下調(diào)細(xì)胞色素P450表達(dá)與模擬妊娠高血壓綜合征的實(shí)驗(yàn)研究

李 偉，郭建寧

（山東省濰坊市坊子區(qū)人民醫(yī)院，山東 濰坊 26120）

下調(diào)細(xì)胞色素P450表達(dá)與模擬妊娠高血壓綜合征的實(shí)驗(yàn)研究

李 偉，郭建寧

（山東省濰坊市坊子區(qū)人民醫(yī)院，山東 濰坊 26120）

目的研究妊高癥患者中表達(dá)細(xì)胞色素P450（CYP450）表達(dá)的特點(diǎn)。方法通過動(dòng)物研究中妊娠大鼠和胎鼠生長(zhǎng)發(fā)育受CYP450的影響的比較，并對(duì)動(dòng)物進(jìn)行血壓監(jiān)測(cè)、妊娠大鼠及胎鼠分化發(fā)育情況檢查及蛋白質(zhì)印跡法，分析CYP450對(duì)大鼠胚胎分化發(fā)育的影響。結(jié)果以實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組比較，對(duì)于CYP450受抑制的實(shí)驗(yàn)組大鼠血壓升高顯著（113.4±6）mmHg及對(duì)照組（97.8±5）mmHg，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組在胎鼠的發(fā)育，包括體重、長(zhǎng)度和胎盤重等方面比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），數(shù)據(jù)如下：（1.50±0.25）g和（2.44土0.53）g，（2.20±0.95）com和（2.98土0.46）com，（0.31±0.15）g和（0.55±0.09）g。同時(shí)CYP450受抑制組大鼠胎盤里另一細(xì)胞色素2C23（CYP2C23）水平明顯下降。結(jié)論大鼠胎盤和胎鼠分發(fā)發(fā)育有潛在地受CYP2C23影響的可能，妊高癥的發(fā)病與CYP450表達(dá)降低密切相關(guān)。

CYP450；妊高癥；胚胎發(fā)育

妊娠高血壓綜合癥是婦產(chǎn)科常見的對(duì)孕婦及胎兒造成嚴(yán)重威脅的疾病，其簡(jiǎn)稱為妊高癥，可造成患者及胎兒的嚴(yán)重后遺癥，如胎兒發(fā)育不良，甚至死亡，因而我們應(yīng)關(guān)注妊高癥的防治。然而目前的臨床諸多研究并未對(duì)該病的發(fā)生機(jī)制進(jìn)行闡明［1］，在現(xiàn)有的研究結(jié)果中我們認(rèn)識(shí)到，妊娠的個(gè)體有著正常的與身體改變享福的生理變化，腎組織中CYP450的變化呈規(guī)律性。這里我們通過這一發(fā)現(xiàn)并使用甲磺酰基-6-（2-丙氧基-苯基）己烷（MSPPOH）對(duì)細(xì)胞色素P450進(jìn)行針對(duì)性抑制，探索CYP450在妊娠高血壓患者和胚胎分化發(fā)育中的影響，從而支持臨床中相關(guān)疾病的治療和預(yù)防。

1 材料與方法

1.1 一般材料

查爾斯河實(shí)驗(yàn)室（威明頓，馬薩諸塞州）妊娠后期30只大鼠，以隨機(jī)對(duì)照原則分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組從大鼠尾靜脈注射MSPPOH，劑量為20 mg/（kg·d），對(duì)照組從妊娠第15～18天尾靜脈給予同樣劑量。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

大鼠平均動(dòng)脈壓的測(cè)量：EMKA軟件（福爾斯徹市，弗吉尼亞州）；蛋白質(zhì)印跡法：賽默飛世爾公司；新西蘭白兔抗大鼠細(xì)胞色素2C23抗體，南京森貝伽生物科技有限公司；甲磺酰基-6-（2-丙氧基-苯基）己烷，由Cayman Chemical提供；在完成相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)測(cè)定的同時(shí)進(jìn)行血流動(dòng)力學(xué)的測(cè)定［2］。前期完成各種準(zhǔn)備工作，對(duì)妊娠大鼠行尾靜脈麻醉，手術(shù)得到其胚胎和胎盤，測(cè)量器重量和大小。

1.3 蛋白質(zhì)印跡法

蛋白樣品15 ug，以5% SDS-聚丙烯酰胺（SDSPAGE，含0.1%明膠）電泳分離，其目的是提高化學(xué)檢測(cè)試劑盒的細(xì)胞色素酶譜表達(dá)變法，并以β-肌動(dòng)蛋白為內(nèi)參。一抗?jié)舛龋盒挛魈m白兔抗大鼠細(xì)胞色素2C23抗體（1：5000），在電泳及相關(guān)處理后通過圖像分析，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量單位以“±s”表示，采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 抑制細(xì)胞色素酶450對(duì)妊娠大鼠血壓的影響

對(duì)于CYP450受抑制的實(shí)驗(yàn)組大鼠血壓明顯升高（113.4±6）mmHg及對(duì)照組（97.8±5）mmHg，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。對(duì)照組未注射MSPPOH，實(shí)驗(yàn)組妊娠大鼠注射了MSPPOH，平均動(dòng)脈壓比對(duì)照組妊娠大鼠明顯升高，由（97.8±5）mmHg到達(dá)（113.4±6）mmHg，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 抑制細(xì)胞色素酶對(duì)胚胎和胎盤的影響（±s）

注：以上各組數(shù)據(jù)除胎盤直徑外，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）

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2.2 抑制細(xì)胞色素對(duì)妊娠大鼠胚胎細(xì)胞色素2C23表達(dá)的影響

從表1可見，在妊高癥第20天，甲磺酰基-6-（2-丙氧基-苯基）己烷對(duì)胚胎發(fā)育數(shù)量幾乎無有影響，但是對(duì)胚胎重量、長(zhǎng)度及胎盤重量有較大影響，均使它們相對(duì)于對(duì)照組降低，兩組數(shù)據(jù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討論

妊娠期高血壓對(duì)人體的影響不僅僅局限于心血管系統(tǒng)及妊娠相關(guān)因素，還可累計(jì)其它多個(gè)系統(tǒng)，且相關(guān)機(jī)制尚不明確，所以給臨床診治帶來了困難，我們應(yīng)關(guān)注的最主要特征為母體血壓波動(dòng)性升高和胚胎妊娠期發(fā)育障礙。在正常妊娠的個(gè)體中，腎臟毛細(xì)血管CYP450的表達(dá)并不恒定［3］。本次課題以MSPPOH對(duì)細(xì)胞色素（CYP）的抑制作用來探究CYP對(duì)胚胎和胎盤重量及大小的影響，分析其對(duì)胎兒發(fā)育的影響，以及其參與妊娠期高血壓的機(jī)制。

在心血管系統(tǒng)及相關(guān)疾病中，環(huán)氧二十碳烯酸通過腎臟發(fā)揮的血壓調(diào)節(jié)作用而產(chǎn)生影響，其中最主要的作用為水鈉排出和血管的舒張作用。環(huán)氧二十碳烯酸是一種內(nèi)皮源性血管擴(kuò)張因子，亦屬于內(nèi)皮源性超極化因子家族。大鼠胚胎中的CYP2C23可被MSPPOH選擇性抑制，這也間接導(dǎo)致了妊娠大鼠在研究中胚胎和胎盤的重量均下降，胚胎變小。同時(shí)胚胎產(chǎn)生的數(shù)量所受影響不明顯，可能與妊娠大鼠被應(yīng)用藥物以及實(shí)驗(yàn)藥物的用量及反映性差異有關(guān)［4］，尚待進(jìn)一步研究分析，然而妊娠高血壓胚胎特征在抑制CYP表達(dá)后得到了很好的闡釋，同時(shí)本課題中又對(duì)妊娠大鼠的實(shí)驗(yàn)前處理也得到了關(guān)于妊高癥的一個(gè)較為適當(dāng)?shù)膭?dòng)物模型。

［1］ Miyake Y.Hypertension in pregnant women Nippon Rinsho.2007，28；Suppl 4：83-7.

［2］ 黃 輝，王 彤，陳 潔，等.妊娠大鼠腎臟血流動(dòng)力學(xué)變化與腎臟微血管細(xì)胞色素P450表達(dá)的關(guān)系.中國(guó)臨床實(shí)用醫(yī)學(xué)，2008，2（11）：l-2.

［3］ Huang Hui，Venugopal T.Raju，Wang Jingfeng，Hammock BD，Wang MH Increasing or stabilizing renal epoxyeieosatrienoic acid attenuates abnormal renal function and hypertension in obese rats.Am ［J］. Physiol Renal Physiol，2007，293：342-349.

［4］ 李冬紅，楊夢(mèng)庚.胎盤與妊高征發(fā)病的關(guān)系［J］.中華婦產(chǎn)科雜志，2004，29（11）：687.

本文編輯：劉帥帥

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ISSN.2095-6681.2015.031.054.02