miR-21在食管癌中預后作用的meta分析

付文博　宋亞芹　楊　蘭　朱建波　魏育濤(石河子大學醫學院，新疆　石河子　83000)

miR-21在食管癌中預后作用的meta分析

付文博宋亞芹楊蘭1朱建波1魏育濤2
(石河子大學醫學院，新疆石河子832000)

〔摘要〕目的應用循證醫學的方法綜合評價miR-21與食管癌(EC)預后的相關性。方法檢索美國國立圖書館(PubMed)，荷蘭醫學文摘(EMBASE)，ISI Web of Science數據庫中miR-21與EC預后的文獻，按照已擬定的納入和排除標準篩選符合要求的研究。提取miR-21與EC預后相關的相應數據，并對提取的數據進行統計學描述。采用風險比(HR)、95％可信區間(CI)及P值定量評價miR-21與EC預后的相關性。結果初步檢索數據庫得到273篇文獻，其中其中7項可用于meta分析，中位樣本量為98例，四分位數間距(IQR) = 70～164。中位HR值1.4，IQR = 0.89～2.23。中位隨訪時間30個月，IQR= 29.4～39個月。高表達miR-21的EC患者的預后生存率HR= 1.367，95％CI= 1.15～1.62，P = 0.000;食管鱗癌(ESCC)亞組生存率HR=1.44，95％CI=1.2～1.72，P=0.000。高表達miR-21的食管腺癌(AD)患者亞組預后生存率HR=0.82，95％CI=0.47～1.44，P=0.489，無統計學意義。結論miR-21作為EC患者的預后標記具有地域性和組織特異性。miR-21對于ESCC高發的中國和日本具有預測不良預后的潛力，有望成為新型的EC生物學標志物，但對AD高發的加拿大和美國則不具有相應的預測能力。

〔關鍵詞〕食管癌; miR-21;生物標記物

1石河子大學醫學院病理科

2石河子大學醫學院第二附屬醫院(新疆生產建設兵團醫院)

第一作者:付文博(1986-)，男，主治醫師，主要從事miRNA相關分子機制及臨床研究。

Prognostic role of miR-21 in esophageal cancer: a meta-analysis

FU Wen-Bo，SONG Ya-Qin，YANG Lan，et al.
Medical College，Shihezi University，Shihezi 832000，Xinjiang，China

【Abstract】Objective To synthetically evaluate the correlation between miR-21 and the prognosis of esophageal cancer．Methods With proposed inclusion and exclusion criteria，the electronic databases PubMed，EMBASE and ISI Web of Science for original articles analysing the prognostic value of miR-21 in esophageal cancer were enrolled．Relevant data were extracted from studies investigating the relationship between miR-21 expression and survival in esophageal cancer patients．Descriptive characteristics for relevant data were described by the median value and interquartile range．Pooled hazard ratios(HRs)，95％CI and P value were used to evaluate the correlation between miR-21 expression and survival in esophageal cancer．Results 273 studies for miR-21 and esophageal cancer prognosis were identified from primary article search in Pubmed，Embase and Web of Science．Totally 7 articles were considered eligible for meta-analysis according to the inclusion and exclusion criteria．The median sample size was 98 patients〔interquartile range(IQR) = 70～164〕，the median HR was 1．4(IQR=0．89～2．23) and the median follow up was 30 months(IQR=29．4～39 months)．High expression of miR-21 was negatively correlated with survival rate in esophageal cancer patients(HR=1．367〔1．15～1．62〕，P＜0．001)．The pooled HR in adenocarcinoma patients with high expression of miR-21 was statistical insignificant(HR=0．82〔0．47～1．44〕，P= 0．489)．Conclusions miR-21 as a prognostic marker in esophageal carcinoma patients has regional and tissue specificity．MiR-21 has the potential to predict poor prognosis with high incidence of ESCC in China and Japan，and is expected to become a new biomarker for esophageal cancer rather than high incidence of adenocarcinoma in Canada and American．

【Key words】Esophageal cancer; miR-21; Biomarker

食管癌(EC)是最常見的惡性腫瘤之一，主要包括食管鱗癌(ESCC)和食管腺癌(AD)，其中亞洲國家以ESCC為主，歐美國家以AD為主，5年生存率僅為15～39％〔1〕。目前，臨床上鮮有穩定可靠的預后生物標記，明確新型預后標記物對篩選術后復發患者病情分類、個性化治療，甚至開發新型治療靶點、改善患者預后均具有顯著的臨床意義〔2，3〕。MicroRNA(miRNA)廣泛參與人類的病理生理過程〔4〕。miR-21作為眾多miRNA的一員，在AD和ESCC中表達水平均升高〔5〕。目前已發現miR-21通過靶向磷酸酶和同源張力蛋白(PTEN)、腫瘤抑制基因原肌球蛋白1(TPM1)，程序性細胞死亡基因4(PDCD4)、Sprouty2等腫瘤抑制基因的3非翻譯端，抑制或降解靶基因，參與EC的發生發展及預后〔6～8〕，有望成為新預后標記物。本文通過薈萃分析評估miR-21在EC預后中的整體風險，分析miR-21作為EC預后標志物的可行性。

1　資料和方法

1.1文獻檢索檢索PubMed，EMBASE，ISI Web of Science中miR-21與EC預后的文獻。通過以下關鍵詞或主題詞的匹配檢索: miR-21，microRNA-21，esophageal/esophagus，adenocarcinoma/squamous，cancer，neoplasm，carcinoma，tumor，prognos*，surviv*，截止日期為2014年1月。同時對獲取文獻和綜述的參考文獻及相關文獻進一步檢索以獲取可能缺失的研究文獻。

1.2納入及排除標準

1.2.1入選標準(1)文獻包含預后數據即風險比(HR)和95％可信區間(CI) ; (2)研究納入的病例數超過50例; (3)同一研究機構發表的多篇相似文獻，保留研究對象最多的文獻; (4)發表的文獻語言限于英文; (5)研究對象為EC患者，無論何種分期及病理類型; (6)由兩位評審者獨立評估獲得的文獻，若發生意見沖突則引入第三位評審者; (7)對miR-21的表達水平二分類。

1.2.2排除標準(1)綜述、病例報告、信件、會議文章; (2)不同研究作者報道的研究結果明顯出于同一樣本; (3)關于miR-21基因修飾，如多態性或甲基化; (4)無HR，CI或生存曲線等關鍵信息。

1.3數據提取提取的數據資料包括: (1)第一作者及發表日期; (2)研究人群的特點，包括樣本量、樣本來源、分期及組織學類型; (3) miR-21的檢測方法及其表達水平的分界值; (4)隨訪時間; (5) EC相關生存率的HR，95％CI以及相應的P值。

1.4統計學方法采用STATA11.0軟件，分析數據的原則是優先采用校正后的數據，對納入研究的樣本量、隨訪時間、全部研究及有統計學意義的HR采用中位數和四分位數間距(IQR)進行統計學描述。利用合成HR、95％CI及P值綜合定量評價miR-21與預后的相關性。合成分析的異質性檢驗采用I2統計量，如P＜0.05或I2＞50％采用隨機效應模型，反之則采用固定效應模型做合成分析。HR＞1表示預后不良，＜1時則有保護意義。發表偏倚通過Begg’s漏斗圖及Egger’s檢驗進行評估。

2　結果

2.1檢索結果系統檢索得到273篇文獻，按照納入和排除標準最終得到7篇〔2，3，6，9～12〕文獻可用于合成分析。其中研究臨床結局為OS文獻4篇〔3，6，9，12〕，癌癥相關生存率1篇〔2〕和無復發生存率2篇〔10，11〕。所有研究qRT-PCR擴增均有內參基因進行標準化處理。納入文獻中有3篇〔2，6，9〕文獻應用COX回歸模型進行多因素分析校正，消除了可能與預后相關的臨床及病理變量對miR-21作用的混雜效應。

2.2統計結果納入7項研究的統計描述為中位樣本量98例，均數113例，IQR = 70～164;中位隨訪時間30個月，均數34.7個月，IQR= 29.4～39;中位HR為1.4，均數為1.8，IQR = 0.89～2.23。合成結果顯示，高表達miR-21的EC患者的預后生存率HR=1.367〔1.15～1.62〕，P＜0.001。ESCC亞組生存率HR=1.44〔1.2～1.72〕，P＜0.001，中國和日本亞組生存率HR= 1.42〔1.18～1.7〕，P＜0.001降低。高表達miR-21的腺癌患者亞組預后生存率HR= 0.82〔0.47～1.44〕，P= 0.489，美國和加拿大亞組預后生存率(HR=1.04〔0.63～1.72〕，P= 0.88無統計學意義。各研究之間并未發現顯著的異質性，Begg＇s漏斗圖檢驗未發現顯著發表偏倚。

3　討論

miRNAs廣泛存在于組織、唾液、血液、血漿以及二便當中〔13〕，同時可以結合Argonatute-2及高密度脂蛋白或存在于凋亡小體內，抵抗內源性核酸酶，耐受酸堿環境，即使保存數十年的石蠟組織依然保持相當穩定的狀態〔2〕，并可通過如qRT-PCR這樣高通量的方法進行檢測，重復性良好，檢測結果在不同個體之間表達水平能夠保持同質性〔14〕，這些特征使miRNA非常適合作為生物標記物。通過系統檢索文獻發現miR-21是目前EC中表達最為廣泛的miRNA，是普遍認可的致癌性miRNA〔2，6，7，10，12〕。miR-21能夠靶向Toll樣受體，觸發炎癥反應導致腫瘤生長和轉移，促進瘤細胞和微環境之間的互動，影響成纖維細胞表面受體表達〔15〕，參與免疫反應，誘導腫瘤發生〔16〕，滅活PTEN，TPM1，PDCD4，Sprouty2，FASL，TIMP3等多種腫瘤抑制基因〔17〕，與ERK1/2/MAPK之間相互影響并形成信號環路〔18〕。其表達水平可以動態反應EC的病情變化，隨疾病的發展變化而變化，尤其是當出現血道轉移或淋巴結轉移時，術后濃度比術前濃度顯著降低，而復發的患者濃度則顯著升高，對患者的預后產生潛在的影響〔2〕。本文通過系統性分析，表明miR-21升高對ESCC高發的中國和日本具有預測不良預后的潛力，提示可以作為新型標記物，而對AD高發的加拿大和美國則不具有相應的預測能力。不足的是合成HR普遍不高(HR=1.36～1.44) ;然而，若以P= 0.05為檢驗水準，具有統計學意義的5個研究〔2，3，6，10，12〕中位HR為1.95，均數2.61，IQR= 1.4～3.79，這就提示有統計學意義的風險比具有強度適中的統計學效力。當miR-21結合miR-375時預后生存HR更是高達3.79。這可能由于來源于不同研究患者臨床特征(如年齡，腫瘤分期，病理類型，種族或國家)，樣本來源(組織或是體液)，技術平臺(qRT-PCR，ISH)的敏感性和特異性、內參選擇、分界值等多方面的差異。此外，該結論尚存的難題難題包括: (1)癌旁組織miR-21表達升高的患者預后不良，提示miR-21會與腫瘤的微環境發生互動，說明miR-21有可能通過基質影響ESCC〔6〕。Nouraee等〔15〕通過原位雜交更是顯示miR-21的表達信號主要位于基質內，并且基質中的成纖維細胞釋放的miR-21也可能影響結果; (2)納入的5篇〔3，6，9，10，12〕文獻均采用癌組織和癌旁對照，雖然采用的癌旁相對正常組織距離癌組織超過5 cm，但是此時癌癥患者比健康對照組血液當中的miR-21水平已經顯著提高，說明采用癌旁對照具有很大的局限性; (3)微陣列和qRT-PCR采用腫瘤組織中提取的RNA，可能混雜基質成分及正常組織，原位雜交能夠識別細胞水平的陽性信號，能夠避免這一不足，但是敏感性不足。因而，采用激光微切結合qRT-PCR進一步闡明miR-21的病理機制非常值得期待; (4)組合標記物的研究尚需進一步證實。

4　參考文獻

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〔2014-07-11修回〕

(編輯袁左鳴)

通訊作者:魏育濤(1974-)，男，博士，副主任醫師，主要從事食管癌臨床與基礎研究。

基金項目:兵團衛生科技-兵團博士基金(2014BB019) ;國家自然科學基金(81260301，81160018)

〔中圖分類號〕R735.1

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2015) 16-4567-03;

doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2015.16.066