原產地隔離檢疫對進口種牛疫病傳入的風險控制

康偉，陳永泰，方葵，林志雄，陳增榮，陳文生

(1.廣州出入境檢驗檢疫局廣東廣州510000;2.廣東出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心廣東廣州510000; 3.增城出入境檢驗檢疫局廣東廣州51000）

原產地隔離檢疫對進口種牛疫病傳入的風險控制

康偉1，陳永泰1，方葵1，林志雄2，陳增榮1，陳文生3

(1.廣州出入境檢驗檢疫局廣東廣州510000;2.廣東出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心廣東廣州510000; 3.增城出入境檢驗檢疫局廣東廣州51000）

1 概況

原產地隔離檢疫，是指在原產地國隔離檢疫場對預備出口中國的種用動物進行多個步驟的臨床檢疫和實驗室動物疫病檢測，排查動物傳染病，將健康的優良種畜引進回國的檢疫手段。原產地隔離檢疫具體分為隔離檢疫前的農場檢疫和原產地隔離檢疫兩個部分[1]。

農場檢疫流程為：先從目的農場選購大于引種企業要求數量的種用動物，按照協議規定檢疫的相關動物疫病，全部采血進行實驗室檢測，如果實驗室檢測結果陽性率過高，就要考慮是否有必要繼續從該國家引進動物；如果陽性率較低，符合國家有關規定，則在剔除陽性動物后，初步篩選出符合進口要求的動物，進入出口前隔離場檢疫階段。

將農場期檢疫合格的動物投放入隔離檢疫場，中、大型動物的隔離檢疫期一般為30～45 d。在隔離檢疫期間，獸醫官員每天例行對此批動物進行臨床檢疫，并采集血液樣本送實驗室檢測，審核檢測結果。若實驗室報告陽性率大于農場檢疫時的陽性率，說明此批動物潛在的疫情疫病較多，情況較為復雜，應暫停進口任務；若檢測結果符合我國的進口要求，則繼續該批動物的進口工作，經過這次產地嚴格檢疫把關，優中選優，外派獸醫官員最后批準經過臨床和實驗室檢疫合格的優良種畜出口中國[2]。在原產地國的港口，我方外派獸醫官員還需對批準進口我國的動物做裝載前最后一次臨床體格檢查。

所有進口的動物在出口前都需要在原產地進行隔離檢疫，本文通過某公司向新西蘭進口種牛的原產地隔離檢疫實例，對原產地隔離檢疫實施手段和整個流程加以論述和說明。

2 材料與方法

2.1材料

2.1.1檢疫動物進口企業從新西蘭110多個農場選購5 352頭青年母牛，2007年在新西蘭專供出口的種牛農場采集全部備選種牛血清，實驗室檢測地點為新西蘭國家疾病調查中心(NCDI)動物衛生參考實驗室。檢疫目的為剔除牛傳染性鼻氣管炎陽性奶牛。隨后對排除牛傳染性鼻氣管炎陽性的4 150頭準備參加農場期檢疫的牛只，再進行挑選，因外傷、眼病、發育不良、其他普通疾病等原因淘汰281頭，實際參加農場期結核菌素皮試的動物是3869頭。2007年6月15日-20日在新西蘭專供出口的種牛農場進行結核菌素變態反應皮試實驗，檢疫目的為剔除結核和副結核陽性奶牛。經過牛傳染性鼻氣管炎以及結核副結核病篩查工作后，剩下的3 758頭牛參加原產地農場期實驗室檢測。對農場期實驗室檢測合格的3 685頭有資格進入出口前隔離場的牛繼續篩選，由于體形、體表性狀、生殖器性狀、外傷等其他非傳染病原因淘汰了485頭牛，最終確定有3 198頭牛進入出口前隔離場接受隔離檢疫[3]。

2.1.2實驗試劑

1）牛傳染性鼻氣管炎檢測和結核菌素皮試實驗所需試劑：檢測牛傳染性鼻氣管炎ELISA試劑盒（新西蘭國家疾病調查中心提供）；牛型提純結核菌素規格為5 mL/瓶，凍干型；禽型提純結核菌素規格為2 mL/瓶，凍干型。

2）農場期實驗室檢測主要試劑：補體、溶血素、副結核補反抗原、標準牛副結核陰性/陽性對照血清、3%綿羊紅細胞、超純水、生理鹽水、溶血素、牛結核病檢測ELISA試劑盒、牛傳染性鼻氣管炎檢測ELISA試劑盒、牛地方性白血病病毒瓊脂擴散試驗抗原、蠟脂板、標準牛地方性白血病陰性/陽性對照血清、牛藍舌病檢測ELISA試劑盒、滅菌巴比妥緩沖液、牛傳染性胸膜肺炎補體結合試驗抗原、牛傳染性胸膜肺炎補體結合試驗標準陰性/陽性血清、60a綿羊紅細胞懸浮液。

3）隔離期實驗室檢測主要試劑：同“2）農場期實驗室檢測主要試劑”。

2.1.3實驗器材酶標儀、單道或多道移液器、玻璃試管、96孔U型微量反應板、恒溫箱等。

2.2實驗方法

2.2.1牛傳染性鼻氣管炎血清抗體檢測實驗方法

牛傳染性鼻氣管炎（IBR）抗體檢測應用ELISA檢測試劑盒，采用阻斷ELISA進行檢測。

2.2.2牛結核和副結核病變態反應實驗方法用1 mL一次性注射器進行皮內注射，上部注射牛型結核菌素，下部注射禽型結核菌素。每頭牛各注射0.1 mL。在注射牛型、禽型提純結核菌素后72 h后，進行觀察，實測。依據GB/T18645-2002的判定標準進行判定。皮厚差≥4 mm為反應結果陽性，2 mm≤皮厚差＜4 mm為可疑。皮厚差＜2 mm為陰性。如果禽型結核菌素的反應大于牛型結核菌素，兩種菌素之間的皮厚差≥2 mm，即為可能感染了禽結核菌或副結核菌。

2.2.3原產地農場期實驗室檢測實驗方法 ①結核病，采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）法；②副結核，采用補體結合試驗；③牛傳染性鼻氣管炎，采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）法；④牛地方流行性白血病，采用瓊脂免疫擴散試驗進行檢測；⑤牛傳染性胸膜肺炎，采用補體結合試驗方法；⑥牛藍舌病，采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）法。

2.2.4原產地隔離檢疫期檢疫方法

1）臨床檢查法：臨床檢查主要以感觀檢查為主，觀察動物的各種表現（靜、動、起、臥、精神、飲水、食欲等）是否正常，體溫、脈博、呼吸是否在正常生理指標范圍內，排泄、排遺產物是否正常，常規臨床檢查包括群體檢查和個體檢查。

①每天至少兩次定時對全群動物采取感觀檢查為主的臨床觀察；②發現異常動物及時隔離，剖檢動物尸體，做病理學檢查，采集動物樣本送實驗室檢測，如有檢出疫病，需對全群動物做該種疫病血清學檢測；③根據臨床檢疫情況及時做出相應處理措施。

2）病理學檢查法：如果隔離動物猝死，可以剖檢，做病理學檢查，患疫病而死亡的動物尸體，常呈現一定的病理變化，有的還有其特征性病理變化，可作為診斷的依據之一。

3）實驗室檢測方法：同“2.2.3原產地農場期實驗室檢測實驗方法”。

3 結果與分析

5 352頭備選種牛經過ELISA法檢測后，檢出牛傳染性鼻氣管炎（IBR）陽性牛1 100頭，陽性率為20.5%，疑似陽性牛102頭，可疑率為2%。淘汰全部陽性牛及疑似陽性牛只共1 202頭。

新西蘭為IBR的高發國家，IBR在新西蘭普遍存在，陽性檢出率平均達20%～30%。據資料統計，在新西蘭的南島和北島上的18月齡牛群中，血清抗體陽性率為19%和41%[4]。此次進口的奶牛，收集自新西蘭國內100多個牧場，可以設想，其中會有IBR的存在。因此IBR隨此批種牛傳入我國內地的風險較大，首次IBR檢測就從5 352頭牛中檢出1 202頭陽性及疑似陽性病牛，為接下來的農場檢疫及原產地隔離檢疫打下良好的基礎。在農場檢疫前對引種國存在的高發動物疫病做針對性篩查和剔除工作有效控制了該動物疫病傳入我國境內的風險[5]。

參加結核菌素皮試反應種牛總數為3 869頭，檢出結核和副結核陽性頭數為98頭，陽性率為2.532%，檢出可疑動物數量為13頭，可疑率為0.336%。陽性動物和可疑動物總計111頭均被淘汰，經過結核和副結核病篩查后，牛群動物數量為3 758頭。

農場期實驗室檢測檢出牛副結核、牛傳染性鼻氣管炎、牛傳染性胸膜肺炎、牛地方流行性白血病、藍舌病等5種動物疫病，陽性牛只73頭，總陽性率為1.942%。其中檢出牛副結核病35頭，陽性率為0.924%，牛傳染性鼻氣管炎7頭，陽性率為0.186%，牛地方流行性白血病2頭，陽性率為0.05%，牛傳染性胸膜肺炎28頭，陽性率為0.745%，藍舌病1頭，陽性率為0.025%。淘汰陽性動物，剩余3 658頭種牛有資格進入原產地隔離檢疫。

隔離檢疫期間，臨床檢疫未發現染疫動物，但是在進行臨床觀察時發現部分牛有牛皮癬的癥狀，皮癬是牛常見的體外寄生蟲病，會影響到動物的外表，嚴重時會影響動物的攝食和免疫力。為了保障進口商的利益和我國生物安全，對經治療仍未徹底康復的185頭種牛禁止裝船出口。

隔離檢疫期間的臨床檢疫是動物檢疫中一種常用的檢疫方法，具有直觀性和快速性，能夠迅速發現疑似病例或者異常動物，而且，臨床檢疫具有持續性，臨床檢疫延伸至進口動物在港口裝運前。此外，對裝運動物耳牌號碼及動物數量的核對也尤為關鍵，如：2002年9月，澳大利亞在向中國出口的1 950頭小乳牛中，我國檢疫官員共發現41頭有癬疾的牲畜，并把這些病畜和健康牲畜隔離。然而，澳大利亞的出口商試圖將帶有疾病的牲畜裝船運往中國，把被查出有疾病的牲畜送回到準備出口的健康牲畜中，并額外增加了157頭牲畜。當雙方獸醫再次進行檢疫時，發現總共多出198頭牲畜，其中有部分牛患有癬疾，并有2頭牛呈現IBR陽性反應。中國外檢官員在臨床監管中及時發現這一情況，我方立即取消這批動物的進口計劃。在對新西蘭種牛的臨床檢疫中，雖然沒有檢出傳染性疫病，但是剔除了185頭癬疾種牛。癬疾由寄生蟲引起，攜帶寄生蟲的癬疾病牛如被引入我國，對我國的生物安全會產生危害。

4 討論

4.1選定高發疫病先進行篩查工作

農場期實驗室檢測IBR、結核與副結核結果表明檢出陽性動物及陽性率較之農場期前均顯著下降（見表1）。

表1 結核副結核病和IBR剔除工作與農場期實驗室檢測檢出情況比較

選定某些高發疫病先進行篩查工作是有非常積極的意義的，篩查疫病的工作能檢出大部分染疫動物，再通過農場期實驗室血清學檢測加以補充，能夠大幅度提高檢出疫病的效率。農場實驗室檢測前先做指定動物疫病的篩查，盡早檢出陽性動物，避免染疫動物污染整個動物種群。

4.2對高發動物疫病進行多次實驗室檢測

新西蘭是IBR高發國家，經過三個階段的實驗室檢測，檢出IBR陽性動物數量和陽性率都逐漸減少和下降，農場期前疫病剔除工作檢出陽性動物高達1 100頭，陽性率20.5%，農場期實驗室檢疫檢出陽性動物7頭，陽性率0.186%，在隔離檢疫期的實驗室檢測中，僅檢出1頭陽性動物，陽性率僅為0.031%，足以見得在多輪次的檢疫中，牛群中IBR陽性動物被剔出殆盡，因而降低IBR傳入我國的風險。

4.3多個階段反復篩查動物疫病

多階段反復的疫病篩查工作，是原產地隔離檢疫控制動物疫病風險傳入的重要因素。原產地隔離檢疫開始前，有待檢動物5 352頭，到隔離檢疫結束時有資格裝運出口的動物僅有3 000頭，因疫病、動物表現性狀不佳等因素淘汰了2 352頭，淘汰率高達44%，其中因疫病因素淘汰1 284頭，淘汰率為24%。從農場期前IBR、結核病的剔除工作到農場和隔離場實驗室檢疫階段，每一輪檢疫都淘汰部分不合格的動物，健康動物進入下一輪繼續篩選。各個檢疫環節緊密連接，多種檢疫手段綜合應用，保障了檢疫效率和檢疫的準確率，顯著降低動物疫病隨進口動物入境的風險（見圖1）。

圖1各檢疫階段牛群數量的比較

原產地隔離檢疫廣義上包括特定動物疫病的篩查、農場期實驗室檢測、農場檢疫后進入出口隔離檢疫場的動物檢疫這幾檢疫流程，原產地隔離檢疫是隔離檢疫體系中非常重要的組成部分，可通過多個檢疫流程的流水線嚴密篩查以及多種檢疫手段的共同運用以此來達到控制動物疫病傳入風險的目的。原產地隔離檢疫也是隔離檢疫體系在國外的延伸和主動防御，能夠將動物疫病御之國門以外。■（編輯：常迪）

[1] 康偉,陳增榮.進口大中動物隔離檢疫體系的建立[J].中國動物檢疫,2011,(9):65.

[2] 康偉,陳增榮.淺淡進境動物隔離場防疫工作規范[J].中國動物檢疫,2011,(2):70.

[3] 康偉,陳增榮.淺談隔離檢疫期間豬鏈球菌病的防治[J].廣東畜牧獸醫科技,2011,(2):21.

[4] 贠秋安.談赴新西蘭執行進口種牛檢疫[J].中國檢驗檢疫,2008, (10):22-24.

[5] 李樹根,黎兆滾,陳博文.由新西蘭進口奶牛爆發傳染性牛鼻氣管炎報告[J].獸醫科技雜志,1984,20(3):32-34.