淋巴結核和結核性腦膜炎，其在肺外結核病中所占比例分別為52.78%、16.67%、12.50%，其中有5名患者同時患有兩種或兩種以上的肺外結核病。

1.2 實驗材料

RPMI1640細胞培養液，Ficoll-Hyperque淋巴細胞分離液；PBS緩沖液；T-SPOT試劑盒 (上海復星科技有限公司)，該試劑盒中含有包被小鼠抗人IFN-γ單克隆抗體的96孔微孔培養板；特異混合多肽ESAT-6及CFP-10(產地:Oxford Immunote Ltd.，Oxford，UK)；陽性對照為植物血凝素(PHA)；細胞培養液為AIM-V培養基；濃縮的堿性磷酸酶標記小鼠抗人IFN-γ單抗；底物顯色劑BCIP/NBT PLUS。

2.2 T-SPOT與結核抗體檢測陽性率的比較

1.3 實驗步驟

在162名結核病患者中，T-SPOT檢測陽性為103例，陽性率為63.58%；結核抗體檢測陽性為34例，陽性率為20.99%，T-SPOT檢測陽性率明顯高于結核抗體檢測(P＜0.01)。在肺結核及肺外結核患者中，T-SPOT檢測陽性率均明顯高于結核抗體檢測(P＜0.01)(表2)。

1.4 統計學分析

2000年以來，廣東一次能源消費總量快速增長，由2000年的7 983萬tce增加到了2015年的 25 662萬tce，增速呈放緩趨勢，由“十五”和“十一五”期間10%以上的年均增長降至“十二五”期間2.8%的年均增長，比全國“十二五”年均增長低0.6%。分能源品種來看，2011年以后煤炭消費逐年下降，石油消費增速放緩、天然氣和一次電力消費保持較快增速，其中一次電力消費年均增速接近8%。

得益于國家政策對新能源電動汽車的強力支持，電動汽車產業發展飛速，動力電池銷量快速增長，隨之報廢的動力電池也日漸增多。據統計[1]，截至 2017年底，國內新能源電動汽車的保有量已達180萬輛，而新能源汽車的動力電池壽命為4 ～ 5年，早期投入使用的電動汽車電池在2018年迎來報廢初期，預計2020年報廢量將超過23萬t（21 GW·h），如圖1所示。

采用SPSS 20.0統計軟件包進行數據分析，計數資料比較采用χ2檢驗和Kappa一致性檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 T-SPOT與結核抗體檢測結果的比較

軍隊是個鍛煉人的地方，大多士兵退役之后，憑借自己的奮斗取得事業成功，但并不是所有人都能得到很好的發展。謝清森告訴記者，離開部隊，很多士兵不能很好地適應新的生活、融入新的環境。

英國研究人員報告說，他們建立的最新模型顯示，全球每年新增的肺結核青少年感染者超過65萬，遠高于世界衛生組織2012年估計的53萬。

表1 T-SPOT與結核抗體檢測結果的比較(n)

如果存在陽性對照無反應即說明受檢對象的細胞免疫功能可能存在一定的減退，如果陰性對照出現陽性結果，那么可能存在操作不當所致的污染或者是機體處于某種病毒急性感染的狀態(如流感或者急性肝炎導致IFN-γ大量產生)。

用8m l肝素鈉抗凝真空采血管采集患者外周靜脈血，加入Ficoll淋巴細胞分離液中18～25℃，1600×g，離心28min。用吸液管吸取白色、云霧狀PBMCs層并轉移至15ml尖底離心管中，加入RPMI 1640細胞培養液至10m l。600×g離心7min，棄去上清液用1ml培養液重懸沉淀。加RPMI 1640細胞培養液至10ml，350×g離心7 min，棄去上清液加350μl AIM-V培養液重懸沉淀。每個患者樣本使用4個檢測孔，每個檢測孔加入100μl細胞終溶液(含有25萬個活細胞)

表2 T-SPOT與結核抗體檢測陽性率的比較［n(%)］

3 討論

在162名結核病患者中，T-SPOT和結核抗體檢測均為陽性共30例，均為陰性共55例；T-SPOT檢測陽性而結核抗體檢測陰性共73例，T-SPOT檢測陰性而結核抗體檢測陽性共4例，這兩種方法的一致性比較結果為Kappa=0.1788，即兩者的一致性較差(表1)。

建立農業園區，進一步豐富農副產品，有效帶動鄉村旅游業的發展，若鄉村旅游業沒有得到持續性新元素注入，則很難確保游客被吸引。可以建設花卉苗木種植基地，也可以結合當地地理特點，讓游客充分體驗農村生活的樂趣。此外，構建農村科技園，在進行果樹種植過程中，可以為游客準備自己動手的場所，讓游客切身體驗農活的樂趣。可以將鄉村畜牧場向農民開放，促使游客更近距離的接觸鄉村風情，也可以讓游客參與到牲畜喂養中。

在本研究中,膿腫的直徑≥5cm,置管引流組在住院天數、膿腔消失時間明顯優于細針抽吸組(P<0.05)。雖然置管引流術對患者術后的護理和生活會造成一些不便,但對于膿腫直徑≥5cm的患者,置管引流組較細針抽吸組患者的住院時間和膿腔消失時間等明顯更短,且差異具有統計學意義(P<0.05)。因此對于膿腫直徑≥5cm的患者而言,應用超聲引導下經皮肝穿刺置管引流術進行治療較細針抽吸術更適合,療效更顯著。此臨床還應注意:①臨床醫師應嚴格掌握患者適應癥,對于配合度較差、機體狀況較差者,禁止使用;②穿刺前應明確最佳穿刺路徑,避免發生氣胸等并發癥;③操作過程中應將針尖處于膿腫液化的中央部位。

酶聯免疫斑點檢測技術(enzyme-linked immunospot assay，ELISPOT)是近年來發展起來的細胞因子檢測技術［2-4］，它能夠在單細胞水平檢測細胞因子的分泌情況，比ELISA更靈敏，能從(20～30)萬個細胞中檢出1個分泌該蛋白的細胞，因此僅需要少量標本，在檢測抗原特異性細胞數量的同時也反映其功能，并與臨床結果相關。目前研究認為，T-SPOT能夠敏感地診斷活動性結核病［5-7］，在筆者的研究中，將T-SPOT檢測與傳統結核抗體檢測結果進行比較，兩者都是針對結核分枝桿菌的免疫學檢測，結果顯示，在162例臨床確診的青少年結核患者中，T-SPOT檢測出103例陽性，而結核抗體僅檢測出34例陽性，檢測陽性率分別為63.58%和20.99%，T-SPOT檢測的陽性率明顯高于結核抗體。

另外筆者的研究數據顯示，在全體青少年患者中，肺外結核患者為72例，占全體患者的44.44%。肺外結核［8-10］由于發病形式多樣、多臟器性，發病遲緩，臨床特征不典型［11-12］，獲得細菌學依據困難，有些需手術或穿刺活檢確診，很多患者不能接受，因此肺外結核誤診、漏診極為常見，常因此而延誤治療，嚴重影響患者的預后。在筆者的研究中，T-SPOT對肺外結核檢測的陽性率可以達到69.44%，遠高于結核抗體的18.06%，因此TSPOT檢測可為肺外結核診斷和治療提供重要依據。

綜上所述，T-SPOT在青少年結核病的診斷與鑒別診斷方面有重要臨床應用價值［13］，尤其是不宜獲得痰標本的低齡青少年患者和肺外結核患者，此檢測的診斷意義更大，并且整個實驗操作相對簡單快速，能夠早期提供靈敏特異的結果，幫助臨床醫師作出正確診斷［14-15］，但由于此項檢測價格較貴，且不是結核病診斷的“金標準”，因此不建議作為臨床診斷的常規檢測項目，應更多地用于診斷困難患者的輔助檢測手段。

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Study on diagnostic value of T-SPOT for adolescent tuberculosis

SUN Jiao LIYing WANG Yue SUN Xiu-hua SUN Bing-qi▲
Laboratory of Tuberculosis,Shenyang Chest Hospital,Shenyang 110044,China

ObjectiveTo evaluate the value of tuberculosis infection T cell-SPOT testing(T-SPOT)in the diagnosis of adolescent tuberculosis.Methods162 adolescent patients clinically diagnosed with tuberculosis and given T-SPOT in our hospital from January 2012 to February 2015 were analyzed retrospectively and the results was compared with the tuberculosis antibody detection result.ResultsThe positive rates of T-SPOT for all patients,pulmonary tuberculosis patients and extra pulmonary tuberculosis patientswas 63.58%,58.89%and 69.44%respectively,which was significantly higher than that of tuberculosis antibody detection(20.99%,23.33%and 18.06%respectively).ConclusionT-SPOT has the features of rapidness,accuracy and high positive rate in the diagnosis of adolescent tuberculosis,which is of high diagnostic value for adolescent tuberculosis.

Tuberculosis infection T cell-SPOT testing;Adolescent patients;Tuberculosis

R52

A

1674-4721(2015)09(c)-0135-03

2015-04-13 本文編輯:許俊琴)

▲通訊作者