益母草注射液有效部位對大鼠離體子宮活動的影響

謝曉芳， 熊 亮， 李 丹， 李 燕， 李夢婷， 彭 成*

（1.成都中醫藥大學藥學院，四川成都610075；2.成都中醫藥大學藥學院，中藥材標準化教育部重點實驗室，中藥資源系統研究與開發利用省部共建國家重點實驗室培育基地，四川成都610075）

益母草注射液有效部位對大鼠離體子宮活動的影響

謝曉芳1，2， 熊 亮1，2， 李 丹1，2， 李 燕1，2， 李夢婷1， 彭 成1，2*

（1.成都中醫藥大學藥學院，四川成都610075；2.成都中醫藥大學藥學院，中藥材標準化教育部重點實驗室，中藥資源系統研究與開發利用省部共建國家重點實驗室培育基地，四川成都610075）

目的探討益母草注射液有效部位對正常大鼠離體子宮平滑肌活動的影響。方法由益母草注射液浸膏 （LH）制備益母草注射液水溶性非生物堿部位 （LH-1-A）和水溶性總生物堿部位 （LH-1-B），分別配成43.0、7.8、9.3 mg/mL，分別給予低、中、高劑量的LH（0.081、0.162、0.324mg/mL）、LH-1-A（0.029、0.058、0.116mg/mL）和LH-1-B（0.035、0.070、0.140 mg/mL）作用于正常雌性大鼠非痙攣性離體子宮，對縮宮素所致痙攣子宮給予高劑量，采用BL-420E生物機能系統記錄子宮收縮的頻率、張力 （最大值、最小值和平均值）和活動力，比較給藥前后的變化。結果LH和LH-1-B可使正常大鼠非痙攣性離體子宮收縮張力 （最小值、平均值）和活動力明顯增強，LH-1-A使子宮收縮頻率、張力和活動力均明顯下降，與給藥前比較均有顯著性差異 （P＜0.05或P＜0.01）；LH和LH-1-A對痙攣性離體子宮可明顯降低張力最大值、平均值和活動力，LH-1-A還明顯減少收縮頻率，而LH-1-B則升高張力最小值和降低張力最大值、平均值，與造模后比較均有顯著性差異 （P＜0.05或P＜0.01）。結論益母草注射液在體外具有收縮子宮和緩解子宮痙攣作用，其中水溶性生物堿部位是子宮收縮作用的主要物質基礎，水溶性非生物堿部位是緩解子宮痙攣的主要物質基礎。

益母草注射液；有效部位；離體子宮

益母草注射液是由中藥益母草制備而來的中成藥，屬子宮收縮藥，常用于產后子宮修復和產后止血，臨床效果顯著［1］。目前關于益母草注射液縮宮止血的臨床研究很多，顯示療效顯著、可靠，但其調節子宮活動的藥理作用機制和活性物質基礎尚不明確。雖有研究報道益母草生物堿是其縮宮的活性部位，但其非生物堿部位藥理作用不明［2-3］。鑒于益母草注射液是縮宮止血藥，課題組在前期研究中對益母草注射液的不同提取部位開展了活血作用物質基礎研究，發現益母草注射液中存在止血和活血的雙重成分，其中水溶性總生物堿部位具有止血作用，而水溶性非生物堿部位具有活血作用，是益母草注射液縮宮止血的重要物質基礎［4］。然而，這些活性部位對子宮活動的作用尚不清楚。因此，本課題采用大鼠離體子宮肌條模型，初步研究益母草注射液水溶性總生物堿部位和水溶性非生物堿部位對離體子宮活動的作用，以揭示益母草注射液縮宮止血的藥效物質基礎，為優化益母草注射液生產工藝、提升產品質量提供科學依據。

1 材料

1.1 藥物 益母草注射液浸膏，由成都第一藥業集團有限公司提供，為益母草注射液制備工藝中最后稀釋制備成品前的濃縮浸膏，每1 g相當于1 mL/支益母草注射液成品為0.2 g/支；益母草注射液水溶性總生物堿部位 （LH-1-B）和水溶性非生物堿部位（LH-1-A）由益母草注射液浸膏提取制備，與成品的換算分別為0.046 7、0.038 9 g/支。用前將3個樣品均用蒸餾水配成0.2支/mL，按提取物計算即分別配成43.0、7.8、9.3 mg/mL，備用。

1.2 動物 SD大鼠，普通級，全雌，體質量180～220 g，由成都中醫藥大學實驗動物研究中心提供，質量合格證號：SCXK（川）2008-11，檢疫后用。

1.3 主要試劑及儀器 縮宮素注射液 （河南輔仁懷慶堂制藥有限公司，批號1204021）；苯甲酸雌二醇注射液 （天津金耀氨基酸有限公司，批號1005051）。NaCl、KCl、CaCl2、NaHCO3、葡萄糖試劑，均由成都市科龍化工試劑公司生產，采用去離子水配置洛氏液（配制方法1 000mL含NaCl9.2 g、KC1 0.42 g、CaCl20.24 g、NaHCO30.15 g、葡萄糖1.0 g）。

BL-420E生物機能系統，HW-400型張力換能器，恒溫水浴平滑肌槽，均由成都泰盟科技有限公司生產。AL 104電子天平由Mettler Toledo公司生產。

2 方法

2.1 分離制備提取物 將益母草注射液浸膏1 200 g，稀釋至1 300 mL過大孔樹脂柱，用100%純水洗脫得到LH-1，將LH-1過離子交換樹脂，用純水洗脫得到LH-1-A，然后用3 mol/L NaCl溶液洗脫得到LH-1-B。

2.2 離體子宮的制備 參考文獻［5］方法制備。取健康、成年雌性未孕大鼠，實驗前2日每日肌肉注射苯甲酸雌二醇1 mg/kg以造成動情期。于第3天頸椎脫臼處死動物，迅速剪開腹腔剖取子宮置于盛有洛氏液的玻璃皿中，輕輕剝離子宮上附著的結締和脂肪組織。取離體子宮中間段2～3 cm，一端固定于盛有洛氏液20 mL的浴槽，另一端連接張力換能器，浴槽中營養液保持在 （37.0±0.5）℃，并通以（95%O2+5%CO2）的混合氣體，速度1～2個小氣泡/s，前負荷1 g。用BL-420E生物機能系統記錄子宮收縮曲線。

2.3 給藥方法 待曲線穩定30 min，加入LH、LH-1-A和LH-1-B，采用累積給藥方式給藥，分別為：LH 37.5μL、37.5μL、75μL（終質量濃度為LH 0.081、0.162、0.324 mg/mL），LH-1-A 75μL、75μL、150μL（終質量濃度為LH-1-A 0.029，0.058，0.116mg/mL）和LH-1-B 75μL、75 μL、150μL（終質量濃度為LH-1-B 0.035，0.070，0.140 mg/ML）；每次加藥后記錄10 min離體子宮收縮活動，三次加完后用洛氏液沖洗3次，再加入等量的洛氏液，待曲線穩定后，用同樣的加藥方式加入下一組藥物；加入1 U/ML縮宮素160μL（終濃度為0.008 U/mL），記錄痙攣曲線10 Min后，分別加入LH、LH-1-A、LH-1-B的高劑量的藥液記錄10min，觀察離體子宮收縮活動的變化。空白組給予蒸餾水。曲線下面積代表收縮活力，如下公式計算抑制率：

子宮抑制率=（給藥前活力-給藥后活力）/給藥前活力×100%

2.4 統計學方法 用SPSS 17.0統計軟件進行配對t檢驗統計分析給藥前后的變化，結果以 （x±s）表示，P＜0.05為顯著性差異，P＜0.01為極顯著性差異。

3 結果

3.1 益母草注射液提取部位對正常大鼠非痙攣子宮收縮活動的影響 由表1可見，蒸餾水對正常大鼠離體子宮的收縮張力最大值、最小值和平均值無明顯影響；與給藥前比較，益母草注射液浸膏可升高子宮收縮張力最小值和平均值，其中低、高劑量組最小值和中、高劑量組平均值均顯著高于給藥前（P＜0.05或P＜0.01）；LH-1-A明顯降低收縮張力最大值和平均值，中劑量也明顯降低平均值 （P＜0.05或P＜0.01）；LH-1-B高、中、低劑量組均可升高收縮張力的最大值、平均值和最小值，其中高劑量組對3個張力均有顯著效果，低、中劑量分別對最小值和最大值有顯著效果（P＜0.05或P＜0.01）。

表1 益母草注射液提取部位對正常大鼠非痙攣離體子宮收縮張力的影響 （x±s）

由表2可見，與給藥前比較，空白組蒸餾水對子宮收縮頻率和活力無明顯影響；益母草注射液浸膏中、高劑量組和LH-1-A高、中、低劑量組收縮頻率明顯降低，但浸膏高、中劑量組收縮活力明顯增強，而LH-1-A中、低劑量組收縮活力明顯下降，與對應給藥前比較均有顯著性差異（P＜0.05或P＜0.01）；LH-1-B對正常大鼠離體子宮收縮頻率無明顯影響，但可均加收縮活力，且高劑量組與給藥前比較差異顯著 （P＜0.05）。從抑制率可看出，益母草注射液浸膏和LH-1-B為促進子宮收縮作用，LH-1-A為抑制子宮收縮作用。

表2 益母草注射液提取部位對正常大鼠非痙攣離體子宮收縮頻率和活力的影響 （x±s）

3.2 益母草注射液提取部位對正常大鼠痙攣性離體子宮收縮活動的影響 由表3～表5可見，當給予縮宮素終濃度為0.008 U/mL時，大鼠離體子宮立即出現痙攣狀態，表現為收縮張力基線明顯抬高，收縮頻率增大或呈持續高直線狀態，收縮張力最大值、最小值和平均值明顯升高，收縮活力也明顯增加 （P＜0.01）；待穩定10 min后給予浸膏或不同提取部位高劑量，其中浸膏組收縮張力最大值、平均值和收縮活力均明顯下降，LH-1-A組收縮頻率、最大值、平均值和收縮活力均明顯下降，LH-1-B組收縮平均值和最大值均明顯降低，但最小值升高，以上差異均有統計學意義 （P＜0.05或P＜0.01）。從抑制率看，益母草注射液浸膏和LH-1-A主要表現為抑制縮宮素所致子宮平滑肌痙攣，LH-1-B作用不明顯，但亦無協同作用。

表3 益母草注射液提取部位對正常大鼠痙攣性離體子宮收縮頻率和張力平均值的影響 （x±s）

表4 益母草注射液提取部位對正常大鼠痙攣性離體子宮收縮張力最大值、最小值的影響 （x±s）

表5 益母草注射液提取部位對正常大鼠痙攣性離體子宮收縮活力的影響 （x±s）

4 討論

益母草是一味常用的活血調經、利水消腫的中藥，常用于治療月經不調、產后腹痛、尿不利、水腫等［6］。益母草注射液是益母草單方制劑，臨床常與縮宮素聯合使用預防或治療產后和流產后子宮出血，療效顯著［7-8］。離體子宮收縮試驗是常用的評價藥物對子宮收縮作用的試驗，方法經典，操作簡單、用藥量少。因此，本實驗采用正常大鼠離體子宮研究益母草注射液中不同提取物對大鼠離體子宮活動的影響，以期明確益母草注射液對子宮活動的調節作用及其藥效物質基礎。

現代藥理研究顯示，益母草具有調經作用，其中水部位和正丁醇部位是主要物質基礎［9］，當前明確報道對子宮有活性的益母草單體化合物有益母草堿和水蘇堿鹽［10］；如有報道鹽酸益母草堿可明顯減少不完全流產大鼠的陰道出血量和縮短出血時間，機制與促進子宮收縮頻率和張力、升高血清雌二醇水平有關［11］；另有報道鹽酸益母草堿0.03、0.06、0.09 mg/mL和鹽酸水蘇堿0.12、0.18 mg/mL對縮宮素所致大鼠離體子宮痙攣分別表現為抑制和協同增強作用［12］。益母草注射液是由益母草制備而來，主要含有益母草水溶性部位，現以水蘇堿為其定量測定指標。然而，雖然有大量基于臨床觀察的實驗研究報道益母草注射液聯合縮宮素對產后和流產后陰道出血有良好作用，但基于臨床前觀察的縮宮止血研究報道未見，其作用機制和藥效物質基礎更不清楚。因此，本課題在前期益母草注射液止血作用研究基礎上，開展益母草注射液的縮宮作用物質基礎研究，將對產品的二次開發有重要意義。

在本實驗的劑量范圍內，益母草注射液浸膏給藥劑量是其不同提取部位劑量的50%。實驗結果顯示，益母草注射液浸膏和LH-1-B對正常大鼠離體子宮有興奮作用，二者的興奮作用都主要是通過增強子宮收縮張力增強其活動力，對收縮頻率無明顯影響；同時，在高劑量下，益母草注射液流浸膏抑制縮宮素所致正常大鼠離體子宮痙攣，LH-1-B則可與縮宮素協同增強子宮收縮張力平均值和最小值。另一方面，LH-1-A對正常大鼠離體子宮呈現抑制作用，并可抑制縮宮素所致子宮痙攣狀態，主要是通過降低收縮頻率和張力而抑制活動力，其中LH-1-A抑制作用強于LH。以上結果表明，益母草注射液中存在興奮子宮收縮和抑制子宮收縮的不同物質，其中LH-1-B是益母草注射液縮宮作用的主要有效部位，其他部位是抑制成分；其次，相對劑量小的浸膏抑制縮宮素引起的正常大鼠離體子宮收縮，而相對劑量大的LH-1-B可增強縮宮素引起的子宮痙攣，表明益母草注射液的縮宮作用與劑量相關，與縮宮素聯合用藥的縮宮作用需要較大劑量才能起效。

本研究提示，益母草注射液的縮宮止血作用是多成分、多途徑共同作用的結果，至少包括水溶性生物堿部位的縮宮作用和水溶性非生物堿部位的止血作用，但兩者之間的關系及深層機制有待進一步研究。

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R285.5

：B

：1001-1528（2015）05-1103-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.05.041

2014-06-18

國家 “十二五”科技支撐計劃 （2011BAI13B05）；國家 “973”項目 （2012CB723502）；國家自然科學基金資助項目（81303209）；四川省科技廳青年科技創新研究團隊專項計劃項目 （2014TD0007）

謝曉芳 （1983—），女，博士，研究方向為中藥藥理與毒理。Tel：13980522864，E-mail：xxf14544@163.com

*通信作者：彭 成 （1964—），男，教授，博士生導師，研究方向為中藥藥理與毒理。Tel：（028）61800005，E-mail：pengchengchengdu@126.com