HPLC 法測定烈香杜鵑不同藥用部位中的4 種黃酮類成分

羅興平， 楊玲霞， 魏亞軍

(1. 西北民族大學化工學院，甘肅 蘭州730030;2. 甘肅省食品藥品檢驗研究院，甘肅 蘭州730070)

烈香杜鵑藏藥名達里，收載于《衛生部藥品標準藏藥(第一冊)》，為杜鵑花科植物烈香杜鵑Rhododendron anthopogonoides Maxim 的干燥花和葉，也是藏族人民的常用藥材，其味甘、澀，性平，具有清熱消腫和補腎功效，藏醫常用于治療培根病、肺病、脾胃虛寒、消化不良、水土不服等［1］，主要分布于甘肅、青海、西藏等西部地區［2-5］。現代化學及藥理研究表明，烈香杜鵑中存在多種黃酮類化合物，具有明顯的抗炎和鎮痛作用，對類風濕性關節炎的治療效果良好［6-15］。該植物的藥用部位在不同地區差別較大，如西藏以花、葉為主，而甘肅甘南藏區則多為帶葉嫩枝［2］。本實驗采用HPLC法，分別測定了西藏自治區和甘肅省甘南藏族自治州產烈香杜鵑花、葉、嫩枝中金絲桃苷、槲皮素、山柰酚、異鼠李素這4 種黃酮類成分的含有量，為該植物的合理臨床用藥提供理論依據。

1 儀器、試藥和藥材

LC-2010A HPLC 色譜儀(日本島津公司)。金絲桃苷 (批號111521-200303)、槲皮素 (批號100081-200406，純度以93.3% 計)、山柰酚(批號110861-2004050)、異鼠李素 (批號110860-200407)對照品(中國食品藥品檢定研究院)。甲醇為色譜純(德國Merck 公司);水為超純水(自制);其他試劑均為分析純。

烈香杜鵑(甘肅省甘南州瑪曲縣醫藥公司、甘南州卡加曼寺藏醫院、西藏自治區藏藥廠、西藏自治區醫藥公司)，由甘肅省食品藥品檢驗所中藥室楊玲霞副主任藥師鑒定為杜鵑花科植物烈香杜鵑R. anthopogonoides。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 Kromasil C18色譜柱(4.0 mm ×250 mm，5.0 μm);流動相為甲醇-0.1%磷酸水溶液(50 ∶50);體積流量1.0 mL/min;檢測波長360 nm。此條件下，金絲桃苷、槲皮素、山柰酚、異鼠李素與其他組分基線分離良好，理論塔板數按槲皮素峰計為8 580。

2.2 對照品溶液制備 分別精密稱取金絲桃苷6.12 mg、槲皮素5.26 mg、山柰酚1.05 mg、異鼠李素2.06 mg，置于50 mL 量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液制備 精密稱取藥材細粉2 g，置于錐形瓶中，加入甲醇20 mL，超聲處理40 min，放冷，甲醇補足減少質量，搖勻，過濾后取續濾液，即得。在“2.1”項色譜條件下，分別精密吸取“2.2”項下對照品溶液5 μL 和“2.3”項下供試品溶液10 μL，注入HPLC 色譜儀進行測定。結果，金絲桃苷、槲皮素、山柰酚、異鼠李素與相鄰組分基線完全分離，峰形良好，保留時間分別為6.5 和15.7 min，見圖1。

2.4 線性關系 分別精密吸取“2.2”項下對照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL，置于10 mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。然后，取其中10 μL 注入HPLC 色譜儀中進行測定，以各成分峰面積為縱坐標(Y)，對照品量(μg)為橫坐標(X)，建立標準曲線，結果見表1。

圖1 對照品和樣品的HPLC 圖Fig.1 HPLC chromatograms of reference substances andsamples

表1 線性關系測定結果Tab.1 Determination result of linear relationships

2.5 精密度試驗 精密吸取“2.2”項下對照品溶液5 μL，連續進樣6 次，測定峰面積RSD。結果，金絲桃苷、槲皮素、山柰酚、異鼠李素的RSD 分別為0.1%、0.1%、1.8%和1.4%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復性試驗 取同一批次6 號樣品(產地為甘肅省甘南州)6 份，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，然后精密吸取其中10 μL 進樣測定并計算。結果，樣品中金絲桃苷、槲皮素、山柰酚、異鼠李素的含有量分別為0.56、0.46、0.06、0.21 mg/g，RSD 分別為1.4%、2.0%、2.6%、2.4%，表明該方法重復性良好。

2.7 穩定性試驗 精密稱取6 號樣品(產地為甘肅省甘南州)2.0 g，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，在“2.1”項色譜條件下，分別于0、2、4、6、8、10 h 進樣測定。結果，金絲桃苷、槲皮素、山柰酚、異鼠李素的RSD 分別為0.8%、1.2%、2.0%、2.5%，表明供試品溶液穩定性良好。

2.8 回收率試驗 精密稱取6 號樣品1.0 g (金絲桃苷、槲皮素、山柰酚、異鼠李素的含有量分別為0.56、0.46、0.06，0.21 mg/g)，共6 份，分別精密加入對照品溶液5 mL，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，在“2.1”項色譜條件下測定，計算平均回收率。結果，金絲桃苷、槲皮素、異鼠李素、山柰酚的平均回收率分別為98.5%、98.6%、95.7%、97.1%，RSD 分 別 為 2.3%、2.8%、1.3%、2.7%，表明該方法回收率良好。

2.9 樣品的測定 對烈香杜鵑的花、葉、嫩枝進行成分測定，結果見表2。

表2 樣品測定結果Tab.2 Determination result of samples

3 討論

穩定合格的藥材質量是保證制劑藥效的物質基礎［16］，它與藥材的產地、藥用部位等因素密切相關。其中，不同產地因其生態環境有別，會導致藥材質量的差異，而且不同藥用部位所含化學成分的種類、比例及含有量差異也會較大，進而直接影響藥材的安全性及藥效。因此，對藥材的產地及不同藥用部位進行研究具有很重要的臨床意義。

《衛生部藥品標準藏藥(第一冊)》規定，烈香杜鵑的藥用部位為干燥花和葉［1］。但在收集藥材時發現，藏區有的以花(90%花，混有少量葉，無嫩枝)入藥，有的以葉(90%葉，混有少量花，無嫩枝)入藥，還有的以嫩枝(85%嫩枝，混有少量葉和花)入藥。因此，對該植物的嫩枝、葉、花分別進行黃酮類成分含有量的考察，對指導臨床用藥具有很重要的現實意義。

在烈香杜鵑不同藥用部位中，金絲桃苷的含有量由高到低，依次為葉＞花＞嫩枝;槲皮素含有量依次為嫩枝＞葉＞花;山柰酚和異鼠李素含有量主要為嫩枝，而花和葉含微量或基本不含兩者。而且，不同產地和藥用部位的總黃酮含有量也有差異。

烈香杜鵑嫩枝中不僅槲皮素的含有量較高，而且存在山柰酚和異鼠李素，具有一定的藥用價值。因此，如果能進一步比較研究該植物嫩枝、花、葉的藥理作用，將為烈香杜鵑的臨床應用提供更好的理論依據。

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