云南松松塔的化學成分研究

劉 爽，劉 熙，李冬梅，劉光明*，王 飛，高 原*

1大理學院藥學與化學學院，大理 671000;2 云南西力生物技術股份有限公司，昆明 650201

松科(Pinaceae)松屬(Pinus)植物多為常綠喬木，稀為灌木，約80 余種，分布于北半球，北至北極地區，南至北非、中美、中南半島及蘇門答臘赤道以南地方;我國產22 種10 變種，另引入16 種2 變種，分布幾遍全國［1］。對松屬植物的化學成分研究表明，該屬植物富含二萜、三萜、黃酮等結構類型［2］，但是，針對云南松松塔部位化學成分的相關研究卻很少。松塔(Pine cone)系松屬植物的球果，在我國具有悠久的藥用歷史，始記于漢末的《名醫別錄》，《本草綱目》中對松塔的祛痰、止咳平喘、祛風和潤腸等功效也有詳細記載［3］。此外，生物活性研究發現，松塔具有抗腫瘤［4］、抗菌［5，6］、抗病毒［7，8］、抗氧化［9］和免疫增強［10］等功能，日本南部九州地區民間也有長期服用日本白松松塔煎水喝治療胃癌的習俗。日本學者對此進行追蹤研究，發現松塔提取物不僅有抗癌活性，還有抑制HIV 復制作用［11］。本課題組從日本學者的研究中得到啟發，對云南松等多種松樹的松塔提取物進行了活性研究，結果顯示幾種松塔提取物均能選擇性地抑制U14(宮頸癌)細胞、S180(實體癌)細胞、Hepa(肝癌腹水)、Mmtv(乳房腫瘤)細胞等的生長，并且具有抗HIV 活性［12］。為了從云南松松塔中尋找具有潛在藥物開發價值的活性先導化合物，我們對云南松松塔的化學成分進行了深入、系統地分離，并利用現代波譜技術對分離得到的13 個單體化合物進行了結構鑒定。以上研究豐富了該植物的化學成分研究內容，為充分開發利用云南松松塔奠定了理論基礎。

1 儀器與材料

1.1 儀器與試劑

Bruker AV-400 和Bruker Avance III 600 MHz 核磁共振光譜儀。柱色譜正相硅膠(200～300 目)和薄層色譜硅膠GF254均為青島美高集團有限公司生產;反相填充材料為Chromatorex C-18(40～75 μm，Fuji Silysia Chemical Ltd.，Kasugai，Aichi，Japan);MCI 填充材料為MCI-gel CHP-20P(75～150 μm，Mitsubishi Chemical Corp，Tokyo，Japan);凝 膠 為Sephadex LH-20(Amersham Biosciences，Sweden);中壓液相色譜(MPLC)系統為Büchi Sepacore System equipping pump manager C-615，pump modules C-605，fraction collector C-660(Büchi Labortechnik AG，Flawil，Switzerland)。化合物檢測用TLC(Qingdao Marine Chemical Inc，China)結合Agilent 1200 HPLC series system equipped by Eclipse XDB-C18column(5 μm，4.6 × 150 mm)。顯色劑為香草醛H2SO4/EtOH 溶液。

1.2 實驗材料

云南松松塔于云南大理州漾濞縣小金牛村附近采集，由云南省大理學院夏從龍教授鑒定，該植物樣品存放于大理白族自治州大理學院藥學與化學學院。

2 提取與分離

干燥的云南松松塔26.5 kg，粉碎后，立即用95%乙醇在室溫條件下冷浸提取5 次，每次48 h;合并5 次提取液濃縮后，得到浸膏1.2 kg。浸膏用氯仿∶甲醇=1∶1 溶劑溶解后，硅膠拌樣，經硅膠柱層析，以石油醚-丙酮體系進行梯度洗脫(v∶v=95∶5，90∶10，80∶20，70∶30，60∶40，50∶50，0∶100)，檢測合并后得到11 個流分。Fr 1 分別經硅膠(氯仿∶丙酮=200∶1，100∶1，50∶1，20∶1)和Sephadex LH-20(氯仿∶甲醇=1∶1)柱層析分離純化，得到化合物12(3 mg)。Fr 4 經過反復硅膠、MCI、Sephadex LH-20(甲醇)、RP-18 柱層析分離，得到化合物13(7 mg)、1(12 mg)、5(94 mg)、6(15 mg)。Fr 7～11 經反復硅膠(氯仿∶甲醇=200∶1、100∶1、50∶1)和Sephadex LH-20(甲醇)柱層析分離，得到化合物9(3 mg)、11(12 mg)、7(2 mg)、8(617 mg)、4(82 mg)、2(2 mg)、3(57 mg)、10(439 mg)。

3 結構鑒定

化合物1 無色油狀物;1H NMR (CDCl3，400 MHz)δ:7.70 (1H，dd，J=8.4，1.8 Hz，H-12)，7.62(1H，d，J=1.8 Hz，H-14)，7.32 (1H，d，J=8.4 Hz，H-11)，2.94 (2H，m，H-7)，2.55 (3H，s，-COMe)，2.32 (1H，dd，J=12.4，3.0 Hz，H-1a)，2.19 (1H，dd，J=12.0，2.3 Hz，H-5)，1.84 (1H，m，H-6a)，1.76 (2H，m，H-2)，1.59 (1H，m，H-3a)，1.47 (1H，m，H-3b)，1.39 (1H，m，H-6b)，1.36(1H，m，H-1b)，1.27 (3H，s，H-19)，1.20 (3H，s，H-20);13C NMR (CDCl3，100 MHz)δ:198.2 (s，C-15)，183.6 (s，C-18)，154.7 (s，C-9)，135.4 (s，C-8)，134.5 (s，C-13)，129.3 (d，C-14)，125.8 (d，C-12)，124.6 (d，C-11)，47.3 (s，C-4)，44.1 (d，C-5)，37.6 (t，C-1)，37.5 (s，C-10)，36.6 (t，C-3)，29.8 (t，C-7)，26.6 (q，C-17)，24.8 (q，C-20)，21.5(t，C-6)，18.3 (t，C-2)，16.2 (q，C-19)。以上數據與文獻［13］報道的16-降-15-氧代脫氫松香酸數據基本一致，故化合物1 鑒定為16-降-15-氧代脫氫松香酸。

化合物2 無色油狀物;1H NMR (CDCl3，600 MHz)δ:8.52 (1H，d，J=1.8 Hz，H-14)，8.13(1H，dd，J=8.4，1.8 Hz，H-12)，7.48 (1H，d，J=8.4 Hz，H-11)，2.77 (1H，dd，J=17.4，14.4 Hz，H-6a)，2.70 (1H，dd，J=14.4，3.0 Hz，H-5)，2.61(3H，s，-COMe)，2.53 (1H，m，H-1a)，2.39 (1H，dd，J=17.4，3.0 Hz，H-6b)，1.83 (1H，m，H-2)，1.77 (1H，m，H-3)，1.64 (1H，m，H-1b)，1.35 (3H，s，H-19)，1.27 (3H，s，H-20)。以上數據與文獻［14］報道的16-降-7，15-二氧代脫氫松香酸數據基本一致，故化合物2 鑒定為16-降-7，15-二氧代脫氫松香酸。

化合物3 無色油狀物;1H NMR (CD3OD，400 MHz)δ:7.43 (1H，d，J=2.0 Hz，H-14)，7.34(1H，dd，J=8.4，2.0 Hz，H-12)，7.25 (1H，d，J=8.4 Hz，H-11)，4.72 (1H，d，J=3.2 Hz，H-7)，2.54 (1H，dd，J=12.8，2.0 Hz，H-5)，2.36 (1H，brd，J=12.8 Hz，H-1a)，2.11 (1H，d，J=4.4 Hz，H-6a)，1.93 (1H，dd，J=12.8，4.0 Hz，H-3a)，1.83(1H，m，H-2a)，1.75 (1H，m，H-2b)，1.67 (1H，m，H-3b)，1.64 (1H，m，H-6b)，1.50 (3H，s，H-16)，1.50 (3H，s，H-17)，1.48 (1H，m，H-1b)，1.26(3H，s，H-19)，1.15 (3H，s，H-20);13C NMR(CD3OD，100 MHz)δ:182.2 (s，C-18)，148.8 (s，C-9)，148.1 (s，C-13)，136.7 (s，C-8)，127.6 (d，C-14)，125.5 (d，C-12)，124.8 (d，C-11)，72.8 (s，C-15)，68.5 (d，C-7)，48.3 (s，C-4)，40.9 (d，C-5)，39.0 (t，C-1)，38.5 (s，C-10)，37.6 (t，C-3)，32.3(t，C-6)，31.8 (q，C-17)，31.8 (q，C-16)，24.7 (q，C-20)，19.7 (t，C-2)，17.1 (q，C-19)。以上數據與文獻［15］報道的7α，15-二羥基脫氫松香酸數據基本一致，故化合物3 鑒定為7α，15-二羥基脫氫松香酸。

化合物4 無色油狀物;1H NMR (CDCl3，400 MHz)δ:7.99 (1H，d，J=2.0 Hz，H-14)，7.69(1H，dd，J=8.4，2.0 Hz，H-12)，7.30 (1H，d，J=8.4 Hz，H-11)，3.59 (3H，s，-COOMe)，1.51 (3H，s，H-16)，1.51 (3H，s，H-17)，1.28 (3H，s，H-20)，1.20 (3H，s，H-19)。以上數據與文獻［16］報道的15-羥基-7-氧代脫氫松香酸甲酯數據基本一致，故化合物4 鑒定為15-羥基-7-氧代脫氫松香酸甲酯。

化合物5 無色油狀物;1H NMR (CDCl3，400 MHz)δ:4.82 (1H，brs，H-17a)，4.48 (1H，brs，H-17b)，3.66 (2H，brt，J=6.5 Hz，H-15)，1.23 (3H，s，H-19)，0.58 (3H，s，H-20);13C NMR (CDCl3，100 MHz)δ:183.2 (s，C-19)，148.2 (s，C-8)，106.4 (t，C-17)，61.2 (t，C-15)，56.5 (d，C-9)，56.3 (d，C-5)，44.1 (s，C-4)，40.5 (s，C-10)，39.5 (t，C-14)，39.1 (t，C-1)，38.7 (t，C-7)，37.9 (t，C-3)，36.3(t，C-12)，30.2 (d，C-13)，29.0 (q，C-18)，26.0 (t，C-6)，21.1 (t，C-11)，19.9 (t，C-2)，19.8 (q，C-16)，12.7 (q，C-20)。以上數據與文獻［17］報道的南洋杉醇數據基本一致，故化合物5 鑒定為南洋杉酸。

化合物6 無色油狀物;1H NMR (CDCl3，400 MHz)δ:5.01 (1H，brs，H-15a)，4.94 (1H，brs，H-15b)，4.15 (1H，dd，J=10.0，4.5 Hz，H-9)，3.07(1H，td，J=10.0，7.5 Hz，H-2)，2.60 (1H，dt，J=14.0，4.5 Hz，H-7b)，2.43 (1H，m，H-11b)，2.29(1H，td，J=11.5，2.0 Hz，H-11a)，2.22 (1H，tdd，J=11.5，9.0，1.5 Hz，H-10b)，2.06 (1H，t，J=10.0 Hz，H-3b)，2.02 (1H，m，H-10a)，1.86 (1H，m，H-5)，1.86 (1H，m，H-7a)，1.73 (2H，m，H-6)，1.42(1H，dd，J=10.0，7.5 Hz，H-3a)，1.02 (1H，s，H-13)，1.01 (1H，s，H-14)。以上數據與文獻［18］報道的異考布松數據基本一致，故化合物6 鑒定為異考布松。

化合物7 白色粉末狀;1H NMR (CD3OD，600 MHz)δ:7.23 (1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，6.68 (1H，d，J=2.5 Hz，H-5')，6.59 (1H，d，J=2.5 Hz，H-3')，6.35 (1H，d，J=2.0 Hz，H-4)，2.75 (3H，s，H-7')。以上數據與文獻［19］報道的交鏈孢酚數據基本一致，故化合物7 鑒定為交鏈孢酚。

化合物8 無色油狀物;1H NMR (CDCl3，500 MHz)δ:6.82 (1H，d，J=7.0 Hz，H-5)，6.79 (1H，d，J=8.0 Hz，H-5')，6.61 (1H，s，H-2)，6.59 (1H，d，J=7.0 Hz，H-6)，6.49 (1H，dd，J=8.0，1.5 Hz，H-6')，6.40 (1H，d，J=1.5 Hz，H-2')，5.59 (2H，brs，Ar-OH)，4.14 (1H，dd，J=9.0，7.0 Hz，H-9'a)，3.87 (1H，dd，J=9.0，7.0 Hz，H-9'b)，3.80(3H×2，s，-OMe)，2.93 (1H，dd，J=14.0，5.5 Hz，H-7a)，2.88 (1H，dd，J=14.0，7.0 Hz，H-7b)，2.61(1H，m，H-7'b)，2.56 (1H，m，H-8)，2.53 (1H，m，H-7'a)，2.47 (1H，m，H-8');13C NMR (CDCl3，100 MHz)δ:178.8 (s，C-9)，146.6 (s，C-3)，146.5 (s，C-3')，144.4 (s，C-4)，144.3 (s，C-4')，129.7 (s，C-1)，129.5 (s，C-1')，122.0 (d，C-6)，121.3 (d，C-6')，114.3 (d，C-5)，114.0 (d，C-5')，111.4 (d，C-2)，110.1 (d，C-2')，71.3 (t，C-9')，55.8 (q，-OMe)，55.7 (q，-OMe)，46.5 (d，C-8)，40.9 (d，C-8')，34.5 (t，C-7)，38.2 (t，C-7')。以上數據與文獻［20］報道的羅漢松脂素數據基本一致，故化合物8鑒定為羅漢松脂素。

化合物9 無色油狀物;1H NMR (CDCl3，400 MHz)δ:6.77～6.95 (6H，m，Ar-H)，5.60，5.58(2H，s，Ar-OH)，4.85 (1H，d，J=5.2 Hz，H-7)，4.42 (1H，d，J=7.2 Hz，H-7')，3.92 (3H，s，-OMe)，3.90 (3H，s，-OMe)。以上數據與文獻［21］報道的(+)-表松脂素數據基本一致，故化合物9 鑒定為(+)-表松脂素。

化合物10 無色油狀物;1H NMR (CD3OD，400 MHz)δ:7.38 (1H，d，J=2.0 Hz，H-2')，7.10 (1H，dd，J=8.0，2.0 Hz，H-6')，6.89 (1H，d，J=8.0 Hz，H-5')，5.92 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，5.88(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，4.98 (1H，d，J=11.6 Hz，H-2)，4.57 (1H，d，J=11.6 Hz，H-3)，4.82(1H，d，J=7.6 Hz，H-1'')，3.88 (1H，dd，J=12.0，2.0 Hz，H-6''a)，3.67 (1H，d，J=6.0 Hz，H-6''b)，3.51 (1H，dd，J=9.2，7.7 Hz，H-2'')，3.46(1H，t，J=9.3 Hz，H-3'')，3.43 (1H，m，H-5'')，3.37 (1H，t，J=9.1 Hz，H-4'');13C NMR (CD3OD，100 MHz)δ:198.4 (s，C-4)，168.7 (s，C-7)，165.3(s，C-9)，164.4 (s，C-5)，148.9 (s，C-4')，146.5(s，C-3')，130.0 (s，C-1')，124.6 (d，C-6')，118.1(d，C-2')，116.8 (d，C-5')，104.0 (d，C-1'')，101.8(s，C-10)，97.3 (d，C-8)，96.3 (d，C-6)，84.9 (d，C-2)，78.3 (d，C-5'')，77.6 (d，C-3'')，74.9 (d，C-2'')，73.5 (d，C-3)，71.5 (d，C-4'')，62.5 (t，C-6'')。以上數據與文獻［22］報道的二氫槲皮素3'-O-葡萄糖甙數據基本一致，故化合物10 鑒定為二氫槲皮素3'-O-葡萄糖甙。

化合物11 白色粉末狀;1H NMR (CD3OD，500 MHz)δ:7.46 (2H，d，J=7.5 Hz，H-2'，H-6')，7.28(2H，t，J=7.5 Hz，H-3'，H-5')，7.18 (1H，t，J=7.5 Hz，H-4')，6.99 (1H，d，J=16.5 Hz，H-7)，6.95 (1H，d，J=16.5 Hz，H-8)，6.45 (2H，d，J=2.0 Hz，H-2，H-6)，6.15 (1H，t，J=2.0 Hz，H-4)。以上數據與文獻［23］報道的數據基本一致，故化合物11 鑒定為赤松素。

化合物12 無色油狀物;1H NMR (CDCl3，500 MHz)δ:7.29 (2H，s，H-2'，H-6')，7.20 (2H，s，H-3'，H-5')，7.19 (1H，s，H-4')，6.59 (1H，d，J=12.0 Hz，H-8)，6.49 (1H，d，J=12.0 Hz，H-7)，6.38(1H，s，H-4)，6.30 (1H，s，H-6)，6.26 (1H，s，H-2)，4.72 (1H，brs，Ar-OH)，3.63 (3H，s，-OMe)。以上數據與文獻［24］報道的(Z)-3-羥基-5-甲氧基二苯乙烯數據基本一致，故化合物12 鑒定為(Z)-3-羥基-5-甲氧基二苯乙烯。

化合物13 黃色油狀物;1H NMR (CDCl3，500 MHz)δ:9.64 (1H，d，J=7.5 Hz，H-3')，7.39 (1H，d，J=16.0 Hz，H-1')，7.13 (1H，d，J=8.0，2.0 Hz，H-6)，7.06 (1H，d，J=2.0Hz，H-2)，6.96 (1H，d，J=8.0 Hz，H-5)，6.59 (1H，dd，J=16.0，8.0 Hz，H-2')，6.06 (1H，s，Ar-OH)，3.94 (3H，s，-OMe)。以上數據與文獻［25］報道的數據基本一致，故化合物13 鑒定為松柏醛。

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