B10細胞的研究現狀

車玉蘭，代佳音(綜述)，畢良佳，林　江(審校)

(哈爾濱醫科大學附屬第四醫院口腔科，哈爾濱 150001)

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B10細胞的研究現狀

車玉蘭△，代佳音(綜述)，畢良佳※，林江(審校)

(哈爾濱醫科大學附屬第四醫院口腔科，哈爾濱 150001)

摘要：B 細胞中存在對免疫應答具有負向調節作用的調節性B 細胞(Bregs)。Bregs具有抗原特異性并可通過白細胞介素10(IL-10)顯著影響T細胞的活性和其介導的炎癥反應。而B10細胞所產生的IL-10是B細胞產生IL-10的主要來源。因此，B10細胞在炎癥、自身免疫病、腫瘤等疾病的發生發展過程中均有重要的免疫調節作用。B10細胞的表型和功能上的研究將是免疫學領域中的重要的進步。

關鍵詞：調節性B細胞；B10細胞；白細胞介素10

B細胞主要通過產生抗原特異性抗體、輔助誘導CD4+T細胞活化而發揮免疫調節作用[1]。研究表明，B細胞中存在對免疫應答具有負向調節作用的B細胞——調節性B細胞(regulatory B cells，Bregs)[2]。近幾年學者對Bregs的研究主要在自身免疫性疾病、炎癥、腫瘤等幾個方面[3-5]。Bregs主要通過產生白細胞介素10(interleukin 10,IL-10)和轉化生長因子β等細胞因子調節免疫系統。2008年，Yanaba等[6]在正常小鼠脾臟中鑒定的一個表型為CD5+CD1dhiCD19hi的Breg亞群。此Breg亞群的免疫調節功能依賴于其產生的IL-10，因此稱之為B10細胞。IL-10具有抑制單核巨噬細胞釋放炎性介質和抗原呈遞，增強抗炎性因子的釋放，阻礙Th1細胞產生干擾素γ等作用。研究表明,這種具有特殊表型且稀少的B10細胞已經成為免疫系統的一個極為重要組成部分[7]。現就B10定義、來源、功能、表型以及目前在炎性疾病及自身免疫疾病中的研究現狀予以綜述。

1B10細胞的定義及來源

1.1B10細胞定義1996年，Wolf等[8]在小鼠實驗性自身免疫性腦脊髓膜炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的模型中最先提出了B細胞的調節性功能的存在,并發現可能有助于急性EAE的免疫調節。2006年，Mizoguchi和Bhan[2]首次使用Bregs的概念來定義這些具有負向調控功能的B細胞群體。Bregs可能是通過產生調節性細胞因子IL-10和轉化生長因子β和(或)與T細胞之間的相互作用而發揮其免疫功能。2008年，Yanaba 等[6]將小鼠脾臟中能分泌IL-10的CD1dhiCD5+的B細胞亞群定義為B10細胞。B10細胞是按功能定義的亞型。目前已經被證實B10細胞只有通過適當的刺激才能具有產生和分泌IL-10的能力。

1.2來源研究證明，分泌IL-10 的B細胞主要來源于脾[9]、腸系膜淋巴結和成年小鼠的腹腔[10]。學者研究得出B10細胞通常占成年小鼠脾臟B細胞的1%～2%[6]。但是，脾臟也包含B10pro細胞，脂多糖刺激48 h 后，7%～9%的脾B細胞能分泌IL-10。腹膜腔也是B10細胞的重要來源，經脂多糖+佛波酯+離子霉素+莫能星刺激5 h后，10%的腹膜腔B細胞能產生IL-10。脂多糖培養48 h后，有30%～35%腹膜腔B細胞能產生IL-10，表明腹膜腔B細胞的大部分是B10前體(B10pro)細胞。同時研究得出，外周血和淋巴結內B10細胞含量較少[7]。因此，目前認為B10細胞主要位于小鼠脾臟和腹膜腔內。

B10pro細胞和B10細胞存在于人體中已經被證實，體外培養純化的人外周血B10pro細胞經脂多糖+CD40L或CpG+CD40L刺激后可發育成為B10細胞[10]。分離成人脾臟中的脾細胞，用佛波酯+離子霉素或脂多糖+佛波酯+離子霉素誘導 5 h后可有表達CD1dhiCD5+并有產生IL-10的B10細胞的產生。這種能產生IL-10的B10細胞可分化成為分泌抗體的漿細胞。另外，B10細胞也可能分化成記憶性B10細胞。研究表明，B10細胞和B10pro細胞也存在于新生兒脾臟和成人的外周血中[10]。在成人外周血中B10+B10pro細胞高度集中于表型為CD24hiCD27+的B細胞的亞群之中。人類B10細胞是否會發育成抗體分泌細胞或記憶性B10細胞仍有待確定。

2B10細胞的表型

目前為止，B10細胞特異性的表面標記尚沒有確定。有學者研究野生型小鼠脾臟B細胞時得出，只有1%～2%的B細胞經過佛波酯和離子霉素的共同刺激產生了IL-10，這就意味著并不是所有B細胞均能產生IL-10[6]。細胞內細胞因子染色技術和流式細胞術表明，小鼠脾臟中產生IL-10的B細胞集中于表型為CD1dhiCD5+的B細胞亞型中。這種特殊的CD1dhiCD5+B細胞亞型與多種B細胞亞型，如CD5+B-1a B細胞，CD1dhiCD23-IgMhiCD1dhi邊緣區B細胞和CD1dhiCD23+IgMhiCD1dhiT2邊緣區前體B細胞共享一些表面標記[11]。小鼠脾臟B10細胞的表面球蛋白主要表達IgDlowIgMhi，還有<10%的細胞表達IgG或 IgA[12]。目前為止，學者們對B10細胞這種B細胞亞群的研究，最常用的方法是通過過繼轉移小鼠實驗來研究B細胞的這種特殊亞群在功能上的機制。

目前，人類B10細胞通常占<1%的外周血B細胞[10]。外周血B10細胞和B10pro高度集中于CD24hi和CD27+的B細胞亞型中，其中約60%同時表達CD38。文獻報道，IL-10+B細胞全部集中于 CD24hiCD38hi和CD24intCD38intB細胞亞型中[13]。也有文獻指出這種B10細胞不屬于任何先前定義的B細胞亞群，但人類B10細胞的表型集中于CD27+和CD38hi的表型之中[14]。人類B10細胞也高表達CD48和CD148[12]。CD48被認為是B細胞活化表面標記[15]，CD148被認為是人類記憶B細胞的表面標記[16]。CD27是記憶B細胞另一個特征性的表面標記，CD27+B細胞亞型可作為疾病活動的標志物同時也能加重自身免疫性疾病[17]。CD24hiCD148+的B10細胞和B10pro細胞可能會選擇性地進入記憶性B細胞類型中。用分裂素刺激人外周血中B10細胞，其增殖能力高于其他B細胞[10]。這與小鼠外周血中B10細胞的研究結果相同[18]。通常，占人體2%～3%B細胞的過渡性B細胞在成人外周血中表型為CD10+CD24hiCD38hi。雖然CD10作為大多數過渡性B細胞廣為接受的表面標記[19]，但并不能證明B10細胞是否來自骨髓。到目前為止，人類B10細胞表型沒有和任何已知的B細胞亞群的表型相同，也沒有發現任何表型是B10細胞所特有的。

3B10細胞在炎癥自身免疫相關疾病中的研究

目前，B10細胞在人類自身免疫性疾病，炎性疾病中的研究取得了一定的成果，為B10細胞在治療中的應用提供了理論基礎。B10細胞和B10pro 細胞存在于自身免疫性疾病患者的外周血中，例如類風濕關節炎、系統性紅斑狼瘡、原發性干燥綜合征、自身免疫性大皰性疾病和多發性硬化病等。與相同年齡的健康對照組相比，自身免疫性疾病患者外周血中的B10+B10pro細胞的量顯著升高[10]。人外周血單核細胞給予佛波酯+離子霉素+脂多糖刺激24 h，發現系統性紅斑狼瘡患者CD5+B細胞產生IL-10的量顯著超過沒有經過刺激的對照組。也有不同的研究表明，自發性產生IL-10的B細胞存在于未經治療的類風濕關節炎和系統性硬化病和系統性紅斑狼瘡患者外周血中[20]。

B10的免疫調節作用和治療潛能已經在多種自身免疫性疾病小鼠模型中證明，如EAE、膠原誘導關節炎、系統性紅斑狼瘡、1型糖尿病等。B10細胞的治療潛能首先在炎性腸病中被證明。在缺乏T細胞抗原受體α而誘發炎性腸病的小鼠模型中發現，B細胞和其自身產生的抗體就可抑制炎性腸病的發展[2]。B10細胞也可調節接觸性超敏反應急性炎癥反應和初始急性期EAE。在用惡唑酮致敏小鼠前2～7 d，消除所有B細胞會使接觸性超敏反應的炎性癥狀加重。有學者發現，在誘發野生型小鼠EAE的前7 d，使用CD20單克隆抗體清除B細胞，可使T細胞在中樞神經系統的擴散和遷移，造成腦膜炎癥狀加重[21]。過繼回輸抗原特異性(髓鞘少突膠質細胞糖蛋白致敏)B10細胞可明顯減輕其EAE的癥狀。14 d 后，將IL-10-/-基因敲除的小鼠脾臟中分離出的CD1dhiCD5+B 細胞過繼回輸至患有EAE的小鼠體內后并不能影響EAE的進展情況。這表明，一旦疾病確立后，這種過繼轉移B10細胞不抑制EAE的進展，而且B10細胞的這種保護性作用具有IL-10依賴性。分離IL-21R-/-,MHC-Ⅱ-/-或者CD40-/-小鼠脾臟中抗原致敏的CD1dhiCD5+B細胞，將其回輸至CD19-/-小鼠體內，發現疾病的嚴重程度沒有改變，說明B10細胞在EAE中發揮功能需要與CD4+T細胞之間的相互作用[22]。因此，B10細胞在EAE中可能在疾病初期起作用并調節急性自身免疫反應，而且發現在晚期消除Treg可加重疾病程度。B10細胞與Treg在EAE疾病發展中的不同階段參與及調節炎癥反應，B10細胞調節疾病初期疾病的發展，Treg主要是在后期階段調控疾病的發展。B10細胞在抑制異常T細胞應答中起重要作用。B10細胞并不直接調節Treg增殖，但明顯改變CD4+T細胞、干擾素γ和腫瘤壞死因子α的產生。且B10細胞下調樹突狀細胞功能，從而間接調節T細胞增殖。

4展望

B10細胞在免疫系統中的重要功能已被廣泛接受，其在免疫系統中的重要性也逐漸被證明，其抗炎作用也可為自身免疫性疾病的治療提供新的治療方法。利用去除B細胞治療一些自身免疫病時需更加謹慎，通過誘導Bregs的活化很可能會成為治療自身免疫病的更好選擇。雖然目前大多數研究主要側重于自身免疫性疾病，但是B10細胞和其他Bregs類似，也將在炎癥性疾病中發揮保護宿主組織的作用，調控免疫應答的過程，以及延續B10細胞在體內的持久性方面發揮其重要功能。目前促進B10細胞發育的一些刺激因子已經被鑒定出[23]，所以無論是體內或體外B10細胞的擴增是可行的。能否利用B10細胞的免疫調節功能來實現臨床轉化并用于治療疾病，可能成為現在最大的難點。

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Study of the B10 CellsCHEYu-lan,DAIJia-yin,BILiang-jia,LINJiang. (DepartmentofStomatology,theFourthAffiliatedHospital,HarbinMedicalUniversity,Harbin150001,China)

Abstract:Regulatory B cells(Bregs),a population of B cells,are considered to have the negative regulatory function on immune responses.Bregs is Ag-specific and significantly influences T cell activation and inflammatory responses through IL-10 production.The IL-10 produced by B10 cells are the main source of IL-10 produced by B cells.Therefore,B10 cells play an important role in the development of some diseases as inflammatory diseases,autoimmune disease and tumor etc.The phenotypic and functional characterization of B10 cells will be an important advance in the immunology field.

Key words:Regulatory B cells; B10 cell; Interleukin-10

收稿日期：2014-06-26修回日期：2014-12-26編輯：相丹峰

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.14.014

中圖分類號:R392.1

文獻標識碼：A

文章編號：1006-2084(2015)14-2531-03