家族性高膽固醇血癥致病基因PCSK9的研究進展

顏　麗，楊蘭生(綜述)，何津春，車團結(審校)

(1.蘭州大學 a.第一臨床醫學院，b.生命科學學院，蘭州730000； 2.蘭州大學第一醫院 a.病理科，b.醫學檢驗中心，蘭州730000)

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家族性高膽固醇血癥致病基因PCSK9的研究進展

顏麗1a△，楊蘭生2a(綜述)，何津春1a,2b※，車團結1b(審校)

(1.蘭州大學 a.第一臨床醫學院，b.生命科學學院，蘭州730000； 2.蘭州大學第一醫院 a.病理科，b.醫學檢驗中心，蘭州730000)

摘要：家族性高膽固醇血癥(FH)是一種常染色體單基因顯性遺傳性疾病，其主要的臨床特征為血漿低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平明顯升高、肌腱或皮膚黃色瘤、早發冠狀動脈粥樣硬化和冠狀動脈粥樣硬化性心臟病等。人類枯草溶菌素轉化酶9(PCSK9)基因是FH的致病基因之一。PCSK9 通過調節低密度脂蛋白受體在肝臟降解，從而間接調節LDL-C水平。PCSK9基因突變可分為失功能性突變和功能獲得性突變，是目前降脂藥物的研究熱點。

關鍵詞：家族性高膽固醇血癥；人類枯草溶菌素轉化酶9；低密度脂蛋白受體；低密度脂蛋白膽固醇

家族性高膽固醇血癥(familial hypercholesterolemia,FH)純合子發病率為1/100萬，患者在兒童時期便可發生心血管疾病，如不治療大多數在30歲之前去世；雜合子發病率為1/500，患者癥狀較輕，心血管疾病發病年齡一般可延遲到40～50歲[1-2]。FH主要的致病基因為低密度脂蛋白受體(low density lipoprotein receptor，LDLR)，但仍有20%～35%為其他基因突變導致[3]，如載脂蛋白B100基因、人類枯草溶菌素轉化酶9(proprotein convertase subtilin/kexin type 9,PCSK9)基因等。現就PCSK9的生物學功能、基因結構及PCSK9基因突變與血脂異常及臨床疾病相關性的研究進展予以綜述。

1PCSK9的基因結構與生物學功能

PCSK9基因位于人類染色體1p32,約22 kb,其中含有12個外顯子，編碼含692個氨基酸的糖蛋白。該糖蛋白又稱為神經凋亡調節轉化酶1，屬于前蛋白轉化酶家族，是絲氨酸蛋白酶K亞類的獨特前蛋白轉化酶，其結構主要由信號肽、前體肽、催化區域和富含半胱氨酸組氨酸的C端構成[4]，主要表達于肝臟，其次為小腸、腎臟和腦[5]。PCSK9主要合成于內質網中，在內質網中首先形成一個大小為74 000的前體蛋白，并以一過性可溶性酶原的形式存在，然后在第152位氨基酸殘基處進行自身催化裂解，在其N端釋放14 000的前肽，最終形成大小為60 000含540個氨基酸的成熟蛋白，經轉運到達高爾基體進行乙酰化等修飾后分泌并儲存在血漿中[6-9]。

LDLR分子的表皮生長因子前體同源域由表皮生長因子樣重復序列(表皮生長因子A、B、C)構成。正常情況下，血漿PCSK9在肝細胞表面通過富含半胱氨酸、組氨酸的C端與LDLR富含半胱氨酸的表皮生長因子A區域結合，通過細胞內吞作用進入細胞的核內體，在核內體的酸性環境中(pH為5～6)，PCSK9與LDLR之間的親和力增強，約為pH 7.0時的50倍，兩者結合更加牢固[10-13]。然后，PCSK9護送LDLR到達溶酶體進行降解，通過減少細胞表面LDLR從而間接調節低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)水平。PCSK9基因過表達可增加肝臟對LDLR基因轉錄之后的降解作用，調節LDLR轉錄后水平，使機體通過LDLR清除膽固醇的作用減弱，導致血漿LDL-C水平升高,從而引起動脈粥樣硬化及心血管疾病[11]。

2PCSK9與血脂代謝異常

PCSK9是FH致病基因之一，當PCSK9基因發生突變時則可導致血脂水平異常，尤其是LDL-C水平。截止2011年2月，英國FH基因突變數據庫(http://www.ucl.ac.uk/ldlr/)的數據顯示，已發現的PCSK9突變數達163種，其中特殊突變為101種。

根據PCSK9基因突變對LDL-C水平影響不同，PCSK9基因突變可分為失功能性突變和功能獲得性突變(圖1)[14]。

PCSK9：人類枯草溶菌素轉化酶9;LDL-C:低密度脂蛋白膽固醇；圖中所示為PCSK9的4個結構域：信號肽(SP)、前體肽(PRO-DOMAIN)、催化區域(CATALYTIC DOMAIN)和C端(C-TERMINAL DOMAIN)，↑所指的為功能獲得性突變，↓所指的為失功能性突變

圖1PCSK9常見基因突變

2.1失功能性突變PCSK9基因失功能性突變主要導致PCSK9合成、自身催化裂解、成熟和分泌障礙，使其在血漿中的水平降低，對肝細胞表面LDLR降解減少，機體攝取并降解血漿LDL-C的作用增強，最終引起膽固醇降低。常見的失功能性突變有R46L、Y142X、L253F、C679X等。

研究顯示，在細胞內PCSK9的Y142X突變可抑制其合成，L253F突變可抑制其自身催化裂解，而C679X突變則可抑制蛋白的正常折疊，最終結果為抑制PCSK9從細胞內分泌出來，從而影響PCSK9的功能，使血漿中總膽固醇(total cholesterol,TC)、LDL-C水平降低[15]。Cohen等[16]研究顯示，C679X和Y142X突變可使LDL-C水平降低28%，冠心病發病危險降低88%，R46L突變可使LDL-C水平降低15%，冠心病發病危險降低47%。在之后的報道中也證實了R46L突變與LDL-C呈負相關，其主要機制可能是PCSK9與LDLR之間的親和力降低[17-18]。

PCSK9基因突變存在種族差異。研究發現，在加拿大白種人中，發生在信號肽的L10Ins突變和前體肽的A53V突變相關，引起連鎖不平衡，失功能性突變L10InsA53V的基因頻率較高并伴有低LDL-C水平，然而此現象在非裔加拿大人中并不存在[18]。Cohen等[16]的研究顯示，在3363名美國黑人中檢測到無義突變Y142X和C679X，分別占1.8%和0.8%，而在9537例美國白人中分別只有2例和4例檢測到上述突變，同樣，在美國白人中有3.2%檢測到序列突變R46L，而在美國黑人中只有0.6%檢測到該突變。

2.2功能獲得性突變PCSK9功能獲得性突變導致PCSK9對LDLR的降解作用增加，細胞表面LDLR數量減少，機體對LDL的攝取不足，血漿LDL-C水平升高，最終導致高膽固醇血癥，進而引發心血管疾病。常見的功能獲得性突變有D374Y、S127R、D129G、E670G等。

其中，D374Y突變是一種較為嚴重的突變形式，與野生型相比，D374Y突變可使PCSK9與LDLR之間的親和力升高25倍[19]，從而減少細胞表面LDLR數量，使其升高血清膽固醇水平的能力更強，形成粥樣斑塊更廣泛[20]。研究顯示，功能獲得性突變S127R和D129G可使PCSK9自動催化裂解功能以及分泌功能減弱，但與這兩種功能均正常的A168E突變相比，S127R和D129G能更明顯降低LDLR的表達以及LDL與細胞結合能力，因此提示PCSK9介導的LDLR抑制作用可能不需要其催化裂解及分泌，而直接在細胞內發揮作用[21]。

Futema等[22]對FH患者LDLR/載脂蛋白B/PCSK9基因進行全外顯子測序，通過全基因組關聯研究分析，在檢測出有基因突變的英國患者中，約1.7%為PCSK9基因功能獲得性突變。2007年我國首次報道，在FH患者中檢測發現PCSK9基因R306S錯義突變，可能與PCSK9功能增強進而導致LDLR 代謝異常并出現心血管系統早發動脈硬化有關[23]。在高膽固醇血癥患者PCSK9基因第6外顯子發現錯義突變D320N、V312F、R319E和框移突變934delGV312S，這些患者均有心血管疾病家族史，可見這幾種突變與TC、LDL-C升高密切相關，可能引起PCSK9功能增強，導致LDLR代謝異常，血漿膽固醇水平升高[24]。

國內研究表明，發生在PCSK9基因第12號外顯子的E670G突變可引起血清TC、LDL-C水平升高，同時E670G等位基因頻率在中國臺灣白褲瑤族和漢族之間存在種族差異，白褲瑤族人的G等位基因頻率低于漢族人[25-26]。Aung等[27]研究了飲酒后E670G多態性對血漿TC、LDL-C水平的影響，結果顯示，飲酒者與非飲酒者相比有較低的TC、LDL-C和載脂蛋白B水平，且飲酒對AA型基因的作用比AG型基因更大，使其TC水平較AG型更低。

3PCSK9與臨床疾病

高膽固醇水平可促進腫瘤細胞的生長和轉移[28-31]，PCSK9 失功能性突變可降低黑色素瘤在肝臟的轉移[32]，主要是由于這類突變可降低膽固醇水平、抑制腫瘤細胞的生長以及增強腫瘤壞死因子α介導的細胞凋亡。

促甲狀腺激素不僅可作用于甲狀腺，還可作用于其他器官，如促甲狀腺激素可上調肝臟3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶的表達，參與膽固醇的代謝[33]。Gagnon等[34]也發現在甲狀腺功能正常的機體內，促甲狀腺激素升高與血漿中PCSK9相關，兩者呈正相關，但在甲狀腺癌切除術聯合射頻消融治療的患者，給予人工甲狀腺刺激素急性升高促甲狀腺激素后，機體PCSK9水平并未有明顯改變，促甲狀腺激素是否可上調PCSK9仍有待進一步研究。

阿爾茨海默病，又叫老年性癡呆，是一種神經退行性疾病，引起這種疾病的一個重要因素是β淀粉樣蛋白肽過度生成和在大腦內的累積。PCSK9可能降解β淀粉樣前體蛋白裂解酶1，這種酶是生成β淀粉樣蛋白肽的關鍵酶，因此PCSK9 可通過這一途徑抑制神經元細胞的凋亡[35]。同時，氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)也是神經退行性疾病細胞凋亡的關鍵誘因之一，PCSK9基因表達與ox-LDL誘導的巨噬細胞和內皮細胞凋亡呈正相關，ox-LDL 可上調PCSK9，促進神經元細胞的凋亡[35-36]。PCSK9這種調節細胞凋亡的雙重性作用在阿爾茨海默病的發展中至關重要。PCSK9 siRNA也可通過Bcl/Bax-caspase9-caspase3途徑抑制ox-LDL誘導的人臍靜脈內皮細胞和巨噬細胞凋亡[36]。

4PCSK9與臨床降脂藥物治療

動物實驗顯示，小檗堿具有明顯的調節血糖、血脂代謝的作用[37]，可通過固醇調控元件結合蛋白2途徑增加PCSK9的表達[38]，升高血漿PCSK9水平，從而降低LDL-C水平。目前臨床常用的降脂藥物，如伊替米貝、血脂康、匹伐他汀均可使血中PCSK9水平明顯升高，且當伊替米貝和匹伐他汀聯合使用時PCSK9水平升高更顯著，這種升高往往優先于血脂的改變，限制了降脂藥物的作用[39]。對此，正在研發的PCSK9抑制劑單克隆抗體則可能解決這一問題，血脂異常患者使用PCSK9抑制劑效果可能更好。目前正在研究的PCSK9抑制劑——單克隆抗體Evolocumab是一種IgG2抗體，Ⅰ期及Ⅱ期臨床試驗均顯示Evolocumab可以明顯降低LDL-C水平[40-41]。Blom等[42]在Ⅲ期臨床試驗中證實這一結論的同時，提示對于接受高劑量他汀類藥物治療的患者，PCSK9抑制劑進一步上調LDLR的能力會降低，并且提示Evolocumab最常見的不良反應是鼻咽炎、上呼吸道感染、流感和背部疼痛等。

5問題與展望

雖然目前人們已進行了很多關于PCSK9的研究，對PCSK9 有了較多的了解，但仍有許多領域未被發現，需要進一步的探究。如PCSK9與多種臨床疾病(如腫瘤、阿爾茨海默病等)相關，但PCSK9基因突變與PCSK9表達水平、血脂異常、神經元細胞凋亡以及其他臨床疾病之間的聯系還不是很明確，需要進一步的研究和證實。同時，PCSK9參與膽固醇代謝，與LDLR的相互作用的具體機制還不明確，有待于更深層次的研究。PCSK9是FH的致病基因之一，可通過降解LDLR調節血漿膽固醇水平，是目前高膽固醇血癥治療藥物研究的重要靶點。但是，由于研究時間較短、PCSK9功能復雜，未能長期觀察PCSK9抑制劑對血漿PCSK9和脂質的影響，對其分子機制也有待進一步的研究和探討。

參考文獻

[1]Soutar AK,Naoumova RP.Mechanisms of disease:genetic causes of familial hyper cholesterolemia[J].Nat Clin Pract Cardiovasc Med,2007,4(4):214-225.

[2]Raal F,Panz V,Immelman A，etal.Elevated PCSK9 levels in untreated patients with heterozygous or homozygous familial hypercholesterolemia and the response to high-dose statin therapy[J].J Am Heart Assoc,2013,2(2):e000028.

[3]陳晨.家族性高膽固醇血癥(FH)致病基因的研究進展[J].復旦學報：醫學版,2012,39(2):207-211.

[4]Seidah NG,Benjannet S,Wickham L,etal.The secretory proprotein convertase neural apoptosis-regulated convertase 1(NARC-1):liver regeneration and neuronal differentiation[J].Proc Natl Acad Sci U S A,2003,100(3):928-933.

[5]Benjannet S,Rhainds D,Essalmani R,etal.NARC-1/PCSK9 and its natural mutants:zymogen cleavage and effects on the low density lipoprotein (LDL) receptor and LDL cholesterol[J].J Biol Chem,2004,279(47):48865-48875.

[6]Lagace TA,Curtis DE,Garuti R,etal.Secreted PCSK9 decreases the number of LDL receptors in hepatocytes and in livers of parabiotic mice[J].J Clin Invest,2006,116(11):2995-3005.

[7]Benjannet S,Rhainds D,Hamelin J,etal.The proprotein convertase (PC) PCSK9 is inactivated by furin and/or PC5/6A:functional consequences of natural mutations and post-translational modifications[J].J Biol Chem,2006,281(41):30561-30572.

[8]李文龍,裴衛東.人類枯草溶菌素轉化酶9基因影響膽固醇代謝的研究進展[J].基礎醫學與臨床,2008,28(6):629-632.

[9]Artenstein AW,Opal SM.Proprotein Convertases in Health and Disease[J].N Engl J Med,2011,365(26):2507-2518.

[10]Zhang DW,Lagace TA,Garuti R,etal.Binding of proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 to epidermal growth factor-like repeat A of low density lipoprotein receptor decreases receptor recycling and increases degradation[J].J Biol Chem,2007,282 (25):18602-18612.

[11]Nassoury N,Blasiole DA,Tebon Oler A,etal.The cellular trafficking of the secretory proprotein convertase PCSK9 and its dependence on the LDLR[J].Traffic,2007,8(6):718-732.

[12]Qian YW,Schmidt RJ,Zhang Y,etal.Secreted PCSK9 downregulates low density lipoprotein receptor through receptor-mediated endocytosis[J].J Lipid Res,2007,48 (7):1488-1498.

[13]Poirier S,Mayer G.The biology of PCSK9 from the endoplasmic reticulum to lysosomes:new and emerging therapeutics to control low-density lipoprotein cholesterol[J].Drug Des Devel Ther,2013,7:1135-1148.

[14]Al-Waili K,Al-Zidi WA,Al-Abri AR,etal.Mutation in the PCSK9 Gene in Omani Arab Subjects with Autosomal Dominant Hypercholesterolemia and its Effect on PCSK9 Protein Structure[J].Oman Med J,2013,28(1):48-52.

[15]Zhao Z,Tuakli-Wosornu Y,Lagace TA,etal.Molecular Characterization of Loss-of-Function Mutations in PCSK9 and Identification of a Compound Heterozygote[J].Am J Hum Genet,2006,79(3):514-523.

[16]Cohen JC,Boerwinkle E,Mosley TH Jr,etal.Sequence Variations in PCSK9,Low LDL,and Protection against Coronary Heart Disease[J].N Engl J Med,2006,354(12):1264-1272.

[17]Humphries SE,Neely RD,Whittall RA,etal.Healthy individuals carrying the PCSK9 p.R46L variant and familial hypercholesterolemia patients carrying PCSK9 p.D374Y exhibit lower plasma concentrations of PCSK9[J].Clin Chem,2009,55(12):2153-2161.

[18]Mayne J,Ooi TC,Raymond A,etal.Differential effects of PCSK9 loss of function variants on serum lipid and PCSK9 levels in Caucasian and African Canadian populations[J].Lipids Health Dis,2013,12:70.

[19]Kourimate S,Chétiveaux M,Jarnoux AL,etal.Cellular and secreted pro-protein convertase subtilisin/kexin type 9 catalytic activity in hepatocytes[J].Atherosclerosis,2009,206 (1):134-140.

[20]Herbert B,Patel D,Waddington SN,etal.Increased secretion of lipoproteins in transgenic mice expressing human D374Y PCSK9 under physiological genetic control[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol,2010,30 (7):1333-1339.

[21]Homer VM,Marais AD,Charlton F,etal.Identification and characterization of two non-secreted PCSK9 mutants associated with familial hypercholesterolemia in cohorts from New Zealand and South Africa[J].Atherosclerosis,2008,196 (2):659-666.

[22]Futema M,Plagnol V,Li K,etal.Whole exome sequencing of familial hypercholesterolaemia patients negative for LDLR/APOB/PCSK9 mutations[J].J Med Genet,2014,51(8):537-544.

[23]藺潔,王綠婭,夏軍輝.家族性高膽固醇血癥患者新的致病基因--PCSK9基因突變分析[J].中國動脈硬化雜志,2007,15(7):518.

[24]宋光耀,張明明,孫海娟,等.高膽固醇血癥患者枯草溶菌素轉化酶9基因突變研究[J].中國動脈硬化雜志,2012,20(8):731-735.

[25]Norata GD,Garlaschelli K,Grigore L,etal.Effects of PCSK9 variants on common carotid artery intima media thickness and relation to ApoE alleles[J].Atherosclerosis,2010,208(1):177-182.

[26]Aung LH,Yin RX,Miao L,etal.The proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 gene E670G polymorphism and serum lipid levels in the Guangxi Bai Ku Yao and Han populations[J].Lipids Health Dis,2011,10:5.

[27]Aung LH,Yin RX,Wu DF,etal.Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 gene E670G polymorphism interacts with alcohol consumption to modulate serum lipid levels[J].Int J Med Sci,2013,10(2):124-132.

[28]Thysell E,Surowiec I,H?rnberg E,etal.Metabolomic Characterization of Human Prostate Cancer Bone Metastases Reveals Increased Levels of Cholesterol[J].PLoS One,2010,5(12):e14175.

[29]Roy M,Kung HJ,Ghosh PM.Statins and prostate cancer:role of cholesterol inhibition vs.prevention of small GTP-binding proteins[J].Am J Cancer Res,2011,1(4):542-561.

[30]Sekine Y,Suzuki K,Remaley AT.HDL and sphingosine-1-phosphate activate stat3 in prostate cancer DU145 cells via ERK1/2 and S1P receptors,and promote cell migration and invasion[J].Prostate,2011,71(7):690-699.

[31]Alikhani N,Ferguson RD,Novosyadlyy R,etal.Mammary tumor growth and pulmonary metastasis are enhanced in a hyperlipidemic mouse model[J].Oncogene,2013,32 (8):961-967.

[32]Sun X,Essalmani R,Day R,etal.Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 deficiency reduces melanoma metastasis in liver[J].Neoplasia,2012,14 (12):1122-1131.

[33]Tian L,Song Y,Xing M,etal.A novel role for thyroid-stimulating hormone:up-regulation of hepatic 3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-coenzyme A reductase expression through the cyclic adenosine monophosphate/protein kinase A/cyclic adenosine monophosphate-responsive element binding protein pathway[J].Hepatology,2010,52(4):1401-1409.

[34]Gagnon A,Mahzari M,Lochnan HA,etal.Acute TSH stimulation in vivo does not alter serum PCSK9 levels[J].Thyroid Res,2014,7:4.

[35]Wu Q,Tang ZH,Peng J,etal.The dual behavior of PCSK9 in the regulation of apoptosis is crucial in Alzheimer′s disease progression (Review)[J].Biomed Rep,2014,2 (2):167-171.

[36]Wu CY,Tang ZH,Jiang L,etal.PCSK9 siRNA inhibits HUVEC apoptosis induced by ox-LDL via Bcl/Bax-caspase9-caspase3 pathway[J].Mol Cell Biochem,2012,359 (1/2):347-358.

[37]劉鴻雁,張冬梅,楊永建,等.鹽酸小檗堿對大鼠糖脂代謝的影響[J].蘭州大學學報:醫學版,2007,33(2):5-9.

[38]Jia YJ,Xu RX,Sun J,etal.Enhanced circulating PCSK9 concentration by berberine through SREBP-2 pathway in high fat diet-fed rats[J].J Transl Med,2014,12:103.

[39]Zhang Y,Liu J,Li S,etal.Impact of currently prescribed lipid-lowering drugs on plasma PCSK9 concentration:single or in combination study in rats[J].Lipids Health Dis,2014,13:35.

[40]Dias CS,Shaywitz AJ,Wasserman SM,etal.Effects of AMG 145 on low-density lipoprotein cholesterol levels:results from 2 randomized,double-blind,placebo-controlled,ascending-dose phase 1 studies in healthy volunteers and hypercholesterolemic subjects on statins[J].J Am Coll Cardiol，2012，60(19):1888-1898.

[41]Raal F,Scott R,Somaratne R,etal.Low-density lipoprotein cholesterol-lowering effects of AMG 145,a monoclonal antibody to proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 serine protease in patients with heterozygous familial hypercholesterolemia:the Reduction of LDL-C with PCSK9 Inhibition in Heterozygous Familial Hypercholesterolemia Disorder (RUTHERFORD) randomized trial[J].Circulation，2012，126(20):2408-2417.

[42]Blom DJ,Hala T,Bolognese M,etal.A 52-week placebo controlled trial of evolocumab in hyperlipidemia[J].N Engl J Med,2014,370(19):1809-1819.

Research Progress on the Virulence Genes of Familial Hypercholesterolemia:PCSK9YANLi1a,YANGLan-sheng2a,HEJin-chun1a,2b,CHETuan-jie1b.(1a.FirstSchoolofClinicalMedicine,1b.CollegeofLifeScience,LanzhouUniversity,Lanzhou730000,China; 2a.DepartmentofLaboratoryMedicine,2b.Departmentofpathology,theFirstHospitalofLanzhouUniversity,Lanzhou730000,China)

Abstract:Familial hypercholesterolemia(FH) is an autosomal monogenic dominant genetic disease,the main clinical features of which are significant plasma low-density lipoprotein cholesterol(LDL-C) levels increase,tendon or yellow skin tumor,early coronary atherosclerosis and coronary heart disease,etc.Proprotein convertase subtilin/kexin type 9(PCSK9) is one of the virulence genes of FH.PCSK9 regulates the LDL-C degradation in liver,thus indirectly regulates LDL-C level. PCSK9 gene mutation includes function losing mutation and function acquiring mutation,which is currently a hotspot of lipid-lowering drugs research.

Key words:Familial hypercholesterolemia; Proprotein convertase subtilin/kexin type 9; Low-density lipoprotein receptor; Low-density lipoprotein cholesterol

收稿日期：2015-01-04修回日期：2015-06-15編輯：伊姍

基金項目：國家科技攻關計劃(2002BA711A08-17)；教育部科技基礎平臺建設(505015)；甘肅省自然科學研究基金(1308RJZA218，1302FKDA034)；甘肅省科技廳課題(2011y0217)；甘肅省橫向課題(2012620111000212)；甘肅省戒毒管理局橫向課題(2014-02)

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.21.002

中圖分類號：R589.2

文獻標識碼：A

文章編號：1006-2084(2015)21-3844-04