HPLC法測定血栓通注射液中5—羥甲基糠醛的含量

嚴赟+羅佚

【摘 要】 目的：建立高效液相色譜法測定血栓通注射液中5-羥甲基糠醛的含量。方法：色譜柱為CAPCELLPAK C18柱（4.6mm×250mm，5μm），流動相為甲醇-0.1%磷酸溶液（10∶90）；流速為0.8ml/min，柱溫25℃，檢測波長284nm。結果：5-羥甲基糠醛進樣量在0.0677～270.8ng內呈良好的線性關系（r=1.0000），平均回收率為103.07%，RSD為2.8%。結論：本方法簡便、靈敏、準確可靠，專屬性強。

【關鍵詞】 血栓通注射液；5-羥甲基糠醛；高效液相色譜法

【中圖分類號】R284.1 【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2014）06-0031-02

血栓通注射液中主要成分為三七的塊根提取物，三七藥材中含有的部分皂苷類成分都是苷元與葡萄糖結合，在提取、純化過程中有可能發生水解，產生部分葡萄糖。5-羥甲基糠醛（5-HMF）是葡萄糖等單糖化合物在高溫或弱酸等條件下脫水產生的一個醛類化合物，有報道稱該化合物有可能引發并促進結腸小囊異常生長[1]及具有一定程度的基因毒性[2]。因此，醫藥、食品等工業中往往對其產品進行5-HMF含量的控制。本文采用高效液相色譜法對血栓通注射液中的5-HMF進行測定，為該制劑的安全性評價提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agjlent 1100高效液相色譜儀；色譜柱為CAPCELLPAK C18（4.6×250mm 5μm）。

1.2 藥品與試劑 5-羥甲基糠醛（5-HMF）對照品（中國藥品生物制品鑒定所，批號：111626-200301）；血栓通注射液為隨機抽取國內各生產企業的樣品。甲醇為色譜純，水為二次重蒸水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱為CAPCELLPAK C18（4.6×250mm 5μm）；以甲醇-0.1%磷酸溶液（10：90）為流動相；流速：0.8ml/min，柱溫：25℃，檢測波長為284nm。

2.2 溶液的配制 對照品溶液的配制：取5-HMF對照品適量，精密稱定，加水制成每1ml含1μg的溶液，即得。供試品溶液直接取樣品進樣。

2.3 標準曲線的制備 取5-HMF對照品7 mg，精密稱定，置10ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml置25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。精密量取上述貯備液0.5、1.0、1.0、10ml分別置50、20、5、10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，得曲線2、3、4、5，再精密量取曲線2溶液0.5ml置20ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，得曲線1。將上述對照品溶液按上述色譜條件分別進樣10μl，以進樣量（ng）為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，計算出線性方程Y=1.1804×10X+1.2421，r=1.0000。結果表明5-HMF對照品進樣量在0.0677～270.8ng范圍內，進樣量與峰面積呈良好的線性關系。

2.4 精密度試驗 取同一份血栓通注射液供試品按上述色譜條件，連續測定5次。記錄5-HMF峰面積，RSD為1.7%，表明本法的精密度良好。

2.5 重復性試驗 取同一批血栓通注射液供試品溶液按上述方法平行測定6份，計算5-HMF含量， RSD為2.9%，結果表明，本法的重現性較好。

2.6 穩定性試驗 取同一份血栓通注射液供試品溶液按上述色譜條件，每隔一定時間測定一次，共考察13小時，計算5-HMF峰面積，RSD為1.4%。結果表明，供試品溶液至少在13小時內穩定。

2.7 回收率試驗 精密量取已知含量的血栓通注射液1ml共6份，置2ml量瓶中，分別精密加入2.3項下2號曲線對照品溶液0.1ml，加水至刻度，測定，計算加樣回收率，結果5-HMF平均回收率為103.07%，RSD為2.8%。

2.8 樣品含量測定 按擬訂的含量測定方法，測定了34批市售血栓通注射液樣品，5-HMF的含量在0.009μg/ml～1.375μg/ml之間。

3 討論

根據藥典會公示品種冠心寧注射液每日允許5-HMF的注射量為4～8mg及本品靜脈滴注1次用量2～5ml、一日1～2次進行折算，擬定血栓通注射液中5-HMF的含量限度為：每1ml所含5-HMF不得大于0.80mg。因此，按以上限度進行判斷，所測定的34批樣品中5-HMF的含量均遠低于此限度，說明血栓通注射液樣品的安全性有保障。

參考文獻

[1] Zhang XM，Chan CC，Stamp D，et a1.Initiation and promotion of colonic aberrant crypt foci in rats by 5-hydroxymethyl-2-furaldehyde in thermolyzed sucrose[J].Carcinogenesis，1993，14（4）：773-775.

[2]Surh YJ，Tannenbaum SR.Activation of the Maillard reaction product 5-（hydroxymethyl）furfural to strong mutagens via allylic sulfonation and chlorination[J].Chem Res Toxicol，1994，7（3）：313-318.

【摘 要】 目的：建立高效液相色譜法測定血栓通注射液中5-羥甲基糠醛的含量。方法：色譜柱為CAPCELLPAK C18柱（4.6mm×250mm，5μm），流動相為甲醇-0.1%磷酸溶液（10∶90）；流速為0.8ml/min，柱溫25℃，檢測波長284nm。結果：5-羥甲基糠醛進樣量在0.0677～270.8ng內呈良好的線性關系（r=1.0000），平均回收率為103.07%，RSD為2.8%。結論：本方法簡便、靈敏、準確可靠，專屬性強。

【關鍵詞】 血栓通注射液；5-羥甲基糠醛；高效液相色譜法

【中圖分類號】R284.1 【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2014）06-0031-02

血栓通注射液中主要成分為三七的塊根提取物，三七藥材中含有的部分皂苷類成分都是苷元與葡萄糖結合，在提取、純化過程中有可能發生水解，產生部分葡萄糖。5-羥甲基糠醛（5-HMF）是葡萄糖等單糖化合物在高溫或弱酸等條件下脫水產生的一個醛類化合物，有報道稱該化合物有可能引發并促進結腸小囊異常生長[1]及具有一定程度的基因毒性[2]。因此，醫藥、食品等工業中往往對其產品進行5-HMF含量的控制。本文采用高效液相色譜法對血栓通注射液中的5-HMF進行測定，為該制劑的安全性評價提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agjlent 1100高效液相色譜儀；色譜柱為CAPCELLPAK C18（4.6×250mm 5μm）。

1.2 藥品與試劑 5-羥甲基糠醛（5-HMF）對照品（中國藥品生物制品鑒定所，批號：111626-200301）；血栓通注射液為隨機抽取國內各生產企業的樣品。甲醇為色譜純，水為二次重蒸水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱為CAPCELLPAK C18（4.6×250mm 5μm）；以甲醇-0.1%磷酸溶液（10：90）為流動相；流速：0.8ml/min，柱溫：25℃，檢測波長為284nm。

2.2 溶液的配制 對照品溶液的配制：取5-HMF對照品適量，精密稱定，加水制成每1ml含1μg的溶液，即得。供試品溶液直接取樣品進樣。

2.3 標準曲線的制備 取5-HMF對照品7 mg，精密稱定，置10ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml置25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。精密量取上述貯備液0.5、1.0、1.0、10ml分別置50、20、5、10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，得曲線2、3、4、5，再精密量取曲線2溶液0.5ml置20ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，得曲線1。將上述對照品溶液按上述色譜條件分別進樣10μl，以進樣量（ng）為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，計算出線性方程Y=1.1804×10X+1.2421，r=1.0000。結果表明5-HMF對照品進樣量在0.0677～270.8ng范圍內，進樣量與峰面積呈良好的線性關系。

2.4 精密度試驗 取同一份血栓通注射液供試品按上述色譜條件，連續測定5次。記錄5-HMF峰面積，RSD為1.7%，表明本法的精密度良好。

2.5 重復性試驗 取同一批血栓通注射液供試品溶液按上述方法平行測定6份，計算5-HMF含量， RSD為2.9%，結果表明，本法的重現性較好。

2.6 穩定性試驗 取同一份血栓通注射液供試品溶液按上述色譜條件，每隔一定時間測定一次，共考察13小時，計算5-HMF峰面積，RSD為1.4%。結果表明，供試品溶液至少在13小時內穩定。

2.7 回收率試驗 精密量取已知含量的血栓通注射液1ml共6份，置2ml量瓶中，分別精密加入2.3項下2號曲線對照品溶液0.1ml，加水至刻度，測定，計算加樣回收率，結果5-HMF平均回收率為103.07%，RSD為2.8%。

2.8 樣品含量測定 按擬訂的含量測定方法，測定了34批市售血栓通注射液樣品，5-HMF的含量在0.009μg/ml～1.375μg/ml之間。

3 討論

根據藥典會公示品種冠心寧注射液每日允許5-HMF的注射量為4～8mg及本品靜脈滴注1次用量2～5ml、一日1～2次進行折算，擬定血栓通注射液中5-HMF的含量限度為：每1ml所含5-HMF不得大于0.80mg。因此，按以上限度進行判斷，所測定的34批樣品中5-HMF的含量均遠低于此限度，說明血栓通注射液樣品的安全性有保障。

參考文獻

[1] Zhang XM，Chan CC，Stamp D，et a1.Initiation and promotion of colonic aberrant crypt foci in rats by 5-hydroxymethyl-2-furaldehyde in thermolyzed sucrose[J].Carcinogenesis，1993，14（4）：773-775.

[2]Surh YJ，Tannenbaum SR.Activation of the Maillard reaction product 5-（hydroxymethyl）furfural to strong mutagens via allylic sulfonation and chlorination[J].Chem Res Toxicol，1994，7（3）：313-318.

【摘 要】 目的：建立高效液相色譜法測定血栓通注射液中5-羥甲基糠醛的含量。方法：色譜柱為CAPCELLPAK C18柱（4.6mm×250mm，5μm），流動相為甲醇-0.1%磷酸溶液（10∶90）；流速為0.8ml/min，柱溫25℃，檢測波長284nm。結果：5-羥甲基糠醛進樣量在0.0677～270.8ng內呈良好的線性關系（r=1.0000），平均回收率為103.07%，RSD為2.8%。結論：本方法簡便、靈敏、準確可靠，專屬性強。

【關鍵詞】 血栓通注射液；5-羥甲基糠醛；高效液相色譜法

【中圖分類號】R284.1 【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2014）06-0031-02

血栓通注射液中主要成分為三七的塊根提取物，三七藥材中含有的部分皂苷類成分都是苷元與葡萄糖結合，在提取、純化過程中有可能發生水解，產生部分葡萄糖。5-羥甲基糠醛（5-HMF）是葡萄糖等單糖化合物在高溫或弱酸等條件下脫水產生的一個醛類化合物，有報道稱該化合物有可能引發并促進結腸小囊異常生長[1]及具有一定程度的基因毒性[2]。因此，醫藥、食品等工業中往往對其產品進行5-HMF含量的控制。本文采用高效液相色譜法對血栓通注射液中的5-HMF進行測定，為該制劑的安全性評價提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agjlent 1100高效液相色譜儀；色譜柱為CAPCELLPAK C18（4.6×250mm 5μm）。

1.2 藥品與試劑 5-羥甲基糠醛（5-HMF）對照品（中國藥品生物制品鑒定所，批號：111626-200301）；血栓通注射液為隨機抽取國內各生產企業的樣品。甲醇為色譜純，水為二次重蒸水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱為CAPCELLPAK C18（4.6×250mm 5μm）；以甲醇-0.1%磷酸溶液（10：90）為流動相；流速：0.8ml/min，柱溫：25℃，檢測波長為284nm。

2.2 溶液的配制 對照品溶液的配制：取5-HMF對照品適量，精密稱定，加水制成每1ml含1μg的溶液，即得。供試品溶液直接取樣品進樣。

2.3 標準曲線的制備 取5-HMF對照品7 mg，精密稱定，置10ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml置25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。精密量取上述貯備液0.5、1.0、1.0、10ml分別置50、20、5、10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，得曲線2、3、4、5，再精密量取曲線2溶液0.5ml置20ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，得曲線1。將上述對照品溶液按上述色譜條件分別進樣10μl，以進樣量（ng）為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，計算出線性方程Y=1.1804×10X+1.2421，r=1.0000。結果表明5-HMF對照品進樣量在0.0677～270.8ng范圍內，進樣量與峰面積呈良好的線性關系。

2.4 精密度試驗 取同一份血栓通注射液供試品按上述色譜條件，連續測定5次。記錄5-HMF峰面積，RSD為1.7%，表明本法的精密度良好。

2.5 重復性試驗 取同一批血栓通注射液供試品溶液按上述方法平行測定6份，計算5-HMF含量， RSD為2.9%，結果表明，本法的重現性較好。

2.6 穩定性試驗 取同一份血栓通注射液供試品溶液按上述色譜條件，每隔一定時間測定一次，共考察13小時，計算5-HMF峰面積，RSD為1.4%。結果表明，供試品溶液至少在13小時內穩定。

2.7 回收率試驗 精密量取已知含量的血栓通注射液1ml共6份，置2ml量瓶中，分別精密加入2.3項下2號曲線對照品溶液0.1ml，加水至刻度，測定，計算加樣回收率，結果5-HMF平均回收率為103.07%，RSD為2.8%。

2.8 樣品含量測定 按擬訂的含量測定方法，測定了34批市售血栓通注射液樣品，5-HMF的含量在0.009μg/ml～1.375μg/ml之間。

3 討論

根據藥典會公示品種冠心寧注射液每日允許5-HMF的注射量為4～8mg及本品靜脈滴注1次用量2～5ml、一日1～2次進行折算，擬定血栓通注射液中5-HMF的含量限度為：每1ml所含5-HMF不得大于0.80mg。因此，按以上限度進行判斷，所測定的34批樣品中5-HMF的含量均遠低于此限度，說明血栓通注射液樣品的安全性有保障。

參考文獻

[1] Zhang XM，Chan CC，Stamp D，et a1.Initiation and promotion of colonic aberrant crypt foci in rats by 5-hydroxymethyl-2-furaldehyde in thermolyzed sucrose[J].Carcinogenesis，1993，14（4）：773-775.

[2]Surh YJ，Tannenbaum SR.Activation of the Maillard reaction product 5-（hydroxymethyl）furfural to strong mutagens via allylic sulfonation and chlorination[J].Chem Res Toxicol，1994，7（3）：313-318.