川降養心滴丸質量標準研究

吳秀芹，賀巍，文映紅

川降養心滴丸質量標準研究

吳秀芹，賀巍，文映紅

(南方醫科大學珠江醫院藥學部，廣東廣州510282)

目的建立中藥復方制劑川降養心滴丸的質量標準。方法采用TLC法鑒別川降養心滴丸中的川芎、降香；用HPLC法對制劑中丁烯基苯酞和橙花叔醇進行定量分析。結果建立的定性鑒別分離度好、專屬性強，丁烯基苯酞質量分數測定的線性范圍為0.093 12～0.931 2 μg(r＝0.999 8，n＝6)，平均回收率為96.50%(RSD＝1.08%，n＝6)；橙花叔醇質量分數測定的線性范圍為0.15～1.5 μg(r＝0.999 9，n＝6)，平均回收率為96.71%(RSD＝1.40%，n＝6)。結論本方法準確可靠、靈敏度高、專屬性強，可有效控制川降養心滴丸的質量。

川降養心滴丸；質量標準；薄層色譜法；高效液相色譜法；丁烯基苯酞；橙花叔醇

川降養心滴丸是由川芎、降香為主藥研制的中藥復方制劑，來自于臨床經驗方，方中川芎辛溫，入心包、肝經，活血行氣，通心脈之瘀阻；降香辛溫，入心經，走血分，行瘀定痛，二者君臣相需為用可暢通心胸氣血，用于治療冠心病和心絞痛療效顯著[1-2]。為有效控制其內在質量，參考相關文獻采用薄層色譜(TLC)法對制劑中的川芎和降香進行了定性鑒別[3-4]，并采用高效液相色譜(HPLC)法對其有效成分丁烯基苯酞和橙花叔醇進行了質量分數測定[5-7]，以建立準確、可靠、專屬性強的質量控制方法。

1 儀器與試藥

Waters2695/2487高效液相色譜儀，EmpowerⅡ化學工作站；DiamonsilTM十八烷基鍵合硅膠柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)；DL-360A超聲波清洗器(上海之信儀器有限公司)；BSA124S-十萬分之一電子天平(德國Sartorius集團)；LD-UPWF超純水器(德國Mililpore公司)。川芎、降香對照藥材(購自中國食品藥品檢定研究院，批號分別為201404、201508)，丁烯基苯酞對照品(自制，經UV、IR、MS、NMR確定結構，與文獻報道一致[8]，面積歸一化法測得其質量分數為98%)；橙花叔醇對照品(自制，經UV、IR、MS、NMR確定結構，與文獻報道一致[9]，面積歸一化法測得其質量分數為98.5%)。

薄層層析硅膠 G、GF254(青島海洋生物制品廠)，甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。川降養心滴丸(自制，50 mg/丸，批號分別為20130612、20130614、20130616)。

2 方法與結果

2.1 川芎的TLC鑒別

取川降養心滴丸適量，研碎，取粉末約1.0 g，加甲醇10 mL，超聲提取10 min，濾過，取續濾液作為供試品溶液；按處方除去川芎配制成陰性樣品，同法制成相應質量濃度的陰性對照液；取川芎對照藥材細粉2 g，加入石油醚(30～60℃)20 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣用甲醇1 mL溶解，作為對照藥材溶液；稱取丁烯基苯酞對照品適量，加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。

按照薄層色譜法(2005年版《中國藥典》一部附錄ⅥB)試驗，分別吸取上述3種溶液3 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠GF254薄層板上，以石油醚-乙醚(體積比95∶5)為展開劑，展開，取出，晾干。置紫外燈254 nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點和熒光斑點；在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的熒光淬滅斑點。而陰性對照液在此相應的位置上未有斑點顯示，說明陰性對照對鑒別無干擾。結果見圖1。

圖1 川降養心滴丸中川芎鑒別的TLC圖Figure 1 TLC of szechwan lovage rhizome from Chuanjiang Yangxin pills

2.2 降香的TLC鑒別

取川降養心滴丸適量，研碎，取粉末約0.3 g，加甲醇10 mL，超聲提取10 min，濾過，取濾液作為供試品溶液；按處方除去降香配制成陰性樣品，同法制成相應質量濃度的陰性對照液；取降香對照藥材細粉2 g，加入石油醚(30～60℃)-甲醇(體積比10∶1)的混合溶液30 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣用甲醇1 mL溶解，作為對照藥材溶液；取橙花叔醇對照品適量，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。

按照薄層色譜法(2010年版《中國藥典》一部附錄ⅥB)試驗，分別吸取上述3種溶液2 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以苯-三氯甲烷-乙酸乙酯(體積比10∶2∶1.2)為展開劑，展開，取出，晾干。噴以5%(質量濃度)香草醛的3%(體積分數)硫酸乙醇溶液，于105℃烘至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯多個相同顏色的斑點；在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的藍色斑點。而陰性對照液在此相應的位置上未有斑點顯示，說明陰性對照對鑒別無干擾。結果見圖2。

圖2 川降養心滴丸中降香鑒別的TLC圖Figure 2 TLC of rosewood from Chuanjiang Yangxin pills

2.3 丁烯基苯酞的測定

2.3.1 對照品溶液的制備 精密稱取丁烯基苯酞對照品37.93 mg，置20 mL量瓶中，加適量三氯甲烷(約0.5 mL)溶解，用甲醇定容至刻度，即得質量濃度為1.896 5mg/mL對照品儲備液，搖勻備用。精密吸取上述對照品儲備液0.5 mL，置20 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，即得質量濃度為47.41 μg/mL的對照品溶液。

2.3.2 供試品溶液的制備 取本品適量，研碎，取

粉末約110 mg，精密稱定，置20 mL容量瓶中，加入甲醇適量，超聲處理20 min(功率250 W，頻率33 kHz)，放冷，用甲醇補足至刻度，搖勻，0.22 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，作為供試品溶液。

2.3.3 陰性樣品溶液的制備 按處方比例配制缺川芎的陰性空白對照樣品，按“2.3.2”項下方法制備陰性樣品溶液。

2.3.4 色譜條件 色譜柱:Diamonsil TM十八烷基鍵合硅膠柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相:甲醇-水(體積比66∶34)；流速:1 mL/min；檢測波長:230 nm；柱溫:30℃；進樣量:10 μL。分別精密吸取對照品、供試品、陰性樣品溶液10 μL，注入液相色譜儀，依法測定。結果表明，陰性樣品在與對照品溶液相應的保留時間處無峰出現，表明本品中其他成分對待測組分測定無干擾；理論塔板數以丁烯基苯酞計不得小于5 000，丁烯基苯酞峰與其他峰的分離度良好。見圖3。

圖3 川降養心滴丸中丁烯基苯酞測定的高效液相色譜圖Figure 3 ChromatogramsofN-butylidenephthalide from Chuanjiang Yangxin pills

2.3.5 線性關系的考察 分別精密吸取質量濃度為46.56 μg/mL的丁烯基苯酞對照品溶液2.0、6.0、10.0、12.0、16.0、20 μL注入高效液相色譜儀，測定峰面積，以峰面積為縱坐標，相應的進樣量為橫坐標繪制標準曲線。得丁烯基苯酞的回歸方程為Y＝2.51×107X＋5.45×104，r＝0.999 8(n＝6)，結果表明丁烯基苯酞在0.093 12～0.931 2 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.3.6 精密度試驗 分別精密吸取丁烯基苯酞質量濃度為46.56 μg/mL的對照品溶液10 μL，按“2.3.4”項下條件連續進樣測定6次。測得丁烯基苯酞峰面積RSD值為0.86%(n＝6)，表明儀器精密度良好。

2.3.7 穩定性試驗 取同一供試品溶液(批號: 20130612)，分別于0、2、4、6、8、10、12 h進樣，按“2.3.4”項下色譜條件測定，計算丁烯基苯酞的質量分數。結果丁烯基苯酞質量分數的RSD值為1.57% (n＝7)，表明供試品溶液在12 h內穩定。

2.3.8 重復性試驗 取同一批(批號:20130612)川降養心滴丸，按“2.3.2”項下方法平行制備6份供試品溶液，分別精密吸取10 μL注入液相色譜儀，按“2.3.4”項下色譜條件測定，結果丁烯基苯酞質量分數的RSD值為1.28%(n＝6)，表明本法重復性良好。2.3.9 加樣回收率試驗 分別精密稱取已知質量分數(丁烯基苯酞質量分數為0.459 mg/丸)的同一批(批號:20130612)川降養心滴丸 6份，每份約55 mg，精密稱定，分別加入質量濃度0.522 5 mg/mL的丁烯基苯酞對照品溶液1 mL，按照“2.3.2”項下方法制備供試品溶液。分別精密吸取供試品溶液10 μL，按照“2.3.4”項下色譜條件測定丁烯基苯酞的質量分數，分別計算其加樣回收率。結果見表1。

表1 川降養心滴丸中丁烯基苯酞加樣回收率試驗結果Table 1 Recovery results of N-Butylidenephthalide from Chuanjiang Yangxin pills(n＝6)

2.3.10 樣品的測定 分別取3批川降養心滴丸，各約55 mg，精密稱定，按照“2.3.2”項下方法制備供試品溶液，每批平行操作2次。分別精密吸取供試品溶液10 μL，按照“2.3.4”項下色譜條件測定丁烯基苯酞的質量分數，結果批號20130612、20130614、20130616川降養心滴丸中丁烯基苯酞的質量分數分別為0.456、0.426、0.442 mg/丸，平均質量分數為0.441 mg/丸。以平均質量分數的80%作為下限，可規定本品丁烯基苯酞質量分數不低于0.353 mg/丸。

2.4 橙花叔醇的測定

2.4.1 對照品溶液的制備 精密稱取橙花叔醇對照品12.52 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，即得質量濃度為1.252 mg/mL的對照品儲備液，搖勻，備用。精密吸取上述對照儲備液0.6 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，即得質量濃度為75.12 μg/mL的對照品溶液。

2.4.2 供試品溶液的制備 取川降養心滴丸適量，研碎，取粉末約50 mg，精密稱定，置20 mL容量瓶中，加入甲醇適量，超聲處理20 min(功率250 W，頻率33 kHz)，放冷，用甲醇補足至刻度，搖勻，用0.22 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，作為供試品溶液。

2.4.3 陰性樣品溶液的制備 按處方比例配制缺降香的陰性空白對照樣品，按“2.4.2”項下方法制備陰性樣品溶液。

2.4.4 色譜條件 色譜柱:DiamonsilTM十八烷基鍵合硅膠柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相:甲醇-水(體積比82∶18)；流速:1 mL/min；檢測波長:210 nm；柱溫:30℃；進樣量:10 μL。理論塔板數以橙花叔醇計不得小于5 000，待測組分與其他峰的分離度良好。分別精密吸取對照品、供試品、陰性樣品溶液10 μL，注入液相色譜儀，依法測定。結果表明，陰性樣品在與對照品溶液相應的保留時間處無峰出現，表明本品中其他成分對待測組分測定無干擾；理論塔板數以橙花叔醇計不得小于5 000，待測組分與其他峰的分離度應良好。見圖4。

圖4 川降養心滴丸中橙花叔醇測定的高效液相色譜圖Figure 4 Chromatograms of nerolidol from Chuanjiang Yangxin pills

2.4.5 線性關系的考察 分別精密吸取質量濃度為75.12 μg/mL的橙花叔醇對照品溶液2.0、6.0、10.0、12.0、16.0、20 μL注入高效液相色譜儀，測定峰面積，以峰面積為縱坐標，相應的進樣量為橫坐標繪制標準曲線。得橙花叔醇的回歸方程為Y＝2.7× 107X-5.8×104，r＝0.999 9(n＝6)，結果表明橙花叔醇在0.15～1.5 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.4.6 精密度試驗 分別精密吸取橙花叔醇質量濃度75.12 μg/mL的對照品溶液10 μL，按“2.4.4”項下條件連續進樣測定6次。測得橙花叔醇峰面積RSD值為0.51%(n＝6)，表明儀器精密度良好。

2.4.7 穩定性試驗 取同一供試品溶液(批號: 20130612)，分別于0、2、4、6、8、10、12 h進樣，按“2.4.4”項下色譜條件測定，計算橙花叔醇的質量分數。結果丁烯基苯酞質量分數的RSD值為1.85% (n＝7)，表明供試品溶液在12 h內穩定。

2.4.8 重復性試驗 取同一批(批號:20130612)川降養心滴丸，按“2.4.2”項下方法平行制備6份供試品溶液，分別精密吸取10 μL注入液相色譜儀，按“2.4.4”項下色譜條件測定，結果橙花叔醇質量分數的RSD值為1.56%(n＝6)，表明本法重復性良好。2.4.9 加樣回收率試驗 分別精密稱取已知質量分數(橙花叔醇質量分數為1.425 mg/丸)的同一批(批號:20130612)川降養心滴丸6份，每份約25 mg，精密稱定，分別加入質量濃度0.724 mg/mL的橙花叔醇對照品溶液1 mL，按照“2.4.2”項下方法制備供試品溶液。分別精密吸取供試品溶液10 μL，按照“2.4.4”項下色譜條件測定橙花叔醇的質量分數，分別計算其加樣回收率。結果見表2。

表2 川降養心滴丸中橙花叔醇的加樣回收率試驗結果Table 2 Recovery results of nerolidol from Chuanjiang Yangxin pills(n＝6)

2.4.10 樣品的測定 分別取3批川降養心滴丸，各約25 mg，精密稱定，按照“2.4.2”項下方法制備供試品溶液，每批平行操作2次。分別精密吸取供試品溶液10 μL，按照“2.4.4”項下色譜條件測定橙花叔醇的質量分數，結果批號20130612、20130614、20130616川降養心滴丸中橙花叔醇的質量分數分別為0.361、0.359、0.367 mg/丸，平均質量分數為0.363 mg/丸。以平均質量分數的80%作為下限，可規定本品橙花叔醇的質量分數不低于0.290 mg/丸。

3 討論

TLC鑒別試驗中，分別建立了方中主藥川芎和降香的薄層色譜鑒別方法，通過優化展開劑和顯色劑等條件，樣品色譜圖中主要斑點與對照藥材中的主要斑點吻合，且陰性無干擾，所建立方法較理想。

在質量分數測定試驗中，曾選用不同比例的甲醇-H2O系統為流動相做了比較，最后選擇以甲醇-H2O(體積比66∶34)和甲醇-H2O(體積比82∶18)分別作為流動相時，待測組分分離效果好、峰形較好、出峰時間適當。另外試驗過程中對樣品的超聲處理時間也進行了考察，確定超聲 20 min即可提取完全。

本試驗建立了川降養心滴丸的鑒別和質量分數測定項目，方法簡單、可靠準確、專屬性強，為本制劑的質量控制提供了依據。下一步考慮將方法進一步簡化，如采用梯度洗脫同時測定川降養心滴丸中的丁烯基苯酞和橙花叔醇等。

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(責任編輯:劉曉涵)

Study on quality standard for Chuanjiang Yangxin pills

WU Xiuqin，HE Wei，WEN Yinghong
(Department of Medicine，Zhujiang Hospital of Southern Medical University，Guangzhou 510282，China)

ObjectiveTo establish the quality standard for Chuanjiang Yangxin pill.MethodsSzechwan lovage rhizome and rosewood were identified by TLC.N-butylidenephthalide and nerolidol were determined by HPLC.ResultsThe characteristic identification by TLC was distinct and highly specific.N-butylidenephthalide showed a good linearity in the range of 0.093 12-0.931 2 μg(r＝0.999 8，n＝6)，and the average recovery was 96.50%(RSD＝1.08%，n＝6).Nerolidol had a good linearity within the range of 0.15-1.5 μg(r＝0.999 9，n＝6)，the average recovery was 96.71%(RSD＝1.40%，n＝6).ConclusionThe method was reliable，accurate and specific.It could be used for quality control of Chuanjiang Yangxin pills.

Chuanjiang Yangxin pill；quality standard；TLC；HPLC；N-butylidenephthalide；nerolidol

R284.1

:A

10.3969/j.issn.1006-8783.2015.05.012

1006-8783(2015)05-0612-05

2015-05-29

吳秀芹(1980—)，女，藥師，學士，從事藥物質量研究，電話:020-62782125，Email:wxq＿560＠163.com。

時間:2015-09-30 15:20

http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20150930.1520.002.html