狂犬咬傷者接種狂犬病疫苗的效果觀察

鐘海關

狂犬咬傷者接種狂犬病疫苗的效果觀察

鐘海關

目的 分析狂犬咬傷者接種狂犬病疫苗臨床療效。方法 被狂犬咬傷24例患者, 采集14份暴露動物腦組織標本, 采取犬腦分子生物學檢測、人抗體滴度檢測、犬腦病原學檢測。結果 采取5針免疫法效果較好, 所有病例均治愈。結論 狂犬病暴露后, 傷口要及時規范處理, 并接種狂犬病疫苗,如果有需要可以注射免疫球蛋白, 同時免疫接種也是預防患者死亡的主要措施。

狂犬咬傷；狂犬疫苗；效果觀察

狂犬病病原體主要為狂犬病毒, 屬于人畜共患傳染病,實驗觀察顯示只有哺乳動物感染［1,2］。通常是因狂犬咬傷感染, 具有較高病死率, 是造成死亡人數最多傳染病。在被動物抓傷、咬傷以后, 接種狂犬疫苗是較為有效預防方法。本文主要分析狂犬咬傷者接種狂犬病疫苗臨床療效, 具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 疫苗接種對象：選取2012年9月～2014年 9月被狂犬咬傷24例患者, 暴露于狂犬病病毒陽性, 其中女11例, 男13例, 年齡16～80歲, 平均年齡(39.23±9.23)歲；二級暴露17例, 三級暴露7例。根據2009年版《狂犬病暴露預防處置工作規范》規范處理傷口, 接種狂犬疫苗采取5針法, 對晚接種者、暴露部位與中樞神經接近、三級暴露患者,在0 d接種2劑疫苗, 病情嚴重患者, 在傷口周圍, 人源免疫球蛋白浸潤注射。

狂犬標本采集：采集14份暴露動物腦組織標本, P2實驗室生物安全柜, 采取枕骨大孔快速采樣法, 取宿主動物小腦、中腦、大腦、海馬回組織, -80℃保存。

1.2 方法

1.2.1 傷口處理 使用流動清水與20%肥皂水對咬傷部位進行徹底清洗, 然后使用生理鹽水與雙氧水交替清洗, 最后使用無菌脫脂棉吸盡傷口的殘留液, 沖洗時間為15 min。使用0.05%的等滲碘伏溶液與適合傷口無菌棉球, 對傷口內進行徹底的消毒, 消毒時間為10～15 min, 采用0.5%碘伏對傷口外皮膚進行消毒, 然后適當的包扎傷后, 但是并不采取加壓包扎。所有患者均在第0、3、7、14、28天在三角肌部位注射1劑狂犬病疫苗；對于Ⅲ級患者, 在傷后處理過程中采取被動免疫制劑治療, 狂犬病患者一般免疫球蛋白為20 IU/kg,傷口需采取局部浸潤, 同側股四頭肌需行肌內注射。

1.2.2 犬腦分子生物學檢測 取病原學檢測為陽性的腦組織樣本細胞總RNA, 將RNA作為模板, 行反轉錄使用隨機引物pd(N)6(TaKaRa), 巢式PCR擴增NP特異性目的基因片段,其擴增片段大小256 bp, 使用1%瓊脂糖凝膠電泳對擴張結果進行鑒定。

1.2.3 人抗體滴度檢測 暴露者在接種疫苗最后一針5 d以后, 采集被接種者3 ml靜脈血, 在自然凝固以后, 行高速離心, 提取上層血清, -80℃儲存, 用于備檢, 在進行測定以前, 30 min 56℃水浴滅活, 在取出以后, 30 min室溫平衡；接種者血清狂犬病病毒抗體滴度采取快速熒光灶抑制試驗(RFFIT)檢測, 對狂犬病疫苗免疫效果進行評價。

1.2.4 犬腦病原學檢測 不同位置腦組織剖面, 在浸泡30 min純酒精載玻片均勻涂印, 晾干以后, 應用4℃預冷丙酮室溫進行10 min固定, 在固定完成組織印片滴加使用1∶50熒光標記抗狂犬病病毒核蛋白單克隆抗體, 結果觀察采用熒光顯微鏡。

2 結果

2.1 DFA檢測分析 通過熒光顯微鏡觀察14份暴露動物腦組織標本, 可以發現大量蘋果綠色熒光顆粒, 呈現為不同的大小以及形狀, 有著強烈熒光的大橢圓形或者是圓形即為內基氏小體, 也就是狂犬病毒抗原陽性。

2.2 RT-PCR檢測分析 電泳鑒定14份暴露動物腦組織標本RT-PCR擴增產物以后, 預期目的基因產物片段均擴增出,即為狂犬病毒核酸陽性。

2.3 RFFIT檢測分析 0.5 IU/ml為中和抗體滴度臨界值,血清≥0.5 IU/ml, 即為陽轉血清。本組24例患者, 在采取RFFIT檢測以后, 血清中和抗體滴度為14～42 IU/ml, 平均為25 IU/ml, 均能產生一定量中和抗體, 其維持水平較高。采取5針免疫法效果較好, 所有病例均治愈。

3 討論

狂犬病主要是由狂犬病病毒所造成的中樞神經系統傳染疾病, 在病毒入侵部位, 局部組織會發生短暫有限增殖, 然后轉為末梢神經細胞增殖, 沿著神經細胞通道, 并以3 mm/h速度傳播至中樞神經, 最后在大腦定位, 于腦組織中發生大量增殖。在神經細胞遭到病毒入侵以后, 通過細胞間傳播方式進入中樞神經, 屬于不可逆轉過程。對于狂犬咬傷者, 首先應該采取傷口處理, 同時行狂犬病疫苗接種, 并且注射免疫球蛋白。對于狂犬咬傷預防控制需要注意下列幾點內容：對傷口進行徹底外科清創, 這能使局部病毒存留得到有效減少, 避免病毒入侵；應用免疫球蛋白或者是狂犬病免疫血清行肌內注射與局部浸潤, 能使傷口內殘留病毒得到快速中和；狂犬病疫苗的正確接種, 能使機體細胞免疫機制得以激活,形成一定的中和抗體。

最近幾年以來, 通過對狂犬病防治的宣傳教育, 人們預防意識明顯提升, 但仍有部分群眾對于狂犬病的預防意識較差, 再加上暴露后并未有效預防、傷口處理不正規、未及時接種狂犬病疫苗, 造成患者死亡。所以, 在暴露后, 有效免疫接種有著重要的作用。目前, 關于狂犬病主要控制措施為暴露后免疫, 但是其免疫效果并未得到及時確認, 這就難以及時加強免疫進行相應保護。預防免疫失敗所引發狂犬病重要手段為狂犬病毒中和抗體水平檢測并免疫補種。本組24例患者傷口規范處理后, 采取5針接種法進行疫苗接種, 其中傷口周邊狂犬免疫球蛋白侵潤注射4例, 免疫球蛋白未接種者20例, 研究結果顯示, 血清抗體水平>0.5 IU/ml, 免疫效果較好, 疫苗免疫原性良好, 免疫期具有一定保護作用。從監測結果可以看出, 通常疫苗接種陽轉率可以達到100%, 并沒有免疫補種情況［3-5］。本組研究病例為2012年9月～2014年9月被狂犬咬傷24例患者, 暴露于狂犬病病毒陽性, 不及貓、犬等動物抓傷、咬傷, 以及狂犬病疫苗全程接種患者,所以, 并不將狂犬病疫苗免疫保護作用評價列入到統計學的評價內。引發狂犬病危險因素主要為主動攻擊人類以及行為異常犬, 所以要對犬只加強規范管理, 并此對狂犬病暴露后的有關預防知識進行宣傳教育, 使人們對于狂犬病預防意識得到提高。狂犬病暴露后, 傷口要及時規范處理, 并接種狂犬病疫苗, 如果有需要可以注射免疫球蛋白, 同時免疫接種也是預防患者死亡的主要措施。

［1］ 張麗文, 王海紅, 苑新海.一犬咬傷15人接種狂犬病疫苗的效果觀察.中國生物制品學雜志, 2011, 12(4):156-159.

［2］ 黃海鋒, 陳偉玲.接種人用狂犬疫苗后抗體檢測結果分析.吉林醫學, 2012, 33(20):134-137.

［3］ 段會恩.5200例狂犬疫苗接種者免疫效果觀察.中華疾病控制雜志, 2010, 7(10):167-169.

［4］ 欒淑玉, 倪坤, 李莉.接種狂犬疫苗引起嚴重過敏反應1例報告.吉林醫學, 2013, 34(31):156-158.

［5］ 向遠.559例人用純化狂犬疫苗(Vero細胞)免疫效果分析.中國中醫藥現代遠程教育, 2010, 10(17):144-149.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.12.178

2015-03-30］

516880 龍門縣龍潭鎮中心衛生院