生肌玉紅膏對深Ⅱ度燒傷模型大鼠創面成纖維細胞及血液循環影響的實驗研究

于博 董小鵬

·臨床研究·

生肌玉紅膏對深Ⅱ度燒傷模型大鼠創面成纖維細胞及血液循環影響的實驗研究

于博1董小鵬2

目的探討生肌玉紅膏對深Ⅱ度燒傷模型大鼠創面成纖維細胞及血液循環的影響。方法96只大鼠被隨機分為3組（A組、B組、C組），每組各32只，A、B組均制成深II度燒傷動物模型，A組傷后均給予生肌玉紅膏換藥，B組給予凡士林換藥，C組為正常對照組，比較3組大鼠燒傷后不同時間點（7 d、14 d、21 d、28 d）成纖維細胞增殖指數與成纖維細胞數量、創面微血管數等相關指標的變化差異。結果A、B組大鼠燒傷換藥后不同時間點A、B組成纖維細胞增殖指數升高、成纖維細胞數量增多、新生微血管數量增加，A組變化更為明顯（P ＜0．05）。結論生肌玉紅膏對深Ⅱ度燒傷模型大鼠創面成纖維細胞的增殖及血液循環重建有明顯促進作用。

生肌玉紅膏；深Ⅱ度燒傷；大鼠；成纖維細胞；血液循環

本實驗旨為驗證、探索生肌玉紅膏的臨床療效與作用機制，采用大鼠深Ⅱ度燒傷動物模型，用以觀察生肌玉紅膏對燒傷創面的成纖維細胞及血液循環的影響，以期為臨床用藥提供更為充分的實驗依據，報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 藥物與試劑 （1）生肌玉紅膏：由甘肅中醫學院附屬醫院藥劑科提供；（2）白凡士林膏：南昌白云藥業有限公司生產；（3）生理鹽水，為自行配制；（4）RPMI1640細胞培養液，由Gibico公司生產；（5）胎牛血清，由Gibico公司生產；（6）40 ml/kg復方乳酸鈉林格氏液，為自行配制；（7）戊巴比妥鈉，為美國Sigma公司生產。

1.1.2 實驗動物 選取健康清潔級成年SD大鼠96只，雌雄各48只，體質量為（225.6±17.0）g，混合飼料單籠飼養。

1.1.3 器材 千分之一電子天平、生化培養箱、流式細胞儀、酒精燈、玻璃瓶、石棉網、鐵架臺等，均由天津市生物科技有限公司提供。

1.2 方法

1.2.1 動物模型建立與換藥 A、B組大鼠均制成深II度燒傷動物模型，制作方法如下：剃刀剃去背毛，腹腔內給予3%戊巴比妥鈉（0.15 ml/100 g）進行麻醉，其后以玻璃瓶裝適量的蒸餾水放在墊有石棉網的鐵架臺之上，下方以酒精燈加熱煮沸，玻璃瓶蓋上預開1.5 cm×1.5 cm口，麻醉后大鼠脫毛部位放在玻璃瓶蓋開口處緊貼燙8 s（以秒表計時），制成深Ⅱ度燒傷模型（均用病理切片染色診斷證實），再向大鼠腹腔注射40 ml/kg的復方乳酸鈉林格氏液。A組傷處涂以生肌玉紅膏，B組涂以白凡士林膏，換藥1次/天，連續28天。

1.2.2 成纖維細胞原代培養 用RPMI1640細胞培養液、胎牛血清配成20%胎牛血清完全培養液，參照朱旭東[1]研究的方法以組織塊法行成纖維細胞原代培養，再選取第4～8代細胞進行實驗研究。

1.2.3 微血管數測定 造模后7 d、14 d、21 d、28 d分別取創面中心肉芽組織，進行石蠟固定，肉芽組織平行方向連續切片，進行CD34免疫組化法標記毛細血管，取切片中心及周圍隨機5個視野，采用MPAIS200彩色病理圖文分析系統進行計數。

1.2.4 成纖維細胞數量測定 用5 g/L的胰酶對成纖維細胞進行消化1 min，將其制備成為單細胞懸液，控制其細胞濃度在3.5×104個/ml，使用96孔板接種（每孔7 000個），再用50 ml/L CO2孵育至細胞貼壁伸展，之后換條件培養液，取一板細胞再孵育4 h后將上清液棄置，每孔加200μl二甲基亞砜振蕩10 min，再在570 nm 波長處測得吸光度A值（A570值），以此值作為成纖維細胞數量的評價指標，值越高表明成纖維細胞數量越多。

1.2.5 成纖維細胞增殖指數測定 細胞懸液制作、培養同上述步驟，孵育后分別在不同時間點收集細胞離心并用750 ml/L乙醇進行懸浮，再加入碘化丙啶直到終質量濃度為50 ng/ml，避光染色10 min后用流式細胞儀進行細胞增殖指數（prolif erative index，PI）的檢測，此數值越高表明成纖維細胞增殖越活躍。

1.3 統計學方法

采用SPSS 19.0軟件對數據進行分析處理，計量資料以（均數±標準差）表示，采用t檢驗，以P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

A、B組大鼠燒傷換藥后不同時間點A、B組成纖維細胞增殖指數升高、成纖維細胞數量增多、新生微血管數量增加，A組變化更為明顯（P＜0.05）。詳見表1～表3。

表1 三組大鼠造模后不同時間新生微血管數指標變化（n=32，±s，條）

表1 三組大鼠造模后不同時間新生微血管數指標變化（n=32，±s，條）

注：與A組比較，＊P＜0.05

組別 7 d 1 4 d 2 1 d 2 8 d A 1 5 . 0 1 ± 1 . 4 2 2 0 . 0 6 ± 1 . 6 1 2 3 . 3 5 ± 2 . 4 3 2 4 . 8 2 ± 2 . 6 5 B 8 . 7 5 ± 1 . 2 2 ＊ 9 . 3 7 ± 1 . 3 3 ＊ 1 0 . 5 4 ± 1 . 0 9 ＊ 1 1 . 2 5 ± 1 . 5 2 ＊C 0 ＊ 0 ＊ 0 ＊ 0 ＊

表2 三組大鼠造模后不同時間PI值的變化（n=32，±s，%）

表2 三組大鼠造模后不同時間PI值的變化（n=32，±s，%）

組別 7 d 14 d 21 d 28 d A 29.31±0.71 31.28±0.53 31.82±1.25 32.62±0.71 B 26.12±1.21＊ 27.53±1.12＊ 27.72±0.83＊ 27.20±1.11＊C 25.91±1.35＊ 27.28±0.70＊ 27.02±1.58＊ 26.85±0.81＊

表3 三組大鼠造模后不同時間A570值的變化（n=32，±s）

表3 三組大鼠造模后不同時間A570值的變化（n=32，±s）

組別 7 d 14 d 21 d 28 d A 0.34±0.01 0.36±0.02 0.38±0.02 0.37±0.03 B 0.31±0.02＊ 0.32±0.01＊ 0.32±0.03＊ 0.33±0.036＊C 0.28±0.03＊ 0.30±0.02＊ 0.31±0.05＊ 0.32±0.02＊

3 討論

局部良好的血供對于燒傷創面預后的改善能起到關鍵性的作用，實踐證明通過改善創傷局部微循環，從而促進創面愈合，是臨床行之有效的方法之一[2]。成纖維細胞為構成疏松結締組織的主要細胞，具有功能活動旺盛的特點，細胞內具有明顯的蛋白質合成及分泌等活動，其可在一定條件下實現與纖維細胞互相轉化，對于燒傷導致的不同程度的細胞變性、壞死及組織缺損修復都有著十分重要的作用[3-5]。

生肌玉紅膏原載于明代陳實功《外科正宗》，其主要藥物包含當歸、白芷、紫草、血竭、甘草、輕粉等，為中醫外科常用收斂藥[6-8]。本研究通過建立深Ⅱ度燒傷大鼠模型，旨在分析生肌玉紅膏對深Ⅱ度燒傷模型大鼠創面成纖維細胞及血液循環的影響。研究結果表明，大鼠燒傷換藥后不同時間點A、B組成纖維細胞增殖指數升高、成纖維細胞數量增多、新生微血管數量增加，A組變化更為明顯，證明生肌玉紅膏對深Ⅱ度燒傷模型大鼠創面成纖維細胞的增殖及血液循環重建有明顯促進作用，值得臨床參考借鑒。

[1]朱旭東，張艷，陳榮德． 肉芽組織修復細胞的簡易培養方法[J]．中國修復重建外科雜志，1994，8（3）：157．

[2]胡旭明． 深Ⅱ度燒傷創面處理方法的回顧及改善創面微循環的初步臨床研究[J]． 現代診斷與治療，2014，25（8）：1838-1839．

[3]胡剛，馮捷，金巖，等． 人循環成纖維細胞參與皮膚創傷修復的作用[C]// 2010全國中西醫結合皮膚性病學術會議論文匯編．2010全國中西醫結合皮膚性病學術會議． 上海：中國中西醫結合學會皮膚性病專業委員會，2010．

[4]靳波，徐盈斌，劉旭盛． 酸性成纖維細胞生長因子生物學特性及其應用研究進展[J]． 中華損傷與修復雜志：電子版，2010，5（1）：55-57．

[5]于天水，凌躍，官大威． 肌成纖維細胞的研究進展及其法醫學應用[J]． 法醫學雜志，2013，29（2）：140-143．

[6]李剛． 生肌玉紅膏臨床應用及實驗研究進展[J]． 時珍國醫國藥，2011，22（8）：1950-1952．

[7]李永剛，高衛衛，姚昶． 生肌玉紅明膠海綿對機械性大鼠創面微循環影響的實驗研究[J]．江蘇中醫藥，2010，42（12）：71-73．

[8]樊玲麗，曹魯梅，韓曉玲，等．生肌玉紅明膠海綿治療Ⅲ期壓瘡療效觀察[J]．護理研究，2013，27（21）：2231-2232．

The Influence of Ointment of Shengji Yuhong to Fibroblast and Blood Circulation of Deep II-degree Burn Rats’ Model

YU Bo1DONG Xiaopeng21 Department of General Surgery, The Affiliated Hospital of Gansu University of Traditional Chinese Medicine, Lanzhou Gansu 730000, China, 2 School of Clinical Medicine, Gansu University of Traditional Chinese Medicine, Lanzhou Gansu 730000, China

ObjectiveTo explore the efect of ointment of Shengji Yuhong to fibroblast and blood circulation of deep II-degree burn rats’ model.Methods96 rats were randomly divided into three groups (A group, B group, C group) for 32 rats. A group and B group was taken with deep II-degree burn rats’ model. A group was taken ointment of Shengji Yuhong, B group for vaseline. C group was control group. The proliferation index of fbroblast, the numbers of fbroblast and the number of micrangium in 7 d, 14 d, 21 d and 28 d were compared.ResultsIn A group and B group, the proliferation index of fbroblast, the numbers of fbroblast and the number of micrangium increased. The more remarkable change was in A group (P＜0.05).ConclusionOintment of Shengji Yuhong can obviously promote the fibroblast proliferation and blood supply reconstruction for deep II-degree burn rats.

Ointment of Shengji Yuhong, Deep II-degree burn, Rats, Fibroblast, Blood circulation

R285．5

A

1674-9308（2016）35-0155-02

10．3969/j．issn．1674-9308．2016．35．086

國家自然科學基金項目（81260543）

1 甘肅中醫藥大學附屬醫院普外科，甘肅 蘭州 730000；2甘肅中醫藥大學臨床醫學院，甘肅 蘭州 730000