細胞自噬在激素性股骨頭缺血壞死中的研究進展

吳 濤 劉萬林

內蒙古醫科大學第二附屬醫院骨科，內蒙古呼和浩特 010050

細胞自噬在激素性股骨頭缺血壞死中的研究進展

吳 濤 劉萬林

內蒙古醫科大學第二附屬醫院骨科，內蒙古呼和浩特 010050

股骨頭壞死作為骨外科的多發性疾病，在研究與治療過程中發現以激素性股骨頭缺血壞死（SANFH）為主要病因，其發病機制尚不明確。臨床研究中多認為其在長期大量使用激素過程中，股骨頭出現血管內凝血、代謝紊亂、骨質疏松及細胞凋亡等問題，造成股骨頭直接性缺血壞死。為了有效指導相關治療，該研究主要針對細胞自噬的分類情況，根據其在SANFH相關臨床實際治療過程中的效果及作用機制進行綜述。

細胞自噬;激素;股骨頭壞死

近年來，臨床治療過程中大量使用激素治療，造成激素性股骨頭缺血壞死患者的發病率不斷增加，因此針對其發病機制的研究變得尤為重要[1-2]。國內外多數學者認為細胞凋亡可作為研究的主要突破方向，而隨著生物學領域的研究發展興起，細胞自噬也成為非凋亡形式的主要內容，并成為研究中熱點議題。該研究針對自噬細胞的臨床特點進行綜合性分析，并根據其在臨床激素性股骨頭缺血壞死治療中的應用情況進行綜述。

1 SANFH與自噬

研究者曾經在關于肝細胞的研究觀察中，通過對鼠的肝灌流液中加入高血糖素后發現細胞內的溶酶體不斷增多并出現各種自噬現象，因此被直接用“自噬”命名[3-4]。臨床多年來將這種現象認為是正常的生理過程，即人體細胞可能會出現降解胞內物質的正常程序，但是隨著研究過程中酵母自噬分子的出現，逐漸將細胞自噬區別于細胞凋亡，并予以深入研究認識并將其應用于醫學層面。

1.1 自噬細胞的分類

根據吞噬物進入細胞溶酶體內的不同途徑將自噬細胞進行分類，其主要包括的3種類型為：微自噬、巨自噬及分子伴侶介導自噬[5]。其中微自噬發生原因為溶酶體發生自身凹陷的情況時，會將吞噬物包裹在其中，并在此過程中逐漸降解吞噬物。巨自噬的發生則是由于高爾基體及非核糖體等內質網的脫落，雙層膜在其過程中將吞噬物包裹其中，溶酶體與自噬體發生各種反應并融合成自噬溶酶體以降解吞噬物。分子伴侶介導自噬則是通過溶酶體及分子伴侶的運載，不斷將細胞內的蛋白質成分送入溶酶體，轉運過成功中產生各種降解行為。

1.2 自噬相關機制

研究過程中發現自噬體的形成為4個主要階段，即啟動、核化、延伸并閉合，整個過程中相關蛋白（Atg）承擔著重要的作用[6-7]。啟動過程中主要是依賴復合體Ulk 1，其主要包括Atg 13、Ulk 1及FIP200，即Ulk 1通過與Ulk 1及FIP200發生磷酸化等作用引起自噬。自噬泡完成核化主要是依賴Beclin 1、hVps34及磷脂酰肌醇-激酶 （PI3K）等復合物，其主要包括Atg1、Beclin 1、hVps15及hVps34。而細胞自噬的延伸與閉合主要與 Atg12及LC3這兩個依賴泛素樣共軛系統相關，其中由Atg12-Atg5形成的Atg12-Atg5-Atg16類復合物，可對LC3的活化及定位產生各種積極作用。細胞質型LC3-Ⅰ通過磷脂酰乙醇胺與兩個泛素樣反應結合后，在自噬體外膜和內膜方位形成LC3-Ⅱ，同時泛素樣會不斷與E2樣酶Atg3及E1樣酶Atg7發生反應并被催化。因此，在臨床動物及細胞實驗中，逐漸將LC3-Ⅱ作為認證存在自噬體膜的標志。通過一些列的作用后，自噬體出現后與溶酶體產生各種融合作用，并逐漸形成自噬溶酶體，在細胞內開始產生各種自噬作用。

1.3 自噬細胞的作用產生

溶酶體所依賴的細胞質成分及細胞器通過細胞自噬完成降解，此過程中細胞可因自身成分的降解來維持內部環境的基本穩定[8]。研究過程中發現細胞產生激素、營養物質缺乏、活性氧、缺氧、蛋白質聚集體、DNA損傷、細胞內病原體及產生損傷后的細胞器等形式，而這些形式的細胞在發生各種應激反應后激活自噬。自噬過程中會通過各種作用，維持細胞的存活，但是一旦發生自噬過程后，體內各種胞質內及胞漿中的細胞器就會自動進入自噬泡中，在溶酶體內完成降解過程。人體骨組織出現各種代謝行為后會發生應激反應，自噬通過提供大分子或ATP等能量資源，增強細胞的自身存活能力，完成自愈或改善功能。但是研究中發現，若此類應激輕度過大，或出現的時間持續過程較長時，細胞可能就會出現各種自噬性及程序性死亡情況。因此自噬被臨床認為是維持代謝平衡的較為強大的推動者，可有效預防身體機能出現各種退化性疾病情況的發生。但是在此過程中也可能出現各種消極作用，首先，如腫瘤細胞可能會通過這種自噬行為，維持營養支持得以存活[9]。其次，自噬蛋白及通路會對患者的炎癥及免疫情況產生決定性的影響作用，即有效的平衡炎癥及免疫對機體的作用，可有效的預防或對抗各類感染性及自身免疫性疾病。

2 SANFH與骨細胞自噬作用

臨床研究中針對細胞命運與疾病狀態的相關性進行研究，結果顯示GC會對患者骨細胞情況產生決定性的影響，即GC不僅可以對骨細胞的凋亡產生各種誘導作用，而且會對骨細胞的自噬作用產生誘導[10]。其中GC的使用劑量的決定性作用明顯，即低劑量會激活自噬，而高劑量會刺激凋亡。臨床中利用潑尼松龍緩釋劑的不同用量對小鼠進行試驗，其中主要用量情況分別為1.4、2.8、5.6 mg/（kg·d），研究組于用藥28 d后發現使用GC低劑量的小鼠的股骨遠端出現皮質骨自噬通路活化及細胞自噬情況明顯增加，且高于GC安慰劑使用組的大鼠骨組織情況[11-12]。而GC高劑量組使用藥物后的骨細胞抗凋亡作用減弱，且凋亡作用明顯增強。其中LC3作為自噬體膜內的重要標志性蛋白質，可以在使用顯微鏡觀察其變化狀況，了解自噬體的形成與發展變化情況，并通過數量的情況判定自噬體的活性高低情況。

通過體外實驗，在LC3轉染骨樣細胞MLO-Y4后48 h，利用地塞米松（10-8mol/L～10-6mol/L）予以24 h處理，研究結果中顯示無處理后的LC3廣泛分布于細胞質內，而在使用過GC藥物后的LC3數量明顯增多，即處理后的大鼠在研究過程中出現增強其骨細胞自噬活性的情況。同時減少用藥劑量后，自噬作用會使已經受損的骨細胞成功存活；增加劑量后，會直接破壞骨細胞內的各種抗氧化的防御措施，其生存能力逐漸下降，并進而直接導致其出現凋亡狀況。因此，在短期內使用小劑量激素是不會出現各種SANFH，但是若長期且使用大劑量的激素較易引發患者出現SANFH情況。

3 結語

根據臨床相關研究實驗證實激素使用對SANFH的產生具有一定的影響作用，因此在使用過程中不僅要嚴格控制細胞出現凋亡狀況，而且觀察其出現細胞自噬情況，針對細胞自噬作用于SANFH患者中的病發機制尚未明確，因此需經過深入研究，為SANFH的防治提供科學依據。

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The Research Progress of Cell Autophagy in Steraid-induced Avasadar Necrosis of the Femoral Head

WU Tao LIU Wanlin
Department of Orthopaedics,The Second Affiliated Hospital of Inner Mongolia Medical University,Hohhot,Inner Mongolia, 010050,China

The femoral head necrosis is a multiple disease of orthopedic surgery.It was found during the study and treatment that steraid-induced avasadar necrosis of the femoral head (SANFH)is the main cause of the disease,but the pathogenesis is still unclear.It is thought in clinical research that if the patients extensively use hormone for a long time,the femoral head will present intravascular coagulation,metabolic disorders,osteoporosis,and cell apoptosis and other problems,these will cause directly ischemic necrosis of femoral head.This study aims at the classification of cell autophagy and summarizes the effect and mechanism of action of cell autophagy in the practical clinical treatment of SANFH so as to guide the relevant treatment effectively.

Cell autophagy;Hormone;Femoral head necrosis

R681.8

A

1674-0742（2014）10（b）－0197-02

2014-07-11）

吳濤（1988.7-），男，蒙古族，內蒙古呼和浩特人，內蒙古醫科大學第二附屬醫院在讀研究生，研究方向：骨外科學。