中藥復方對免疫性卵巢早衰的實驗研究進展*

左亞威，王佩娟，盧 燕

(1.南京中醫藥大學，南京 210046;2.江蘇省中西醫結合醫院，南京 210028)

中藥復方對免疫性卵巢早衰的實驗研究進展*

左亞威1，王佩娟2△，盧 燕2

(1.南京中醫藥大學，南京 210046;2.江蘇省中西醫結合醫院，南京 210028)

目前卵巢早衰的確切病因及機制尚不明確，已公認的與其發病密切相關的因素有醫源性因素、自身免疫性因素、代謝障礙、遺傳因素、感染因素、心理應激等。近年來免疫相關因素導致的卵巢早衰臨床較為常見，對該病免疫機制的深入研究是早期干預此病發生發展的關鍵。免疫性卵巢早衰動物模型已較成熟，中醫藥治療免疫性卵巢早衰具有獨特優勢，故擬從中醫藥多靶點、多環節調節免疫的角度，闡述中藥復方治療免疫性卵巢早衰實驗的進展情況。

免疫性卵巢早衰;中藥復方;實驗研究進展;綜述

卵巢早衰(Premature Ovarian Failure，POF)是指女性40歲前由于各種原因出現促性腺激素升高(FSH≥40IU/L)、雌激素水平降低(E2＜73.2 pmol/ L)的一種狀態。據流行病學統計，POF在40歲以前發生率1%，30歲以前發生率1‰［1］。近年來，臨床上POF的發病率呈逐年上升并有年輕化趨勢［2］。有研究稱，具有POF病史的中國女性死亡率明顯比正常人增加［3］。目前POF確切的病因尚不清楚，諸多觀點仍處于研究階段［4］，可能為多因素引起的綜合征［5］，其中免疫相關性POF逐漸引起廣泛關注。近年來動物實驗充分證明，中藥復方制劑可以在細胞免疫、體液免疫等方面有效地影響免疫性POF的發生發展過程，可在一定程度上抑制并改善自身免疫功能紊亂情況，為臨床組方用藥、防治免疫性POF及提高患者生活質量提供重要依據和保障。

1 免疫性卵巢早衰簡述

目前有學者認為，自身免疫功能異常是POF的常見原因。Chattopadhyay等認為，約18% ～92%的POF患者存在自身免疫紊亂的現象［6］。大量研究表明，免疫性卵巢早衰患者會出現細胞免疫和體液免疫等異常，有的可能合并2種或2種以上自身免疫性疾病［7］，最常見的為橋本甲狀腺炎、腎上腺功能低下(Addison病)、系統性紅斑狼瘡、類風濕關節炎、特發性血小板減少性紫癜、重癥肌無力等，故POF常被認為是自身免疫性多腺體綜合征的一部分［5］。自身免疫性POF卵巢病理表現為大量淋巴細胞浸潤［8］，包括T淋巴細胞、B淋巴細胞和漿細胞等［9］。謝江燕等［10］認為，CD4+CD25+Treg細胞數量減少對CD4+T、CD8+T細胞的調控減弱導致卵巢免疫反應過度，從而形成自身免疫性卵巢炎，這可能是POF的發病機制。東亞君等［11］研究發現，Treg可能并不是導致自身免疫性卵巢疾病發生的本質機制，只是參與其發生發展過程，初期 CD4+CD25+Treg快速升高可能對疾病的發生發展起到了潛在保護作用。據統計，有45%的POF患者表現為1種或多種自身抗體陽性［12］，已檢測出的自身抗體有抗卵巢抗體(AOA)、抗卵漿抗體、透明帶(ZP)抗體、抗顆粒細胞膜抗體、類固醇細胞抗體(SCA)和腎上腺皮質抗體(ACA)等。宋玉霞［13］發現，POF患者血清AOA水平較正常健康育齡婦女明顯升高。

2 中醫學對免疫性POF認識

根據發病特點和臨床癥狀，當代學者大都將免疫性POF歸屬于“月經過少”、“血枯”、“血隔”、“經閉”、“不孕”、“斷經前后諸證”等范疇。《傅青主女科·調經》云:“年未至七七而經水先斷者……是心肝脾之氣郁乎……治法必須散心肝脾之郁，而大補其腎水，仍大補其心肝脾之氣，則精溢而經水自通矣。”柴松巖［14］認為，腎陰不足、血海空虛為此病的根本病因病機。夏桂成［15］認為，本病主要因腎虛所致，臨證以腎虛偏陰、癸水不足為主且較為多見。尤昭玲［16］亦認為，腎虛是卵巢早衰的主要病機，心、肝、脾之功能是重要的影響因素，瘀是重要的病理環節。

綜合目前各醫家對該病的認識，免疫性POF就是未至絕經年齡而出現腎精虧耗過早的經斷，發病機制主要為腎的陰陽虧虛兼及肝脾兩臟失調，變化在氣血但與天癸、沖任、胞宮有關。在臨床上以免疫因素為主導的POF往往以腎陰虛證為主，同時兼夾肝氣郁結，故在治療中常佐以疏肝理氣、滋陰降火之法。

3 中醫復方實驗研究

3.1 滋陰補腎復方

朱玲［17］、李紅梅等［18］研究認為，自身免疫性POF小鼠Bax蛋白表達增加，GDF-9蛋白及Bcl-2蛋白表達減弱，提示卵巢透明帶抗原所致的卵巢自身免疫性損害，影響了卵巢的自分泌調節機制，促使卵泡過早過快的凋亡，甚至導致卵泡停止發育而誘導POF發生。左歸丸能下調Bax蛋白表達，上調Bcl-2蛋白及GDF-9蛋白表達，抑制卵泡過早過快凋亡，從而促進卵泡的發育。這可能是改善卵巢功能、治療卵巢早衰的機理之一。

3.2 溫陽補腎復方

丁青等［19］實驗研究發現，自身免疫性POF小鼠Th17/Treg表達失衡，導致對卵巢組織的免疫性損傷和卵巢組織破壞，使卵巢功能最終衰竭。而右歸丸能夠對T淋巴細胞亞群關鍵調節因子進行調控，上調Treg細胞或下調Th17細胞水平，使Th17/ Treg達到動態平衡，從而修復卵巢形態，增強卵巢功能，發揮治療POF的作用。

伍娟娟等［20-21］用二仙湯(仙茅、淫羊藿、巴戟天、黃柏、知母、當歸)對免疫性POF小鼠灌胃治療后發現，FoxP3基因表達上調，說明治療有效，證明二仙湯具有改善自身免疫性POF免疫功能的作用，使FoxP3基因表達增強，以此活化 CD4+CD25+Treg，使其具備自然Treg細胞的表型和功能，從而抑制自身反應性細胞增殖，維持穩定的免疫環境，阻止POF發生。從卵巢形態學研究結果來看，二仙湯可以改善自身免疫性 POF免疫功能，有效抑制AzpAb，進而減少卵泡閉鎖，降低卵泡耗竭速度，達到阻止自身免疫性卵巢炎發生的目的。

3.3 補腎活血復方

劉慧萍等［22］以補腎活血方(補骨脂、紫石英、菟絲子、生熟地、桑寄生、覆盆子、山萸肉、土鱉蟲、水蛭等)對照西藥倍美力組進行研究，結果表明補腎活血方可通過調節小鼠凋亡調控基因(bcl-2/Bax)的表達，使血清AzpAb表達明顯下降，由此調節免疫反應，抑制抗體集聚，阻止卵泡過度凋亡，減少淋巴細胞、漿細胞浸潤，使有生機卵泡增加，達到抑制自身免疫性損傷、保護并改善卵巢功能的目的。

李芳等［23］探討補腎活血中藥(熟地、山萸肉、當歸、白芍、淫羊藿、丹參)對免疫性POF小鼠的治療作用，發現中藥組明顯升高小鼠血清E2濃度，增加初級卵泡和次級卵泡的數量(P＜0.05)，并顯著下調小鼠血清抗pZP4抗體滴度(P＜0.05)，提示補腎活血中藥能改善卵巢的生殖內分泌功能和卵巢內各期卵泡和黃體的發育狀況，且在一定程度有抑制自身免疫早衰作用。

梁欣祖等［24］用育泡飲(紅花、淫羊蕾、菟絲子、枸杞子)研究自身免疫性POF小鼠顆粒細胞凋亡及Bax與Bcl-2表達的影響，并以強的松為陽性對照，結果發現各劑量組小鼠卵巢顆粒細胞凋亡數目減少，Bax表達顯著減輕，Bcl-2蛋白表達則增強，提示育泡飲能直接或間接抑制自身免疫性POF小鼠卵巢顆粒細胞凋亡，進而減少卵泡閉鎖程度，調節卵巢功能。

3.4 健脾補腎復方

陳麗霞等［25］以腳掌和腹部多點注射卵巢抗原加CFA混合乳化液成功復制自身免疫性POF小鼠動物模型，給予灌服補腎健脾方藥(菟絲子、黨參、枸杞子、淮山、仙靈脾、女貞子、杜仲)，結果發現中藥治療組卵巢組織INHB mRNA相對表達量顯著升高(P＜0.05)，表明補腎健脾法中藥復方治療自身免疫性POF作用與其能增強卵巢組織INHB mRNA表達、升高INHB含量、改善卵巢儲備功能有關。

3.5 補腎調肝復方

朱萱萱等［26］以烏鱉顆粒(制何首烏、白術、續斷、枸杞子、茯苓、炙鱉甲、黃狗腎)研究對免疫性POF小鼠CD4+/CD8+及Fas、FasL蛋白表達的影響。實驗結果表明，在使用烏鱉顆粒治療后，卵巢早衰小鼠CD4+/CD8+趨于平衡，AZpAb水平增高得到抑制，對POF小鼠免疫功能有一定改善作用。且治療后，小鼠Fas/FasL系統達到平衡，卵巢功能得到改善，從而達到治療免疫性卵巢早衰的目的。

蔡品均等［27］以補腎調肝中藥(山茱萸、烏藥等)給予自身免疫性POF小鼠灌胃4周后，FSH、LH與模型組比較差異有統計學意義，且中藥長期服用不良反應較西藥明顯減少，提示補腎調肝中藥方劑對自身免疫性POF小鼠有一定的治療作用，其治療機制主要是通過糾正生殖內分泌軸的紊亂，恢復卵巢的部分功能，改善臨床癥狀，進一步防治免疫性POF實現的。

3.6 其他復方

陳麗等［28］用護卵湯加減(生熟地、補骨脂、紫石英、桑寄生、覆盆子、菟絲子、山茱萸、澤瀉、澤蘭、桔梗、土鱉蟲、水蛭、雞內金、路路通、烏藥、甘草)觀察免疫性POF小鼠模型血清AzpAb表達的影響，結果提示中藥組顯著下調AzpAb的表達，對免疫性POF小鼠模型的免疫功能具有一定的調節作用。

李柳葉等［29］研究補腎疏肝安神方(生地黃、熟地黃、山萸肉、墨旱蓮、女貞子、牛膝、丹參、赤白芍、牡丹皮、澤瀉、柴胡、桂枝、百合、龍牡、鱉甲)發現，該方可以顯著提高大鼠胸腺系數(P＜0.05)，在改善模型大鼠內分泌、免疫功能方面均具有明顯優勢。

董莉等［30］發現，活血方(少腹逐瘀顆粒)及疏肝方(柴胡疏肝丸)能夠顯著降低自身免疫性POF模型小鼠血清AOAb及aZP陽性率，表明活血方及疏肝方的作用靶點不是通過下丘腦-垂體-卵巢軸改善卵巢功能，可能是通過體液免疫調節來改善小鼠卵巢功能。

4 討論與展望

迄今為止，POF治療仍以雌孕激素替代和輔助生育技術為主。對于免疫因素引起的POF，亦有嘗試采用免疫抑制劑治療，但尚未形成共識，也缺乏循證醫學依據。無論激素替代還是免疫抑制劑治療，均無法對本病進行早期干預，且部分患者對上述藥物的使用可能存在安全性問題。通過建立免疫性POF動物模型進行實驗，可知中藥復方能在細胞免疫、體液免疫甚至基因表達上有效地影響POF的發生發展過程，從而改善女性生殖內分泌軸狀態，減少卵巢的免疫損害，恢復卵巢部分功能。同時，更多的臨床研究證明，采用中醫復方藥物預防及治療POF具有明顯療效。

目前，免疫性POF的實驗研究已經深入到分子甚至基因水平，且中醫對本病的病因病機、辨證分型、臨床治療、藥物作用機制等方面的認識亦在不斷深入。因此，中醫藥可以借鑒現代先進的科學技術，在辨證論治的基礎上，研究中藥復方中有效成分如何通過分子免疫學機制達到對免疫性POF的治療作用，以期在此病的預防、控制及治療等方面給予臨床醫務工作者重要的參考信息。雖然卵巢早衰具有病因多源性和治療復雜性等特點，但中醫治療方法之豐富性、互補性可以為醫療工作者及病人提供多樣選擇，對拓寬我們臨床實踐的視野很有益處。但在尋求免疫性POF的明確病因和徹底治愈的過程中，仍有許多環節尚待進一步探索和研究。

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R711.76

A

1006-3250(2015)06-0776-03

2015-01-12

國家自然科學基金青年科學基金資助項目(81303136)-從誘導調節性T細胞分化探討補腎活血方治療免疫性卵巢早衰的機制

左亞威(1990-)，男，河南商丘人，醫學碩士，從事婦科內分泌的臨床與治療。

△通訊作者:王佩娟，女，江蘇南京人，主任醫師，教授，從事婦科內分泌疾病、不孕癥的臨床與研究，Tel:025-85637832，E-mail:pjwang@vip.sohu.com。