紫雪丹的質(zhì)量控制

戴蘭

鹽城市亭湖區(qū)人民醫(yī)院，鹽城 224000

紫雪丹的質(zhì)量控制

戴蘭

鹽城市亭湖區(qū)人民醫(yī)院，鹽城 224000

目的：建立紫雪丹的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜法對(duì)甘草、木香進(jìn)行定性鑒別；采用氣相色譜法對(duì)龍腦進(jìn)行含量測定。結(jié)果：定性鑒別陰性無干擾，分離度高；龍腦在100 μg· mL-1～800 μg·mL-1（r=0.9996）范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，加樣回收率為100.79%，RSD為2.5%（n=6）。結(jié)論：方法可用于紫雪丹的質(zhì)量控制。

紫雪丹；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層色譜法；氣相色譜法

紫雪丹見于《太平惠民和劑局方》卷六，又稱紫雪，紫雪散，言此藥如法制成之后，其色呈紫；其性大寒，清熱解毒之方，猶如霜雪之性，從而稱之曰“紫雪丹”[1]。紫雪丹由石膏、羚羊角、寒水石、冰片、甘草、木香等10味中藥組成，具有清熱解毒、鎮(zhèn)痙熄風(fēng)、開竅定驚的功效，臨床上主要用于治療溫?zé)岵。绺邿釤┰辍⒖诳蚀浇埂⒛虺啾汩]及小兒熱盛驚厥等。該制劑原先質(zhì)量控制中只有性狀檢驗(yàn)，無定性定量指標(biāo)，在質(zhì)量控制方面存在局限性。本文增設(shè)了2項(xiàng)薄層色譜法（TLC）鑒別，并且采用氣相色譜（GC）法對(duì)方中揮發(fā)性成分龍腦進(jìn)行了含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津GC-14B氣相色譜儀，島津FID檢測器，浙江大學(xué)N2000色譜工作站。

1.2 試藥

紫雪丹：廣西梧州制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)：110912X、110925X、111011X；龍腦對(duì)照品：中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號(hào)：110881；水楊酸甲酯為分析純；其他試劑為分析純。

甘草、木香購于鹽城一中藥房。

2 方法與結(jié)果

2.1 甘草的TLC鑒別

2.1.1 供試品溶液的制備 取紫雪丹3.5 g（批號(hào)：110912X、110925X、111011X），加乙醚40 mL，加熱回流1 h，濾過棄去醚液；藥渣加甲醇30 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用正丁醇提取3次，合并醇液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。

陡河水庫壩基下砂層頂部埋藏深度為5～10m，建庫前所作的標(biāo)準(zhǔn)貫入試驗(yàn)擊數(shù)為10～20擊，相應(yīng)的相對(duì)密度Dr為0.6～0.75，其密實(shí)度屬中密上限或密實(shí)下限。遇到9～10度地震，仍將發(fā)生液化。對(duì)建庫時(shí)與震后修復(fù)后在壩基砂層所作的標(biāo)準(zhǔn)貫入試驗(yàn)成果進(jìn)行比對(duì)，壩基砂層密實(shí)度有了顯著的提高。

2.1.2 陰性供試品溶液制備 按處方配比取各味藥（缺甘草），按供試品溶液制備方法制成陰性供試品溶液。

2.1.3 對(duì)照藥材溶液的制備 取甘草藥材0.2 g，同法制成甘草對(duì)照藥材溶液。

2.1.4 定性鑒別 照薄層色譜法 《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)[2]。吸取供試品溶液、甘草對(duì)照藥材溶液和陰性供試品溶液各2～3 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（30∶10∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，經(jīng)105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。供試品色譜中，在與甘草對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的黃色斑點(diǎn)，見圖1。陰性供試品在相應(yīng)位置上無黃色斑點(diǎn)。

圖1 甘草的薄層圖

2.2 木香的TLC鑒別

2.2.1 供試品溶液的制備 取紫雪丹2 g（批號(hào)：110912X、110925X、111011X），加甲醇10 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液作為供試品溶液。

2.2.2 陰性供試品溶液制備 按處方配比取各味藥（缺木香），按供試品溶液制備方法制成陰性供試品溶液。

2.2.4 定性鑒別 照薄層色譜法 《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB[3]）試驗(yàn)。吸取供試品溶液、木香對(duì)照藥材溶液和陰性供試品溶液各4～6 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-環(huán)己烷-乙酸乙酯（6∶6∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，經(jīng)105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。供試品色譜中，在與木香對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性供試品在相應(yīng)位置上無斑點(diǎn)。見圖2。

圖2 木香的薄層圖

2.3 龍腦含量測定

2.3.1 色譜條件 色譜柱：固定液為50%苯基甲基聚硅氧烷（DB-17）的彈性石英毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm，0.5 μm）；程序升溫：90℃，保持3 min，10℃/min升溫至110℃，保持4 min；進(jìn)樣口溫度：200℃；檢測器溫度：250℃；RANGE：0；進(jìn)樣量：1 μL；分流比20∶1。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 按照 《中國藥典》2010年版一部冰片項(xiàng)下，選擇水楊酸甲酯作為內(nèi)標(biāo)，結(jié)果內(nèi)標(biāo)峰和龍腦峰分離度在1.5以上，分離良好。

理論板數(shù)按龍腦峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。

2.3.3 供試品溶液的制備 取紫雪丹粉末0.1 g，精密稱定，加甲醇10 mL，超聲處理30 min，放冷，濾過，濾液置20 mL量瓶中，用少量甲醇分次洗滌容器和殘?jiān)匆簽V入同一量瓶中，加入內(nèi)標(biāo)溶液2 mL，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，即得。

2.3.4 陰性對(duì)照溶液的制備 按處方配比取相當(dāng)于測定量5倍的藥材（缺冰片），照工藝制備成模擬制劑，按“2.3.3”項(xiàng)下制成陰性對(duì)照溶液。

2.3.5 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取陰性對(duì)照溶液、對(duì)照品溶液和供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣。結(jié)果表明，陰性對(duì)照溶液對(duì)樣品中龍腦的測定無干擾。見圖3。

圖3 龍腦專屬性試驗(yàn)GC色譜圖

2.3.6 線性關(guān)系考察

儲(chǔ)備溶液的制備：取龍腦對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液。

內(nèi)標(biāo)溶液的制備：取水楊酸甲酯適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含4.5 mg的溶液。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密吸取儲(chǔ)備液0.5、1.0、2.0、4.0、6.0 mL分別置10 mL量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液2.0 mL，加甲醇至刻度，搖勻，制成濃度為50.0、100.0、200.0、400.0、600.0 μg·mL-1的對(duì)照品溶液。分別取1 μL注入氣相色譜儀，照上述色譜條件測定，記錄色譜圖，得到龍腦峰與內(nèi)標(biāo)峰峰面積比值分別為0.124、0.261、0.654、1.308、2.060，以龍腦量與內(nèi)標(biāo)量比值X為橫坐標(biāo)，龍腦與內(nèi)標(biāo)峰面積比值Y為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸，方程為：Y=1.5815X-0.0694，r= 0.9996（n=5）。龍腦對(duì)照品在100 μg·mL-1～800 μg· mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖4。

圖4 龍腦標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.3.7 精密度考察 精密吸取對(duì)照品溶液（200 μg· mL-1）1 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，考察其精密度，龍腦和內(nèi)標(biāo)峰峰面積比值的RSD為0.8%。表明精密度良好。

2.3.8 穩(wěn)定性考察 取供試品溶液分別于0、2、4、6、8 h進(jìn)行測定，龍腦峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積比值的RSD為1.8%。表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.9 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品6份 （批號(hào)：110912X），按“2.3.3”項(xiàng)下制備成供試品溶液，進(jìn)行測定，龍腦含量的RSD為2.4%，表明方法可行，重現(xiàn)性好。

2.3.10 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的同一批樣品6份（批號(hào)：110912X，含量：681.2 μg·g-1），精密加入對(duì)照品適量，配成中間濃度溶液，其余操作按“供試品溶液的制備”，平行6份，計(jì)算加樣回收率。平均回收率為100.79%，RSD為2.5%。見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2．3.11 樣品測定 取不同批號(hào)制劑，制備成供試品溶液，在上述色譜條件下以外標(biāo)法測定龍腦的含量，結(jié)果見表2。

表2 各批樣品龍腦含量測定結(jié)果（g·g-1）

3 討 論

紫雪丹歷史悠久，君藥石膏、寒水石為礦物藥，《中國藥典》無定性標(biāo)準(zhǔn)。羚羊角為動(dòng)物藥，也沒有相關(guān)定性、定量標(biāo)準(zhǔn)。查閱文獻(xiàn)未見有關(guān)紫雪丹質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)及定性定量方面的文獻(xiàn)。因此在制定該質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，選擇了臣藥甘草、木香進(jìn)行定性鑒別，選擇了臣藥冰片中的龍腦作為含量測定的對(duì)象。龍腦為易揮發(fā)物質(zhì)，常溫下不穩(wěn)定，生產(chǎn)過程中易損失，因此，龍腦的含量對(duì)于紫雪丹質(zhì)量穩(wěn)定性具有十分重要意義。采用氣相色譜法測定紫雪丹中龍腦含量重現(xiàn)性好、雜質(zhì)對(duì)分離無干擾，可為紫雪丹的質(zhì)量控制提供可行的方法。

木香薄層色譜展開條件參照 《中國藥典》2010年版一部木香[3]項(xiàng)下，以環(huán)己烷-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果發(fā)現(xiàn)木香的幾個(gè)斑點(diǎn)比移值較小。對(duì)展開劑進(jìn)行改進(jìn)，以三氯甲烷-環(huán)己烷-乙酸乙酯 （6∶6∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，Rf值達(dá)標(biāo)。

龍腦的含量測定文獻(xiàn)中多采用超聲處理的提取方法[4-5]，考慮到龍腦的揮發(fā)性，不宜采用加熱、煎煮等劇烈的提取方法，所以本實(shí)驗(yàn)采用超聲提取。分別考察了三種提取溶解：乙酸乙酯、乙醇、甲醇各10 mL，密塞，超聲處理30 min。結(jié)果表明，三者提取效率相差不大，但是由于甲醇在FID檢測器上響應(yīng)最小，為避免溶劑影響，選用甲醇作為樣品提取溶劑。分別超聲處理10、20、30、40 min，結(jié)果表明10 min和20 min提取不完全，30 min和40 min提取較完全且提取效率相當(dāng)，故采用超聲處理30 min的方法進(jìn)行提取。

[1] 何河內(nèi).從紫雪丹談成藥的標(biāo)準(zhǔn)化 [J].中醫(yī)雜志，1994，35（5）：303-4.

[2] 國家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國藥典[S]：一部，北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：一部附錄ⅥB.

[3] 國家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國藥典[S]：一部，北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：57.

[4] 鄒吉利，徐 彬，吳金虎，等.燒傷愈合膏龍腦與異龍腦的含量測定[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2014，33（7）：944-6.

[5] 趙 磊，邵大志，譚洪泉，等.氣相色譜法同時(shí)測定小兒雙清顆粒中薄荷腦、龍腦 [J].中國藥師，2013，35（7）：1470-2.

Quality Standard for Zixue Dan

DAI Lan
The Lake District People's Hospital of Yancheng City Pavilion,Yancheng 224000

Objective:To establish the quality standard for Zixue dan.Methods:Glycyrrhizae Radix et Rhizoma and Aucklandiae Radix were identified by TLC.The content of borneol was determined by GC.Results:The qualitative identification was with high resolution and without interference from the negative substances.The linear range of borneol was 100 μg·mL-1～800 μg·mL-1(r=0.9996)and the recovery was 100.79%(RSD=2.5%,n=6).Conclusion:The method can be used in the quality control of Zixue dan.

Zixue dan;Quality standard;TLC;GC

R927.1

A

1673-7806（2015）01-042-03

戴蘭，女，主管藥師 E-mail:2689026243@qq.com

2014-10-12

2014-12-15