胱抑素C與基質(zhì)金屬蛋白酶9在急性腦梗死中臨床價(jià)值的探討

王　璇,吳成吉,董淑欣,王志群

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院 神經(jīng)四科，黑龍江 佳木斯154000)

?

胱抑素C與基質(zhì)金屬蛋白酶9在急性腦梗死中臨床價(jià)值的探討

王璇,吳成吉,董淑欣,王志群*

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院 神經(jīng)四科，黑龍江 佳木斯154000)

摘要：目的 探討急性腦梗死患者血清胱抑素C(Cys C)與基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)的水平變化及臨床價(jià)值。方法隨機(jī)選取92例急性腦封死患者作為觀察組，同期健康體檢者85例作為對(duì)照組，分別檢測(cè)兩組血清Cys C及MMP-9水平。于治療后5 d及10 d時(shí)復(fù)查觀察組上述兩項(xiàng)指標(biāo)。對(duì)觀察組行頸部血管彩超檢查并分級(jí)。結(jié)果觀察組治療前Cys C及MMP-9水平均高于對(duì)照組[(1.27±0.35)mg/L，(0.86±0.22) mg/L；(183.68±58.92)μg/L，(118.46±45.83)μg/L，P<0.05]。治療后10 d觀察組血清Cys C、 MMP-9水平較治療前下降[(0.95±0.21)mg/L，(1.27±0.35)mg/L；(156.37±52.84)μg/L，(118.46±45.83)μg/L，P<0.05]。頸動(dòng)脈狹窄組血清Cys C及MMP-9水平均高于無狹窄組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論血清Cys C及MMP-9水平在急性腦梗死時(shí)明顯升高，且與頸動(dòng)脈狹窄程度密切相關(guān)。在腦梗死的風(fēng)險(xiǎn)預(yù)判、病情評(píng)估、療效及預(yù)后上有重要臨床價(jià)值。

(ChinJLabDiagn,2015,19:1062)

急性腦梗死發(fā)病率高，起病急驟，病情兇險(xiǎn)且具有較高的致殘率和病死率。找到有效的判斷風(fēng)險(xiǎn)、評(píng)估病情、評(píng)判療效及預(yù)后的指標(biāo)尤為重要。Cys C及MMP-9近年來被認(rèn)為參與缺血性腦血管病的病理過程，與腦梗死關(guān)系密切。本研究通過測(cè)定急性腦梗死患者血清Cys C、MMP-9含量并分析其隨病情進(jìn)展及與頸動(dòng)脈狹窄的關(guān)系，探討Cys C、MMP-9在急性腦梗死中的臨床意義。

1資料和方法

1.1一般資料選擇2013年5月-2014年5月診于我院的92例急性腦梗死患者作為研究組，其中男49例，女43例，年齡50-82歲，平均年齡(65.8±6.7)歲，所有患者均于發(fā)病后24 h內(nèi)入院，診斷標(biāo)準(zhǔn)以第四屆全國(guó)腦血管學(xué)術(shù)會(huì)議制定的標(biāo)準(zhǔn)為依據(jù)。對(duì)照組為同期在我院體檢健康者85例，其中男44例，女41例，年齡49-81歲，平均年齡(63.2±7.3)歲。兩組研究對(duì)象的選擇排除惡性腫瘤、嚴(yán)重的心、肺、肝、腎等重要臟器疾病、顱腦外傷病史及嚴(yán)重感染征象者。兩組研究對(duì)象性別、年齡等方面具有可比性，無顯著差異 (P>0.05)。

1.2　方法

1.2.1生化指標(biāo)檢測(cè)清晨抽取研究對(duì)象5 ml空腹靜脈血置于真空抗凝管中，加入20 μg抑肽酶(麗珠制藥廠生產(chǎn))及30 μl EDTA二鈉，3 000 r/min 離心15 min，分離血清并取上清液與試管中，置-30℃冰箱中保存。采用免疫比濁法測(cè)定血清Cys C水平，試劑盒來自北京利德曼生化技術(shù)有限公司，測(cè)定由OLYMPUS公司生產(chǎn)的AU5400全自動(dòng)生化分析儀完成。檢測(cè)方法嚴(yán)格按試劑盒提供的說明書進(jìn)行。樣本中血清Cys C與超敏化的Cys C抗體膠乳顆粒試劑反應(yīng)，形成免疫復(fù)合物產(chǎn)生濁度，在570 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)吸光度的變化，其吸光度升高的水平與樣品中的血清Cys C含量成正比。成人血清Cys C水平的正常范圍是0.2-1.03 mg/L。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定血清MMP-9水平，MMP-9檢測(cè)試劑盒購(gòu)自艾萊薩生物科技有限公司，檢測(cè)范圍在45 μg/L-1 200 μg/L。檢測(cè)方法嚴(yán)格按試劑盒提供的說明書進(jìn)行。試劑盒采用雙抗體夾心法原理，將抗人MMP-9蛋白與該抗體結(jié)合，再加入酶標(biāo)記的MMP-9多克隆抗體與抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合。最后加入底物顯色，產(chǎn)生的顏色強(qiáng)度與MMP-9含量呈正比。觀察組在治療后5 d與10 d時(shí)復(fù)查血清Cys C及MMP-9。

1.2.2頸動(dòng)脈超聲檢查對(duì)觀察組患者于入院3d內(nèi)行頸部血管彩超檢查，采用Philips ALT-5000彩色多普勒超聲檢測(cè)儀，探頭頻率5-12 Mhz。兩組均采用平臥位，頭偏向一側(cè)，分別于雙側(cè)頸動(dòng)脈遠(yuǎn)端分叉處1 cm、頸動(dòng)脈竇、頸內(nèi)動(dòng)脈起始處1 cm測(cè)量。采用北美癥狀性頸動(dòng)脈內(nèi)膜剝脫術(shù)研究(NASCET)標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算頸動(dòng)脈狹窄率[4]，并分為無狹窄(無斑塊或可見內(nèi)膜的增厚)、輕度狹窄(狹窄率小于50%)、中度狹窄(狹窄率50%-69%)、重度狹窄(狹窄率70%-99%)及完全閉塞。存在多處狹窄部位時(shí)以較嚴(yán)重等級(jí)劃定。觀察組中按照頸動(dòng)脈狹窄程度分為：無狹窄組48例(頸動(dòng)脈無狹窄)，有狹窄組44例(頸動(dòng)脈輕、中、重度狹窄各18、15、11例)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 11.0軟件對(duì)所有實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，對(duì)計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，對(duì)計(jì)量資料用t檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)性檢驗(yàn)，P<0.05有顯著差異。

2結(jié)果

2.1治療前后兩組Cys C與MMP-9水平變化觀察組治療前Cys C及MMP-9水平顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。對(duì)照組Cys C及MMP-9含量未見明顯異常，在正常參考范圍內(nèi)。觀察組血清Cys C水平在治療后5 d及10 d呈下降趨勢(shì)，與治療前相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；觀察組血清MMP-9水平在治療后5 d時(shí)高于治療前，10 d時(shí)明顯下降，與治療前相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且兩項(xiàng)指標(biāo)治療后5 d與10 d相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1　治療前對(duì)照組及治療前后觀察組Cys C與

注：與對(duì)照組相比*P<0.05;與治療前相比#P<0.05；與治療后5 d相比△P<0.05

2.2不同頸動(dòng)脈狹窄程度Cys C及MMP-9水平觀察組檢出無狹窄48例(52.17%)，輕度狹窄18例(19.56%)，中度狹窄15例(16.30%)，重度狹窄11例(11.96%)。有狹窄組Cys C及MMP-9水平均高于無狹窄組，且隨頸動(dòng)脈狹窄程度增加而升高，各組間兩兩比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2　觀察組不同頸動(dòng)脈狹窄程度Cys C

注：與無狹窄組相比，統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著差異，F(xiàn)=11.749(P<0.05)。與輕度狹窄組比較#P<0.05,與重度狹窄組比較△P<0.05

2.4Cys C和MMP-9相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)性檢驗(yàn)，對(duì)所有急性腦梗死患者血清中CysC和MMP-9的水平分析發(fā)現(xiàn)，排除腦梗死相關(guān)的因素：吸煙、高血壓病、糖尿病及年齡，控制其他危險(xiǎn)因素后Cys C與是否患腦梗死呈正相關(guān)(r=0.739，P<0.01)，血清Cys C與頸動(dòng)脈狹窄呈正相關(guān)(r=0.763，P<0.01)。血清MMP-9水平與外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)呈正相關(guān)(r=0.782，P<0.01)，血清MMP-9與頸動(dòng)脈狹窄呈正相關(guān)(r=0.753，P<0.01)。

3討論

頸動(dòng)脈狹窄導(dǎo)致的血流動(dòng)力學(xué)障礙是引起腦梗死的重要原因之一[5]。大量研究表明 ，多數(shù)腦血管病患者均伴有不同程度頸動(dòng)脈狹窄，重度頸動(dòng)脈狹窄還可顯著增高腦梗死的復(fù)發(fā)率[6]。因引起狹窄的斑塊富含脂質(zhì)，本身極易脫落，加之狹窄處遠(yuǎn)端血管呈血流低灌注狀態(tài)，狹窄處血流高速流動(dòng)，作用于斑塊表面易造成斑塊破裂形成栓子。斑塊破裂后導(dǎo)致血管壁膠原及脂質(zhì)暴露，血小板聚集啟動(dòng)凝血途徑形成血栓[7]。由此可見分析頸動(dòng)脈狹窄程度與腦梗死的關(guān)系在腦梗死疾病的預(yù)防、病情程度及復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)判斷上具有重要臨床意義。

Cys C是來源于所有有核細(xì)胞一種半胱氨酸蛋白酶抑制劑，與心血管疾病、腫瘤的生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移等多種過程相關(guān)。Cys C參與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成及各種炎性反應(yīng)[8]。血管壁損傷時(shí)炎性細(xì)胞因子增加，刺激多種蛋白酶的過度表達(dá)，導(dǎo)致蛋白酶抑制劑隨之增加，通過相應(yīng)的Cys C上調(diào)達(dá)到蛋白酶及其抑制劑的平衡。Cys C在體內(nèi)含量豐富，經(jīng)腎小球?yàn)V過后在腎小管被完全吸收并酶解，是反應(yīng)腎小球?yàn)V過功能的較理想指標(biāo)。近年來Cys C被認(rèn)為與腦血管疾病的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。腦梗死后，腦脊液中的Cys C通過血腦屏障進(jìn)入血漿，導(dǎo)致血漿Cys C含量升高。另外，腦梗死可導(dǎo)致急性腦水腫，從而導(dǎo)致顱內(nèi)壓增高，并通過神經(jīng)內(nèi)分泌紊亂機(jī)制使腎功能異常，血管緊張素和抗利尿激素分泌增加，腎血流減少，腎小球?yàn)V過率降低，血液循環(huán)中Cys C排除減少，更加促進(jìn)血漿Cys C 增高[9]。國(guó)內(nèi)外已研究表明血清Cys-C水平在急性腦梗死組顯著增高，且與病情嚴(yán)重程度及CSS、NIHSS評(píng)分呈正相關(guān)[4]。研究結(jié)果表明，觀察組急性腦梗死患者治療前后血清Cys C水平顯著高于對(duì)照組，Cys C水平隨病情好轉(zhuǎn)而逐漸下降。與國(guó)內(nèi)外研究結(jié)果一致，表明Cys C 可作為診斷腦梗死的重要指標(biāo)。并且大多數(shù)研究認(rèn)為Cys C可能是腦梗死發(fā)生、發(fā)展的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

基質(zhì)金屬蛋白酶類是一組參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)多種生理和病理過程的鈣離子和鋅離子依賴性蛋白酶，MMP-9又稱明膠酶B，主要來源于內(nèi)皮細(xì)胞等，體內(nèi)許多生長(zhǎng)因子及炎性細(xì)胞因子均能誘導(dǎo)其表達(dá)[10]。同時(shí)MMP-9也是基質(zhì)金屬蛋白酶類家族中與動(dòng)脈粥樣硬化、腦血管疾病關(guān)系較為密切的成員之一。MMP-9是一種多源性糖蛋白，在中性粒細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞等多種細(xì)胞中表達(dá)分泌。多項(xiàng)研究表明，MMP-9在腦梗死發(fā)生、腦疝形成、繼發(fā)性腦水腫等病理過程中起重要作用[11]。腦梗死后血清MMP-9 含量明顯增加，且與腦梗死體積、基底膜的損傷程度、血管源性的水腫呈正相關(guān)，而且梗死體積越大。病情越嚴(yán)重，局部和全身炎癥反應(yīng)越強(qiáng)烈。其機(jī)制可能為腦梗死時(shí)鈣超載致使MMP-9 活性增加，大量降解細(xì)胞外基質(zhì)中的Ⅳ型膠原，破壞了基底膜完整性并提高血腦屏障的通透性。本研究結(jié)果顯示血清MMP-9水平在急性腦梗死時(shí)明顯高，在治療后5 d內(nèi)先上升隨后逐漸下降，其對(duì)腦梗死病情及預(yù)后有預(yù)測(cè)價(jià)值。

參考文獻(xiàn)：

[1]Kaur Gurjinder,Levy Efrat.Cystatin C in Alzheimer's disease.[J].Frontiers in Molecular Neuroscience,2012,5(12):1520.

[2]李明芬,黃曉琪,林英輝,等.急性腦梗死患者血小板活化與血管內(nèi)皮損傷標(biāo)志物檢測(cè)及其臨床意義[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2011,15(7):1119.

[3]Li Dan-Dong,Song Jin-Ning,Huang Huan,et al.The roles of MMP-9/TIMP-1 in cerebral edema following experimental acute cerebral infarction in rats.[J].Neuroscience letters,2013,55(10):125.

[4]陳瑞英,鄭清存,安雅臣,等.脂蛋白相關(guān)性磷脂酶A2、超敏C反應(yīng)蛋白與腦梗死患者頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的關(guān)系[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2011,15(7):1122.

[5]Qin Hu,Chunhua Chen,Junhao Yan,et al.Therapeutic application of gene silencing MMP-9 in a middle cerebral artery occlusion-induced focal ischemia rat model[J].Experimental Neurology,2008,21(61):300.

[6]Toshiyuki Okazaki,Yoko Yamamoto,Keishi Yoda,et al.The ratio of d -dimer to brain natriuretic peptide may help to differentiate between cerebral infarction with and without acute aortic dissection[J].Journal of the Neurological Sciences,2014,15(6):441.

[7]Y uji Tomizawa,Ryota Tanaka,Kiyoshi Sekiguchi,et al.Cerebral Infarction in a Case of Parry-Romberg Syndrome[J].Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases,2013,7(6):6055.

[8]包雪鸚,由陽,金海燕,等.腦梗死患者血小板參數(shù)的變化及分析[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2010,14(12):1993.

[9]Zhou Ji-ying,Dong Wei-wei.Matrix metalloproteinase-9 expression by endothelial cells incubated with peripheral blood leukocytes from patients with cerebral infarction.[J].Zhonghua Yixue Zazhi,2004,8(12):3482.

[10]張?zhí)?王埮.血清胱抑素C與急性腦梗死發(fā)病及近期預(yù)后的相關(guān)性分析[J].中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志,2013,30(10):935.

[11]Wang Peng-Jun,Song Rong-Rong,Zhang Zhuo-Bo,et al.[Changes in plasma content of matrix metallo proteinase-9 in acute cerebral infarction patients before and after thrombolytic therapy and its significance].[J].中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué),2010,22(10):51.

關(guān)鍵詞：急性腦梗死； 胱抑素C； 基質(zhì)金屬蛋白酶-9； 頸動(dòng)脈狹窄

Discussion on cystatin C and matrix metalloproteinase 9 in patients with acute cerebral infarction in the clinical valueWANGXuan，WUCheng-ji，DONGShu-xin，etal.(FirstAffiliatedHospitalofJiamusiUniversityDepartmentofNeurology,JiaMu-si154000,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the change of serum cystain C (Cys C) and matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) concentration in acute cerebral infraction(ACI) patients and their clinical significance.Methods92 patients with acute cerebral infraction were chosen randomly as observational group,and 85 health examination were chosen as the control group.Measuring the level of Cys C and MMP-9 in the two groups separately.The observational group were grading by carotid duplex ultrasound.ResultsThe concentration of Cys C and MMP-9 in observational group were higher than control group before treatment [(1.27±0.35)mg/L，(0.86±0.22) mg/L；(183.68±58.92)μg/L，(118.46±45.83)μg/L，P<0.05].Compared to the control group,the level of Cys C and MMP-9 in observational group were decreased after treatment [(0.95±0.21) mg/L，(1.27±0.35)mg/L；(156.37±52.84)μg/L，(118.46±45.83)μg/L，P<0.05].The concentration of Cys C and MMP-9 in carotid stenosis group is much higher(P<0.05).Conclusion In the patients of ACI,Cys C and MMP-9 were improved significantly,and the degree of Carotid artery stenosis had contact with them closely.The level of Cys C and MMP-9 therefore might have great value in the clinical significance of ACI.

Key words:acute cerebral infraction;Cys C;MMP-9;Carotid artery stenosis

(收稿日期：2014-07-19)

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

中圖分類號(hào)：R743

文章編號(hào)：1007-4287(2015)07-1062-03

*通訊作者

基金項(xiàng)目：黑龍江省青年科學(xué)基金項(xiàng)目(QC2011C053)