TALE-TFs構建方法的建立及優化

王媛媛，蘇攀柯，黃愛龍，胡接力△

(1.河南科技大學第一附屬醫院檢驗科，河南洛陽 471000；2.重慶醫科大學附屬第二醫院

·技術與方法·

TALE-TFs構建方法的建立及優化

王媛媛1，蘇攀柯1，黃愛龍2，胡接力2△

(1.河南科技大學第一附屬醫院檢驗科，河南洛陽 471000；2.重慶醫科大學附屬第二醫院

教育部感染性疾病分子生物學重點實驗室，重慶 400016)

目的 在傳統方案的基礎上建立一種經濟有效且易于操作的類轉錄激活效應子轉錄因子(TALE-TFs)的構建和功能檢測方案。方法采用基于PCR的Golden gate克隆法分別嘗試構建類轉錄激活效應物(TALEs)的六聚體、五聚體、四聚體和三聚體，比較構建結果，選擇最優效果方案進行TALE-TFs的構建。采用片段置換反應(FSR)構建了含有TALE-TFs結合片段的RFP質粒pminCMV，并與TALE-TFs進行共轉染，觀察紅色熒光驗證TALE-TFs的轉錄活性。結果TALEs中所含的串聯重復模塊越少，獲得的構建產物越多。共轉染時，TALE-TFs使得pminCMV成功啟動表達。結論該研究為不同條件下實驗方案的選擇提供了依據，并利用含有TALE-TF結合片段和紅色熒光的質粒建立了快捷直觀的轉錄活性驗證方法。

類轉錄激活效應物;質粒構建;轉錄;轉染

類轉錄激活效應物(TALEs)蛋白家族是來自于植物病原體-黃單胞桿菌的天然細菌效應蛋白。它類似于真核生物的轉錄因子，通過識別特異DNA序列來調節宿主基因的轉錄，促進細菌定植。TALEs蛋白中部包含一段由串聯重復單體構成的DNA特異識別和結合區域，其中每個單體含有大約34個氨基酸。而TALEs的重復部分是由數個重復單體加約含20個氨基酸殘基的0.5個重復單位構成[1]。……