摩腹對雄性去勢大鼠皮質醇的影響

馬尚清，樊 竹，徐嘉興，姚慧娟，張 月，陳幼楠

(北京中醫藥大學針灸推拿學院，北京100029)

隨著人們對自身健康關注度的增加，男性更年期越來越受到重視。所謂男性更年期，是一種男性的、伴隨增齡而逐漸出現的雄激素水平降低狀態［1］，是內分泌系統紊亂的表現，40歲男性人群中雄激素缺乏的發生率為2%～5%，70歲時則升至30%～70%［2］，而其原因多與睪丸的退化有關。雄激素水平的降低將導致下丘腦－垂體－腎上腺皮質軸(HPA軸)分泌功能的紊亂，而HPA軸分泌功能的紊亂往往導致糖尿病、抑郁癥等多種疾病的發生，腎上腺皮質是性腺軸與HPA軸發生相互作用的重要區域［3］。摩腹作為腹部按摩的經典手法直接作用于皮膚，而皮膚與中樞神經系統有相同的神經外胚層來源，與中樞的HPA軸系統可能存在著某種聯系［4］。推拿對內分泌疾病有著很好的療效，因此推測摩腹可能與改善腎上腺皮質的分泌功能有關。本文通過對血清激素的檢測及腎上腺皮質的形態觀察，探討摩腹對雄性去勢大鼠HPA軸分泌功能的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組 健康SPF級SD大鼠，雄性，40只，體質量(200±20)g，由北京斯貝福實驗動物技術有限公司提供［SCXK(京)2012-0001］。隨機分為模型摩腹組、模型對照組、空白摩腹組、空白對照組，每組10只。對動物的處置符合《關于善待實驗動物的指導性意見》。

1.2 主要試劑與儀器 血清皮質酮(CORT)、促腎上腺皮質激素(ACTH)、促腎上腺激素釋放激素(CRH)ELISA檢測試劑盒;光學顯微鏡(日本Nikon公司)。

1.3 模型制備 模型對照組、模型摩腹組的20只大鼠造模方法采用邵氏法［5］。麻醉后大鼠仰臥位固定，將大鼠的睪丸擠入陰囊底部，陰囊術區碘伏消毒，切開陰囊皮膚、內膜和總鞘膜。將睪丸擠出陰囊外，在睪丸上方的精索處結扎，切斷精索并摘除睪丸，將精索斷端退入鞘膜管內，縫合組織及皮膚。同一程序切除另一側的睪丸。連續肌注青霉素3 d預防感染，5×104U/只，1次/d，靜養1周待傷口愈合。

1.4 干預方法 模型摩腹組大鼠造模后進行摩腹干預，以自制黑布袋套住大鼠頭部，減少大鼠恐懼心理。以左手固定大鼠于俯臥位，右手食、中指并排伸至腹部，摩腹區域涵蓋肋弓下至下腹部區域，力度以不帶動皮膚滑動為準。操作程序為逆時針摩腹5 min(60圈/min)，順時針摩腹5 min(60圈/min)，隔日摩腹1次，連續10周［6］。模型對照組大鼠造模后同期正常飼養并作套袋處理。空白摩腹組大鼠不造模，與模型摩腹組行相同的摩腹刺激?？瞻讓φ战M大鼠不造模，同期正常飼養并作套袋處理。由于飼養過程中不確定因素導致死亡者剔除。

1.5 指標檢測

1.5.1 樣本采集 造模后第3，13周，所有大鼠以10%水合氯醛腹腔注射麻醉，常規消毒，心臟取血。第13周取血后暴露腹腔迅速剝離左側腎上腺，以10%中性甲醛緩沖溶液固定。

1.5.2 血清激素水平測定 收集血樣后分離血清，采用ELISA法測定各組大鼠血清CORT、ACTH和CRH水平。

1.5.3 腎上腺皮質形態觀察 取經10%中性甲醛緩沖液固定的腎上腺組織，常規脫水后石蠟包埋，4～5 μm切片，常規脫蠟、水化，蘇木精襯染10 min，水洗1 min，0.5%伊紅著色5 min，常規脫水、透明、封片，在光學顯微鏡下觀察各組大鼠腎上腺皮質形態學改變。

1.6 統計學方法 運用SPSS 17.0軟件分析，計量資料以均數±標準差(±s)表示，對數據進行正態性檢驗，采用t檢驗與非參數檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠體質量比較 各組大鼠隨機分組，各組平均體質量基本保持一致(370±10)g，當干預結束后發現空白摩腹組與空白對照組的體質量基本保持一致(440±10)g，模型摩腹組的體質量較其他2組有升高(450±10)g，模型對照組體質量升高更為顯著(473±10)g，高于其他各組。

2.2 各組大鼠血清激素水平比較 造模后第3周，兩模型組CORT、ACTH、CRH與空白對照組相比含量減少，差異有統計學意義(P＜0.05)，表明模型制備成功。見表1，表2。

表1 造模后第3周雄性大鼠各組激素含量比較(±s)ng/mL

表1 造模后第3周雄性大鼠各組激素含量比較(±s)ng/mL

注:與空白對照組比較，#P＜0.05

CORT ACTH CRH空白對照組 8 37.11 ±13.88 6.58 ±1.69 4.39 ±1.01組 別 n空白摩腹組 8 40.22 ±22.88 6.92 ±1.15 3.84 ±0.33模型對照組 10 2.99 ± 0.94# 4.57 ±0.35# 3.24 ±0.54#模型摩腹組 9 3.72 ± 0.92# 4.63 ±0.38# 3.42 ±0.44#

表2 造模后第13周雄性大鼠各組激素含量比較(±s)ng/mL

表2 造模后第13周雄性大鼠各組激素含量比較(±s)ng/mL

注:與空白對照組比較，#P＜0.05;與模型對照組比較，△P＜0.05

CORT ACTH CRH空白對照組 8 53.07 ±42.74組 別 n 4.28 ±0.93 3.36 ±0.64空白摩腹組 8 124.30 ±97.87 5.07 ±1.29 4.01 ±0.62模型對照組 10 1.20 ± 0.42# 3.93 ±0.44 3.58 ±0.69模型摩腹組 9 2.14 ± 0.68△4.34 ±0.83 3.98 ±0.41

2.3 光鏡下腎上腺皮質形態觀察 空白對照組腎上腺皮質區球狀帶見細胞呈低柱狀或立方形，排列成球形細胞團，核小而圓，染色深，胞質少，弱嗜堿性，含少量脂肪空泡;束狀帶細胞體積大，胞核染色淺，位于中央。胞質內有許多小脂肪空泡;網狀帶見細胞較束狀帶的小，胞核亦小，染色深，胞質弱嗜酸性，含有少量脂肪空泡和較多脂褐素?？瞻啄Ω菇M腎上腺皮質區各層細胞與空白對照組形態基本一致;模型對照組束狀帶、網狀帶厚度降低，束狀帶細胞體積減小，核染色深，核仁不明顯，固縮細胞增多。模型摩腹組束狀帶、網狀帶厚度增加，細胞體積較大，核染色較淺，核仁明顯可見，伴行毛細血管較豐富，見圖1。

圖1 光鏡下腎上腺皮質形態觀察(×40)

3 討論

更年期的出現，主要是由于體內的內分泌激素水平發生了劇烈的變化，從而表現出一些自覺癥狀和體征如潮熱盜汗、性情急躁、心悸失眠、腰膝酸軟等［7］。男性更年期則大部分是睪丸內分泌功能改變，導致雄激素水平的降低，進而使HPA軸分泌功能發生紊亂，這與大鼠去勢后體內發生的變化相似。CORT是HPA軸分泌的重要激素，其變化也是影響男性更年期相關癥狀的重要因素，它的分泌不僅對人的情緒、免疫細胞的生成、血壓的維持，以及結締組織的維護有影響，而且對人體內蛋白質和脂類的代謝也有一定的作用［8］。

摩法作為最古老的推拿手法之一，很早便有記載，《禮記·內則》云:“灌手以摩之，去其皺”;《素問·病能論篇第四十六》曰:“切之摩之”;《厘正按摩要術》說:“揉法，推、運、搓、搖等法，均從摩法出也。”可見摩法是推拿治療中的一個大法。作為中醫推拿中的一個重要手法，摩法在臨床中有著非常廣泛的應用，常配合摩膏或單獨徒手使用，其治療內分泌及生殖系統疾病有良好的療效。所謂摩腹，就是將摩法主要運用于腹部的按摩手法。摩腹不僅運用于治療，同時也運用于養生保健中，清代《女丹合編選注·女丹要言》介紹婦女自我保健按摩時說“婦女可以按摩之法用之。當早起靜坐一刻，以右手向內按定心，左手在腹臍撫摸二十下，隨手摩至腰，一揉一拍”。方開的《延年九轉法》更是大量論述摩腹，提出長期摩腹具有“卻病延年”之功。正是由于摩法在治療與保健中的特殊作用，《素問·至真要大論》才將整個手法概以“摩之”［9］。有研究［10］表明，推拿按摩手法的適度刺激，經內側感覺傳導系統，使人體處于一種良性的應激狀態中，促進人體β-內啡肽等相關物質的合成，從而影響內分泌功能，影響生長發育、消化吸收、損傷康復和免疫應激。

本實驗結果提示摩腹對于生理狀態下HPA軸代謝無干預作用，但對病理狀態下的HPA軸的分泌可起到調節作用。模型摩腹組CORT與模型對照組相比有明顯的變化，而ACTH與CRH含量無明顯變化，推測可能有如下原因:摩腹作為腹部的一種推拿手法，作用于腹部的皮膚感受器、神經、血管等組織，對腹腔臟器的功能失調有明確的治療作用;腎上腺位于腹腔后側，被腹膜覆蓋，故當摩腹刺激腹部的各種皮膚、血管感受器時，可能影響了腎上腺皮質的分泌，體現了推拿手法的近治作用［1］。本次實驗所測樣本來源均為外周血，并未對下丘腦與垂體局部的激素水平進行檢測。丘腦和垂體作為HPA軸的上游調節中樞，受多方面的因素調節，這種調節可能對外周血中ACTH和CRH的含量產生影響，這也許是外周血中ACTH與CRH的含量差異無統計學意義的原因。同時，對于上游調節中樞來說，摩腹屬于遠端干預，這種干預若想對其產生影響必定需要一定量的積累，本次試驗僅干預了10周，遠少于臨床內分泌疾病常規調理時長，ACTH與CRH的陰性結果可能與此也有重要關聯。

綜上所述，摩腹可以改變病理狀態下HPA軸中CORT的分泌狀態，這種改變的途徑是“局部效應”，體現了推拿按摩可以改善系統的內能，起到調節信息的作用。鑒于本實驗關于CORT的研究結果，筆者認為摩腹可作為一種日常改善男性更年期癥狀的保健手法來應用于臨床。

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