沙棘果實(shí)化學(xué)成分的分離與鑒定

【摘 要】目的：探討沙棘果實(shí)中的化學(xué)成分.方法：使用HPLC柱色譜分析和Sephadex LH20、硅膠柱等方法對(duì)沙棘果實(shí)提取物進(jìn)行分離純化，通過(guò)核磁共振氫譜、碳譜和物質(zhì)的理化性質(zhì)等數(shù)據(jù)來(lái)確定所分離化合物的結(jié)構(gòu).結(jié)果：實(shí)驗(yàn)共得到β谷甾醇、β豆甾醇、5羥基糠醛、胡蘿卜苷、4羥基苯甲酸、齊墩果酸、2羥基丁二酸4甲酯、3，4二羥基苯甲酸和γN（2呋喃基甲基）丁胺酸等9種化合物.結(jié)論：將沙棘萃取物進(jìn)行化學(xué)和波譜法分離鑒定可有效分離鑒定沙棘有效成分.

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

文章編號(hào)：20956894（2015）0412302

收稿日期：20150115；

接受日期：20150130

作者簡(jiǎn)介：郭 震.Email：guozhen141＠sina.com

0　引言

沙棘（Hippophae rhamnoides Linn.）屬于薔薇目胡頹子科沙棘屬植物，由于其耐寒、耐酷熱、耐風(fēng)沙及干旱的氣候，在我國(guó)西北部地區(qū)大面積生長(zhǎng) ［1］.在中醫(yī)中講沙棘性溫，味酸澀，主要有消食化滯、祛痰止咳、活血化瘀等功能，此外還能降低膽固醇、治愈心絞痛、防治冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病等作用，因此具有很高的藥用價(jià)值，被正式收入《中華人民共和國(guó)藥典》 ［2］.有研究 ［3］報(bào)道，沙棘中主要的成分有萜類(lèi)、黃酮類(lèi)和皂苷類(lèi)，本研究將沙棘果實(shí)的萃取物進(jìn)行分離，通過(guò)理化性質(zhì)和廣譜數(shù)據(jù)分析進(jìn)行鑒定，得到了一定的結(jié)果，現(xiàn)報(bào)道如下.

1　材料和方法

1.1 一般材料 選擇我國(guó)西北地區(qū)生產(chǎn)的中國(guó)沙棘（H.rhamnoides subsp.sinensis）的果實(shí)作為研究材料.

1.2 試驗(yàn)儀器 MPS3顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀；ARX300核磁共振儀；薄層色譜硅膠GF254；柱色譜硅膠；葡聚糖凝膠Sephadex LH20等.

1.3 試驗(yàn)試劑 甲醇、乙醇、硫酸、石油醚、乙酸乙酯、氯仿、正丁醇等.

1.4 方法 使用95%體積分?jǐn)?shù)的乙醇將新鮮的中國(guó)沙棘果實(shí)5 kg進(jìn)行3次提取回流，每次2 h，得到乙醇回收浸膏215 g.將上述得到的浸膏懸浮于水中，分別使用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇等有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取，依次得到85 g、15 g、30 g、46 g的回收浸膏.使用石油醚丙酮在硅膠柱中對(duì)石油醚層萃取物進(jìn)行洗脫，反復(fù)純化后經(jīng)HPLC分離得到化合物A和化合物B.氯仿層萃取物反復(fù)純化后得到化合物C、D；乙酸乙酯層萃取物使用氯仿甲醇梯度洗脫后經(jīng)硅膠柱反復(fù)純化，再經(jīng)葡聚糖凝膠Sephadex LH20純化得到化合物1和5，正丁醇層萃取物分離使用氯仿甲醇梯度洗脫后經(jīng)硅膠柱反復(fù)純化，使用葡聚糖凝膠Sephadex LH20純化后得到化合物2、H，經(jīng)HPLC分離得到化合物I和A.

2　結(jié)果

化合物A：其在石油醚中呈白色針晶，在體積分?jǐn)?shù)為10%的硫酸乙醇溶液中呈紫色，LiebermannBurchard反應(yīng)呈陽(yáng)性，和已知的標(biāo)準(zhǔn)品β谷甾醇的理化性質(zhì)完全一致.

化合物B：在氯仿甲醇洗滌液中呈白色針晶，在體積分?jǐn)?shù)為10%的硫酸乙醇溶液中呈紫色，LiebermannBurchard反應(yīng)呈陽(yáng)性，和已知的標(biāo)準(zhǔn)品β豆甾醇的理化性質(zhì)完全一致.

化合物C：其甲醇溶液為無(wú)色油狀物，在體積分?jǐn)?shù)為10%的硫酸乙醇溶液中為墨綠色，其理化性質(zhì)和波普數(shù)據(jù)與報(bào)道的一致，初步鑒定為5羥基糠醛 ［4 ］.

化合物D：在甲醇氯仿溶液中為白色顆粒狀結(jié)晶，在體積分?jǐn)?shù)為10%的硫酸乙醇溶液中呈紫色，LiebermannBurchard反應(yīng)呈陽(yáng)性，和已知的標(biāo)準(zhǔn)品胡蘿卜苷的理化性質(zhì)完全一致.

化合物E：甲醇溶液中呈白色針狀結(jié)晶，溴甲酚綠、三氯化鐵鐵氰化鉀反應(yīng)呈陽(yáng)性，是一類(lèi)含有酚羥基的羧酸類(lèi)物質(zhì)，其理化性質(zhì)和波普數(shù)據(jù)與化合物4羥基苯甲酸一致.

化合物F：易溶于氯仿，其熔點(diǎn)為304～306℃，LiebermannBurchard反應(yīng)呈陽(yáng)性，其光譜分析結(jié)果為齊墩果烷性三萜的特征碳信號(hào)，理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)報(bào)道齊墩果酸一致 ［5］.

化合物G：其溴甲酚綠反應(yīng)呈陽(yáng)性說(shuō)明其含有COOH，根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)中存在甲氧基、亞甲基碳信號(hào)等譜學(xué)規(guī)律、碳譜、氫譜等相關(guān)數(shù)據(jù)可推測(cè)其為2羥基丁二酸4甲酯.

化合物H：為白色針晶，熔點(diǎn)198～200℃.溴甲酚綠、三氯化鐵鐵氰化鉀反應(yīng)結(jié)果均為陽(yáng)性，說(shuō)明該物質(zhì)中同時(shí)含有酚羥基的羧酸類(lèi)物質(zhì)，其波譜結(jié)果和理化性質(zhì)與3，4二羥基苯甲酸完全一致.

化合物I：為物色結(jié)晶，其溴甲酚綠反應(yīng)呈陽(yáng)性，光譜分析結(jié)果顯示其含有亞甲基質(zhì)子信號(hào)和芳香質(zhì)子信號(hào)，其理化性質(zhì)和γN（2呋喃基甲基）丁胺酸.

3　討論

沙棘中含有較高的生物活性成分，作為經(jīng)濟(jì)樹(shù)種，其果實(shí)生物活性成分的提取工藝有很多種，其中沙棘黃酮、沙棘果膠、沙棘黃色素等提取的工藝各不相同 ［6］.本研究從沙棘果實(shí)原材料中分離得到九種化合物，通過(guò)化學(xué)、譜學(xué)方法對(duì)這九種化合物進(jìn)行鑒定，有黃酮類(lèi)化合物、芬酸類(lèi)化合物、甾醇類(lèi)化合物、脂類(lèi)化合物等，分別為β谷甾醇、β豆甾醇、5羥基糠醛、胡蘿卜苷、4羥基苯甲酸、齊墩果酸、2羥基丁二酸4甲酯、3，4二羥基苯甲酸和γN（2呋喃基甲基）丁胺酸.

綜上所述，使用硅膠柱、色譜方法等可有效分離鑒定沙棘中的有效成分.