亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯對人腎小管上皮HK-2細胞的毒性作用

摘要:目的　探討亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯(ASB)對人腎小管上皮細胞HK-2的細胞毒性作用。方法HK-2細胞在DMEM/F12培養液培養24 h后，在經ASB作用2 h前，分別加入N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)10 mmol·L －1、2-氨基-4(丁基磺酸亞氨)-丁酸(BSO)2 mmol·L －1及30 min前分別加入過氧化氫酶(CAT)1000 U·L －1、環孢素A(CsA)50 μmol·L －1，再經ASB作用24 h，MTT法檢測細胞存活率;用酶標儀檢測乳酸脫氫酶(LDH)和丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、還原型谷胱甘肽(GSH)、總ATP酶(T-ATP)活性;流式細胞儀檢測細胞周期、細胞凋亡、線粒體膜電位(MMP)和活性氧(ROS); Western蛋白質印跡法檢測胱天蛋白酶酶原3、Bcl-2、Bax和細胞色素c(Cyt c)蛋白的表達。結果　ASB呈濃度依賴性地抑制HK-2細胞增殖，作用24和48 h后IC 50值分別為19．1±3．6和(11．6±3．9)g·L －1。ASB 20 g·L －1處理HK-2細胞24 h后，G 2/M期細胞由對照組的(23．3±1．0)%增至(37．0±0．8)%(P＜0．01)。與正常對照組相比，ASB 組LDH漏出率和ROS水平明顯增加，MMP呈下降趨勢;與ASB 20 g·L －1組相比，加入還原劑NAC后，細胞存活率和MMP水平明顯增加(P＜0．05)，LDH和ROS水平明顯降低(P＜0．05);加入CsA后，細胞存活率顯著降低(P＜0．01)，LDH和細胞內ROS水平明顯增加(P＜0．05)。隨著ASB濃度增加，HK-2細胞上清液中的MDA水平明顯增加，GSH，SOD和T-ATP酶活性逐漸減弱;同時細胞內胱天蛋白酶原3、Bax和Cyt c蛋白表達升高。結論　ASB對HK-2細胞的毒性作用可能是通過干擾HK-2細胞線粒體能量代謝，改變細胞內氧化還原狀態，耗竭細胞內GSH和SOD，導致細胞內ROS大量堆積，引發脂質過氧化作用，破壞細胞膜的通透性，導致Cyt c等凋亡因子從線粒體釋放，進而引發細胞凋亡或壞死。

基金項目:國家自然科學基金(81001254);國家科技重大專項(2013ZX09302303);國家科技重大專項(2012ZX09301-003-008)

通訊作者:王全軍，Tel:(010)68215929，E-mail: wangquanjunbeijing@163．com

(收稿日期: 2014-11-18接受日期: 2015-05-20)

(本文編輯:齊春會)