氟尿嘧啶微乳原位凝膠的溶出度測定

王璐璐，陳少華，相莉，鄭穩生

(中國醫學科學院中國協和醫科大學藥物研究所、藥物傳輸技術及新型制劑北京市重點實驗室，北京 100050)

氟尿嘧啶微乳原位凝膠的溶出度測定

王璐璐，陳少華，相莉，鄭穩生

(中國醫學科學院中國協和醫科大學藥物研究所、藥物傳輸技術及新型制劑北京市重點實驗室，北京 100050)

目的 建立氟尿嘧啶微乳原位凝膠體外溶出度的測定方法。方法 采用紫外分光光度法，按照橫置旋轉滲透池系統，在溶出介質pH7.2磷酸鹽緩沖液中，測定氟尿嘧啶微乳原位凝膠體外溶出度。結果 加入處方量80%，100%，120%氟尿嘧啶加樣平均回收率分別為98.42%，97.56%，99.34%；RSD分別為1.22%，1.86%，0.49%。氟尿嘧啶在0.5～16.0 μg·mL-1范圍內藥物濃度和紫外吸光度呈良好的線性關系。使用該實驗確定的方法，氟尿嘧啶微乳原位凝膠具有良好的緩釋效果。結論 該方法簡便易行、準確可靠，且重復性好，可用于氟尿嘧啶微乳原位凝膠體外溶出度的測定。

氟尿嘧啶；微乳原位凝膠；溶出度

結直腸癌發病率日益上升，已高居惡性腫瘤的第三位，并有趕超胃癌的趨勢。文獻報道結直腸癌患者好發年齡約45歲，<40歲者占35%，<30歲者占12%。氟尿嘧啶(fluorouracil，5-FU)是治療結直腸癌基本用藥，現有給藥方式為注射及口服。5-FU用藥的安全范圍較窄，其主要不良反應為骨髓抑制、口腔炎、消化性潰瘍和其他胃腸道反應。口服產生的骨髓抑制作用較靜脈注射持久。靜脈注射和靜脈滴注的給藥途徑較好，但是注射部位易發生靜脈炎，少數患者發生神經系統和心臟毒性，以及維生素B1缺乏癥，長期動脈插管給藥，會引起動脈血栓[1]。5-FU直腸給藥可以降低系統毒性，并且藥物直接接觸癌癥部位，病灶部位濃度高[2-5]。因此，筆者研制了5-FU微乳原位凝膠以增加藥物的吸收、減少藥物刺激性。本實驗建立了測定5-FU微乳原位凝膠溶出度的方法，并采用DIBBERN等[6]提出的橫置旋轉滲透池系統考察了藥物的釋放。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 MA260S型電子分析天平(上海第二天平儀器廠，感量0.01 mg)，HP8453紫外分光光度計(美國惠普公司)，RCZ-8A智能溶出儀(天津大學精密儀器廠)。

1.2 試藥 5-FU對照品(USP Rockville.MD.LOT，No.1097658，含量：99.99%)，5-FU微乳原位凝膠(中國醫學科學院制備，批號：130514，130515，130516)，磷酸二氫鉀、鹽酸、氫氧化鈉均為分析純，實驗室用純凈水為重蒸去離子水。

2 方法與結果

2.1 5-FU微乳原位凝膠的制備 5-FU微乳制備：將大豆油、司盤80，聚山梨酯80 和1，2-丙二醇按(22：5：1：6)的比例混合，在45 ℃，2 000 r·min-1的條件下持續攪拌，逐滴加入1.5% 5-FU溶液33 mL，繼續攪拌10 min，得到白色微乳。5-FU微乳原位凝膠制備：取含有一定量泊洛沙姆407和黏附劑卡波姆的溶液，冰箱中放置過夜，得到澄清溶液，4 ℃，700 r·min-1持續攪拌，與一定量第一步制得的5-FU微乳混合，繼續攪拌10 min，緩慢升溫至室溫，得到白色凝膠。

2.2 分析方法的驗證

2.2.1 各組分吸收光譜 5-FU原料：以人工腸液(見《中華人民共和國藥典》2010年版，二部附錄，pH7.2)為溶劑，所配濃度15 μg·mL-1。

空白微乳原位凝膠：制備不含藥物的微乳原位凝膠，方法同5-FU微乳原位凝膠，10 ℃放置成液體，以人工腸液稀釋至適宜濃度，取續濾液。將二者同時在波長200～500 nm范圍進行掃描。結果表明，微乳原位凝膠輔料在265 nm處吸光度與藥物比較可略去不計。

2.2.2 線性回歸實驗 精密稱取5-FU標準品適量，用人工腸液(pH7.2)配成0.5，1.0，4.0，8.0，12.0，16.0 μg·mL-1的濃度系列，于265 nm處測定吸光度(A)以濃度(C，μg·mL-1)對吸收度(A)作標準曲線，線性回歸方程為A=0.051 3C+0.130 8(r=0.999 6，n=5)。結果表明，5-FU在0.5～16.0 μg·mL-1范圍內，濃度與吸光度呈良好的線性關系。

2.2.3 加樣回收率實驗 按處方比例稱取輔料，分別加入該處方量對應的80%，100%，120%5-FU對照品，加溶出介質溶解并分別稀釋。結果見表1，表明該方法準確性良好。

2.2.4 精密度實驗 取對照品，照“2.2.1”項方法配制對照品溶液，在265 nm波長下測定A，分別連續測定6次，連續測定3 d，按吸光度計算RSD為0.57%，日間精密度RSD為0.71%，結果表明該方法精密度較好。

表1 5-FU加樣回收率實驗結果

2.2.5 穩定性實驗 取對照品溶液，分別于0，2，4，8和16 h在265 nm波長下測定A值，按5-FU吸光度計算得RSD為0.84%。結果表明，5-FU溶液在16 h內穩定。

2.3 5-FU微乳原位凝膠溶出度測定

2.3.1 測定裝置 采用德國DIBBERN等[6]提出的橫置旋轉滲透池系統，整個運動過程相對比較平穩、緩慢，可產生類似于腸蠕動的效果。在滲透池兩側均有一片槳葉與滲透池同步運轉，可滿足釋放出的活性成分能迅速地擴散到整個吸收液中，并使其均勻。

2.3.2 測定方法 采用橫置旋轉滲透池系統，將滲透池浸入900 mL恒溫至(37.0±0.5)℃的人工腸液中(pH7.2)。分別于10，30 min，1，2，4，6，8，12 h精密量取釋放液10 mL置試管中(后立即補充同溫人工腸液10 mL)，再于試管內精密量取釋放液2 mL，置25 mL量瓶，加人工腸液稀釋至刻度，于265 nm處測定吸光度(A)，由標準回歸曲線方程中求出5-FU濃度，再計算出各個不同時間的累積溶出率(%)，以時間為橫坐標，累積溶出率為縱坐標，繪制體外釋放曲線[7]。結果見圖1，表明5-FU微乳凝膠具有良好的緩釋效果，可延緩釋放至10 h，經DD Solver(1.0版)軟件擬合，藥物釋放符合 Madoid-Banakar 緩釋模型。

3 討論

本研究將脂溶性差的5-FU制成油包水(W/O)型微乳并進一步將其制成溫度敏感原位凝膠，此制劑在室溫狀態下為固態，穩定性好，使用前10 ℃短時間冷藏可恢復成自由流動的液體狀態，使用后，在體溫條件下轉變成具有一定凝膠強度和生物粘附力的固體凝膠，其中攜帶的藥物微乳增加了藥物跨生物膜吸收效率、延緩藥物的釋放、減少藥物對直腸黏膜的刺激性，因此可以提高藥物的生物利用度，降低不良反應，提高患者使用的依從性。

圖1 5-FU微乳原位凝膠體外溶出曲線

根據《中華人民共國國藥典》2010年版二部中5-FU含量測定項目中規定5-FU測定濃度為10 μg·mL-1，故標準曲線制定中5-FU標準品的濃度配制在0.5～16.0 μg·mL-1范圍。

本實驗中，隨著滲透池的轉動凝膠幾乎平鋪在半透膜上，與緩沖液有良好的交換，與直腸給藥藥物釋放狀態相似，適合于直腸給藥劑型溶出度的測定。

[1] 周異群，傅華群，鄒志森.新編腹部外科學[M].天津：天津科學技術出版社，2008：510-518.

[2] TAKAHASHI T，MIZUSAWA H，KATO T，et al.Preoperative irradiation and 5-fluorouracil suppository for carcinoma of the rectum[J].Am J Surg，1988，156(1)：58-62.

[3] PAEK S H，XUAN J J，CHOI H G，et al.Poloxamer 188 and propylene glycol-based rectal suppository enhances anticancer effect of 5-fluorouracil in mice[J].Biol Pharm Bull，2006，29(5)：1060-1063.

[4] ZHOU X G，WANG Y C，YU B M，et al.Route and prepa-ration of 5-Fu administration as preoperative adjuvant chemotherapy in rectal cancerⅡ.Morphologic，ultrastructural and histochemical changes of the cancer cells after intrarectal and intravenous 5-Fu administration[J].Chin J Oncol，1988，10(3)：220-223.

[5] GALANDIUK S，WRIGHTSON W，MARR L，et al.Supposi-tory delivery of 5-fluorouracil in rectal cancer[J].Ann Surg Oncol，1996，3(3)：270-276.

[6] DIBBERN H W，WIRBITZKI E.Possibilities for determining the active substance release from hydrophobic carries，especially as suppositories[J].Pharm Ind，1983，45(10)：985-990.

[7] 杜青，蘇德森.栓劑溶出度的測定方法[J].國外醫藥·合成藥·生化藥·制劑分冊，1990，11(5)：290-293.

2014-03-27

2014-07-27

王璐璐(1973-)，女，上海人，副研究員，碩士，從事新劑型及制劑新技術研究。電話：(0)13621284066，E-mail：wanglulu@imm.ac.cn。

R979.1；R944

B

1004-0781(2015)09-1213-02

10.3870/j.issn.1004-0781.2015.09.026