32例早幼粒細胞白血病患者白血病細胞免疫表型分析

何秋陽　馬順高　鐘國梁　云南省大理州人民醫院檢驗科　671000

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32例早幼粒細胞白血病患者白血病細胞免疫表型分析

何秋陽馬順高鐘國梁云南省大理州人民醫院檢驗科671000

摘要目的：探討32例急性早幼粒細胞白血病的白血病免疫分型特點及和快速診斷方面臨床意義。方法：用Pc5-CD45、單克隆抗體(CD) 和流式細胞儀對32例急性早幼粒白血病患者骨髓單個核細胞進行測定, 進行免疫表型分析。結果：32例急性早幼粒細胞白血病免疫表型分析，13種抗原檢測中CD34陰性和HLA-DR陰性分別為75.0%和84.4%，陽性表達率從高到低依次為CD33> cCMPO> CD13> CD117> CD34> CD15> HLA-DR> cCD79a> cCD3, CD10, CD19> CD14, CD7。結論：早幼粒細胞的免疫表型具有獨特的特征，流式細胞術對急性早幼粒細胞白血病的快速診斷、預后有著重要意義。

關鍵詞早幼粒細胞白血病免疫表型流式細胞術

急性早幼粒細胞白血病(APL)是急性髓系白血病(AML)的一個特殊類型，快速診斷APL，及時給予患者藥物治療，能夠提高患者生存率和緩解率。傳統方法單憑形態學、細胞化學快速診斷APL有一定困難和局限性，隨著流式細胞術的發展，免疫表型已成為快速診斷APL的重要工具，它能夠輔助APL快速診斷，提高APL診斷準確性。本文對32例APL免疫表型特征進行回顧性分析，現報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料32例均為我院2008年1月-2013年12月住院患者，均為初診的經FAB分型確診的APL患者。其中男21例，女11例；年齡9～68歲,平均年齡38歲。

1.2儀器與試劑美國Beckman-Coulter公司EPICS XL4型流式細胞儀，所用單克隆抗體(單抗)包括T淋系的cCD3、CD7；B淋系的CDIO、CD19、cCD79a；髓系的CD13、CD14、CD15、CD33、CD117；髓過氧化物酶(cMPO)屬于非CD類抗原，用于髓系白血病及髓系分化的研究，是髓系特異性最強的標記；干、祖細胞單抗為CD34、HLA-DR：有核細胞均有表達的單抗CD45等。所有CD抗體試劑、溶血劑、清洗液、鞘液等均為美國Beckman-Coulter公司產品。

1.3方法取骨髓置于肝素抗凝管,調整細胞數至(0.5～1.0)×106/ml,采用三色流式細胞術檢測胞膜抗原。每管取50μl加不同組合抗體各10μl,同時做同型對照管,混勻,避光20min,溶血后上機檢測分析, 每管獲取5 000個細胞, 采用CD45/SSC雙參數設門,分析細胞群表面抗原表達情況。結果判斷:CD45/SSC 設門中原始細胞群表面抗原陽性率≥20%為陽性。

1.4統計學處理采用SPSS19.0 統計軟件包進行分析處理。

2結果

用流式細胞術檢測32例APL免疫表型，13種抗原陽性表達率從高到低依次為CD33>cCMPO>CD13>CD117>CD34>CD15>HLA-DR> cCD79a>cCD3,CD10,CD19>CD14，CD7。cCMPO最高表達100%，最低表達10.8%，平均表達67.3%，陽性率93.8%，CD34最高表達74.4%，最低表達0%，平均表達19.4%,HLA-DR最高表達43.0%，最低表達0%，平均表達8.8%,T系和B系抗原也有表達，但平均表達均小于20%，而且陽性率也非常低。見表1。

表1　32例APL流式細胞術檢測免疫表型(%)

3討論

FAB形態學分型是應用范圍最廣泛和使用時間最長的白血病分型及診斷方法，但對僅憑細胞形態而不做細胞化學染色的實驗室而言，相關疾病的誤診率是很高的[1]，然而細胞形態學觀察和細胞化學方法檢測對細胞的識別受檢驗者的經驗影響和主觀性強，加上白血病細胞自身的多態性和異質性，23%～36%的急性白血病難以得到準確診斷，用流式細胞術進行白血病免疫分型是根據白血病細胞表達的系列抗原，來確定白血病細胞的來源以及分化程度，提高了白血病診斷的準確性、客觀性和可重復性[2]，能夠客觀地反映白血病細胞的來源及分化發育階段，可以準確地鑒別急性白血病的類型，結合形態學分析，能夠使診斷白血病的準確率提高到90%～99%[3]，APL細胞群因其胞漿顆粒較多,在CD45/SSC雙參數設門的散點圖上表現為較高的SSC和CD45中等強度表達,根據這個特點一般比較容易把早幼粒細胞群圈出來。當細胞分化至早幼粒細胞階段, 其早期抗原CD34和HLA-DR表達下調,變為陰性,因此APL免疫表型多為HLA-DR-/CD34-，所以CD34陰性和HLA-DR陰性是診斷APL的理想指標，但表1顯示分別有75.0%、84.4%的陰性率和25.0%、15.6%的陽性率，高于Wetzler等[4]認為的HLA-DR-的AML中APL和非APL數量大致相同這一結論，從32例APL流式細胞術檢測免疫表型結果中還發現cCMPO雖然是髓系細胞一線標記，但仍有10.8%的陰性率, 國內也有顆粒稀少且髓系過氧化物酶染色缺乏的M3v的報道[5～7]POX染色弱陽性，免疫分型：cCMPO-/±、CD13+、CD33+；從表1還可以發現APL髓系標記CD33陽性率100%，CD13陽性率84.4%，非常符合相關文獻報道。由此可見，對于診斷APL，尤其像M3V這樣特殊類型的白血病，要結合細胞形態、細胞化學特殊染色、染色體及免疫分型綜合分析，才能做出準確診斷，雖然免疫表型不是診斷APL的獨立指標, 但可以為APL的快速鑒別與診斷提供依據,由于抗原的系列特異性不是絕對的，在白血病細胞膜上，抗原的交叉表達或缺失現象很常見，已發現越來越多共表達和表達紊亂等現象，即某一細胞系列的急性白血病共表達另一細胞系列抗原[8]。在急性白血病中多抗原的交叉表達是常見和困擾白血病分型診斷中的一個亮點，32例APL免疫表型中有1例表達CD7，有2例表達CD10、CD19，出現伴隨或交叉表達現象，臨床意義和診斷價值有待于我們進一步研究。

參考文獻

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(編輯羽飛)

收稿日期2015-01-21

中圖分類號：R733.7

文獻標識碼：B

文章編號：1001-7585(2015)10-1369-02