不同的抗原修復(fù)方法在免疫組化染色中的應(yīng)用

【摘要】目的　研究分析免疫組化染色使用不同抗原修復(fù)的使用情況。方法 選取66例我院乳腺癌手術(shù)切除組織來進行分析，采取不處理、電爐煮沸、高壓、胰酶法等抗原修復(fù)方式進行免疫組化染色，探討免疫組化染色在不同方式下的情況。結(jié)果　抗原修復(fù)選擇的方法不同，組織抗原暴露就會有差異性，高壓加熱能夠讓掩蓋以及交聯(lián)變性的抗原暴露和修復(fù)，提升免疫組化結(jié)果的準確度，選擇高壓熱修復(fù)方式獲得陽性結(jié)果比較可靠。結(jié)論 臨床中根據(jù)情況來使用不同的抗原修復(fù)方式能夠?qū)γ庖呓M化結(jié)果進行優(yōu)化，對難以檢測的細胞內(nèi)液和細胞核提供較高的檢出率，結(jié)果可靠性較高。

doi:10.3969/j.issn.1674-9316.2015.14.145

作者單位：163316 黑龍江省大慶市第四醫(yī)院

Application of Different Antigen Retrieval Methods in Immunohistochemical Staining

JU Xueping The Fourth Hospital of Daqing City，Daqing 163316，China

【Abstract】Objective To study immunohistochemical analysis using a different antigen retrieval. Methods A total of 66 cases of breast cancer in our hospital surgical removal of tissue for analysis，take no treatment，electric boiling，pressure，and other aunt enzymatic antigen retrieval mode immunohistochemical staining. Immunohistochemical staining situation in different ways were discussed. Results The repair method selected different antigens，tissue antigen exposure had differences，autoclavable allow conceal and crosslinked denatured antigen exposure and repair，improve accuracy of immunohistochemistry results，the highpressure hot fix more reliable way to get a positive result. Conclusion According to the clinical situation，the use of different antigens repair methods for immunohistochemical results can be optimized，for difficult and nuclear provide higher detection rate in the intracellular fluid and test cell，the results higher reliability.

【Key word】 Antigen retrieval method，Immunohistochemistry，Microwave，Electric boiling，Trypsin method

免疫組織化學(xué)是使用抗體和抗原特異性結(jié)合進行細胞以及組織某些化學(xué)物的鑒定方式，該技術(shù)既包含了免疫學(xué)理論，同時也包含了組織化學(xué)理論 ［1］。免疫組織化學(xué)染色技術(shù)的敏感性強，特異性高，對組織、細胞以及細胞培養(yǎng)爬片都能夠進行蛋白質(zhì)和多肽定位，一般臨床中使用的方式有化學(xué)方式以及物理方式兩種，使用較多的技術(shù)包括了酶消化、微波、高壓鍋煮沸、蒸汽等等。此次我院對三種使用比較多的抗原修復(fù)方法進行了研究，探討其免疫組化染色情況，現(xiàn)根據(jù)研究進行以下報道。

1　材料與方法

1.1　材料

1.1.1　組織材料　根據(jù)我院2013年1月～2014年9月接收的66例乳腺癌外科手術(shù)切除組織來進行探討分析，使用了5種常用的抗體修復(fù)方式進行比較。

1.1.2　試劑　（1）16種抗體、s-p即用型試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司；（2）胰蛋白酶也購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司即胰酶消化試劑盒；（3）抗原修復(fù)緩沖液：檸檬酸鹽緩沖液（0.01 mmol，pH=6.0）edta緩沖液（1 mmol，pH=8.0）按1：50的比例稀釋；（4）丙酮、苯甲酸甲酯、二甲苯、10%福爾馬林液、3%雙氧水甲醇液、PBS（pH=7.2～7.4）液、dab顯色液等。

1.2　方法

1.2.1　電爐加熱抗原修復(fù)法　（1）切片脫蠟至水。（2）0.3% H 2O 2甲醇處理切片10 min。（3）自來水洗，蒸餾水洗。（4）使用電爐和抗原修復(fù)液對切片進行處理，等溫度到達92℃后可以拔掉電源，等溫度低于92℃時將電源插上，保持在這個范圍內(nèi)，持續(xù)進行切片處理10 min。（5）等修復(fù)液的溫度回復(fù)到室溫狀態(tài)后，PBS洗三次，根據(jù)選擇的染色方法來染色。

1.2.2　高壓抗原修復(fù)法　（1）切片脫蠟至水。（2）0.3% H 2O 2甲醇處理切片10 min。（3）自來水洗，蒸餾水洗。（4）置切片于修復(fù)液中，連容器一同置入高壓鍋進行煮沸。等壓力閥噴氣1～4 min。（5）等修復(fù)液溫度回復(fù)到室溫，PBS洗三次，按選擇染色方式染色。

1.2.3　真空負壓抗原修復(fù)法　（1）切片脫蠟至水。（2）0.3% H 2O 2甲醇真空負壓處理5 min。（3）自來水洗，蒸餾水洗。（4）0.01 M檸檬酸鹽緩沖液（PH6.0），真空負壓干燥箱預(yù)先調(diào)至95℃，真空負壓處理10 min。（5）待修復(fù)液降至室溫后，PBS洗3次，隨后按選好的免疫組化染色方法進行染色。

2　結(jié)果

此次研究中使用的三種抗原修復(fù)方式結(jié)果表明，高壓鍋加熱抗原修復(fù)法處理過的切片組織，使用的免疫組化染色結(jié)果陽性表達比較優(yōu)秀，顆粒和顏色都很清晰，電爐煮沸抗原修復(fù)方式中陽性表達抗體只有一種。

3　討論

免疫組化的原理是基于抗原和抗體的反應(yīng)來實現(xiàn)的，使用顯色劑來對反應(yīng)抗體進行標記，就能夠?qū)M織細胞抗原進行確定，達到定位、定性、定量的目的。抗原和抗體的結(jié)合特異性是比較高的，抗原修復(fù)的有效溫度以及需要的時間根據(jù)使用的設(shè)備以及儀器變化會有一定的差異性，修復(fù)抗原時選擇的溫度范圍以及保持有效溫度的時間也有差異性 ［2］。抗原修復(fù)我們選擇加熱的方式比較多，微波輻射加熱的方式雖然產(chǎn)生的熱量快，但是液體干涸也快，所以，要求使用足夠的修復(fù)液，否則就會導(dǎo)致切片干涸。實驗室研究表明微波輻射對修復(fù)液的要求有時會達到1 000 ml ［3］。使用大量的修復(fù)液需要的沸騰時間也會增加，那么切片的輻射量也會增加，這樣才能夠徹底的讓抗原得到修復(fù)。

總而言之，抗原修復(fù)方法應(yīng)用于免疫組化染色時，需要選擇正確的抗原修復(fù)方式，這樣才能夠讓染色的效果提升，獲得的陽性結(jié)果也更加準確，此次研究中我們選擇的三種修復(fù)方式中，高壓鍋加熱的方式獲得的陽性顆粒表達比較優(yōu)秀，電爐煮沸的陽性表達抗體為一種。