鐵皮石斛組培苗快速繁殖的研究

張 妍，劉宗歡，楊 超，鞠一琳，劉太林

(天津天獅學院，天津 301700)

鐵皮石斛組培苗快速繁殖的研究

張 妍，劉宗歡，楊 超，鞠一琳，劉太林*

(天津天獅學院，天津 301700)

[目的]研究鐵皮石斛組織培養與快速繁殖方法。[方法]以鐵皮石斛蒴果為材料，分別探究不同培養基及培養基添加物對鐵皮石斛原球莖誘導、增殖及生根的影響。[結果]最適宜的鐵皮石斛萌發的培養基為1/2 MS，加入0.2 mg/L NAA的培養基中原球莖增殖率達120%，在培養基中加入1.0 mg/L 6-BA和20%香蕉提取液均對其芽的增殖有良好的促進作用，添加0.25 mg/L NAA、2.0 mg/L 6-BA和20%馬鈴薯提取液的培養基中其再生率可高達220%，0.2 mg/L NAA和20%馬鈴薯提取液均可顯著提高鐵皮石斛苗生根生長。[結論]該研究為鐵皮石斛快速繁殖技術的應用奠定了理論基礎。

鐵皮石斛；組織培養；快速繁殖

鐵皮石斛(DendrobiiOfficmalisCaulis)，又名黑節草，為蘭科植物鐵皮石斛的干燥莖[1-2]。其含有的多糖、石斛堿、多種人體所需的微量元素和氨基酸等有效成分，在抗腫瘤、提高人體免疫力、治療胃腸道疾病、抗衰老、抗氧化、抗血小板聚集、降低血糖和治療白內障等方面均有良好療效[3-4]。由于鐵皮石斛對生長環境要求苛刻，自然繁殖率極低，生長緩慢，因此國內市場供應緊缺[5]。該研究以鐵皮石斛蒴果為材料，研究了多種不同有機物及其組合對鐵皮石斛試管苗鮮重、苗高、長葉、發芽、生根及長勢等情況的影響，對其快速繁育和推廣種植具有一定的意義[6-10]。

1 材料與方法

1.1 材料及處理未開裂的鐵皮石斛蒴果購于北京農業科學研究院，鐵皮石斛組培苗由天津市北辰區董新房子村趙輔林提供。挑選飽滿、未開裂的蒴果，流水沖洗15 min，雙蒸水沖洗3～5次。

1.2 外植體滅菌在超凈工作臺上將洗凈的蒴果用75%乙醇沖洗3次后，用酒精棉球擦拭果實表面，無菌水沖洗2～3次，然后用0.1%升汞浸泡2～5 min，用無菌水漂洗5次，于酒精燈上灼燒數秒后用滅菌解剖刀切開口，接種于培養基上，用遮陽布將培養皿包住，暗處培養3 d，再轉入光下進行培養。

1.3 增殖培養外植體在增殖培養基上生長30 d后，選取直徑大小在0.5～1.0 cm，顏色淡綠色、沒有玻璃化的團狀原球莖，接種到MS培養基上。

1.4 培養基和培養條件鐵皮石斛采用MS作為增殖的基本培養基。用于外植體預培養的啟動培養基為1/2 MS，pH 6.0左右，培養條件為溫度(25±2)℃、光照強度1 500～2 000 lx、濕度60%～75%、光照12 h/d。

2 結果與分析

2.1 不同啟動培養基對無菌苗體系建立的影響試驗結果表明，MS、1/2MS、B5、N6培養基的平均萌芽率分別為80%、90%、84%、70%，可見MS培養基平均萌芽率低于B5培養基而高于N6培養基的平均萌芽率，而1/2MS培養基的平均萌芽率最高。

2.2 不同濃度NAA對鐵皮石斛原球莖增殖的影響由表1可知，當培養基中添加等量6-BA、不同濃度NAA時，原球莖增殖率有所增加；當NAA濃度為0.2 mg/L時原球莖增殖率最大，達120%。

表1 不同濃度NAA對鐵皮石斛原球莖增殖的影響

2.3 不同濃度6-BA的培養基對鐵皮石斛芽增殖的影響由表2可知，在添加等量NAA的條件下，向培養基中添加一定濃度的6-BA，鐵皮石斛的芽增殖率顯著上升，而后隨其濃度的增加而下降。1.0 mg/L 6-BA的添加量表現出最高的繁殖率。

2.4 不同濃度的香蕉、馬鈴薯提取液對鐵皮石斛芽增殖的影響由表3可知，在培養基中添加香蕉提取液對芽增殖效果比添加相同濃度的馬鈴薯提取液好。同時發現添加20%香蕉提取液時，芽及平均葉片數的倍增率最高，植株均強，葉片呈深綠色，且生出了根。

表2 不同濃度6-BA的培養基對鐵皮石斛芽增殖的影響

表3 不同濃度的香蕉、馬鈴薯提取液對鐵皮石斛芽增殖的影響

2.5 不同添加物組合對鐵皮石斛再生率的影響由表4可知，在添加20%馬鈴薯提取液的培養基中，加入不同濃度的NAA與6-BA，當NAA濃度在0.25 mg/L、6-BA濃度在2.0 mg/L時，鐵皮石斛不但分化率高且生根率也是較高的，由此可見NAA對鐵皮石斛的生根有很大作用，而6-BA對分化有很大作用。

2.6 不同濃度NAA對鐵皮石斛苗生根的影響由表5可知，隨NAA的添加濃度的增加，生根率和平均每株生根數也隨之增加，但平均根長卻顯著縮短且出現黃葉現象。以此判斷雖然高濃度的NAA對生根有利，但卻會對生長產生不良影響。故在這組處理中0.2 mg/L的NAA是最為適宜的濃度。

表4 不同添加物對鐵皮石斛再生率的影響

表5 不同濃度NAA對鐵皮石斛苗生根的影響

2.7 不同濃度的香蕉和馬鈴薯提取液對鐵皮石斛苗生根生長的影響由表6可知，添加香蕉提取液對生根生長影響不大，而馬鈴薯提取液對生根生長有顯著的促進作用，且當提取液添加量為20%時最適宜。

表6 不同濃度的香蕉、馬鈴薯提取液對試管苗生根生長的影響

3 結論與討論

植物組織培養的困難之一是建立無菌體系，消毒的一個基本原則是既要殺死植物材料表面的微生物，同時盡可能降低對植物材料的傷害。亦有報道顯示，適宜濃度的ABA、KT、NAA、6-BA對原球莖的增殖起促進作用。該試驗結果表明，最適宜的鐵皮石斛萌發的培養基為1/2 MS，加入0.2 mg/L NAA的培養基中原球莖增殖率達120%，在培養基中加入1.0 mg/L 6-BA和20%香蕉提取液均對其芽的增殖有良好的促進作用，添加0.25 mg/L NAA、2.0 mg/L 6-BA和20%馬鈴薯提取液的培養基中其再生率可高達220%，0.2 mg/L NAA和20%馬鈴薯提取液均可顯著提高鐵皮石斛苗生根生長。

[1] 邵華，張玲琪，李俊梅，等.鐵皮石斛研究進展[J].中草藥，2004(1)：109-112.

[2] 斯金平，諸燕，朱玉球，等.鐵皮石斛人工栽培技術研究與應用進展[J].浙江林業科技，2009，29(6)：66-70.

[3]郭勇，程曉磊.石斛在惡性腫瘤治療中的作用[J].浙江中西醫結合雜志，2007，17(7)：454-455.

[4] 張沂平，馬勝林，朱遠.鐵皮楓斗精對腫瘤患者放化療輔助治療的療效觀察[J].中國中西醫綜合雜志，2000，120(8)：628.

[5] 劉強，殷壽華，黃文，等.流蘇石斛瀕危原因及資源保護[J].亞熱帶植物科學，2007，36(4)：45-47.

[6] 肖昌泰，毛昆明，楊自瓊，等.不同基質對鐵皮石斛組培苗成活和生長的影響[J].現在農業科技，2012(4)：147-149.

[7] 何俊平，涂小云.不同培養及配方對鐵皮石斛生根培養的影響[J].江蘇農業科學，2013，41(2)：57-59.

[8] 黃萬琳.不同培養基激素配比及營養因子對云南熱區鐵皮石斛苗的影響[J].曲靖師范學院學報，2013，32(3)：60-63.

[9] 張治國，王黎，劉驊，等.鐵皮石斛原球莖分化適宜培養基研究[J].中國中藥雜志，1993，18(1)：16-19.

[10] 張銘，朱峰，魏小勇，等.鐵皮石斛種胚萌發和原球莖質量控制[J].浙江大學學報(理學版)，2000，27(1)：92-94.

Research on Tissue Culture and Rapid Propagation ofDendrobiiofficmalisCaulis Seedlings

ZHANG Yan, LIU Zong-huan, YANG Chao, LIU Tai-lin*et al

(Tianjin Tianshi College, Tianjin 301700)

[Objective] The aim was to research the tissue culture and rapid propagation ofDendrobiiofficmalisCaulis. [Method] Using capsular fruit as explants, the effects of the culture mediums and additives to the protocorm inducing, proliferation and rooting were discussed. [Result] The optimum medium for inducing the protocorm of Dendrobii oficmalis Caulis was 1/2 MS. The growth rate of protocorm was 120% in the medium contained 0.2 mg/L NAA. The medium included 1.0 mg/L 6-BA or 20% banana extracting solution had promotive effect to the germinal proliferation. The regeneration reached up to 220% in the medium which contained 0.25 mg/L NAA, 2.0 mg/L 6-BA and 20% potato extracting solution. The medium added 0.2 mg/L NAA or 20% potato extracting solution both improved the potato root growth apparently. [Conclusion] The study laid a theoretical foundation for application of rapid propagation technique ofDendrobiiofficmalisCaulis.

DendrobiiofficmalisCaulis; Tissue culture; Rapid propagation

張妍(1987- )，女，天津人，實驗員，碩士，從事生物工程研究。*通訊作者，講師，碩士，從事生物工程研究。

2015-08-20

S 503.53

A

0517-6611(2015)28-077-02