survivin胞內定位表達在胸部腫瘤鑒別診斷中的意義

馬建梅　李雅莉　陳　承(西安醫學院臨床醫學院診斷學教研室，陜西　西安　70068)

survivin胞內定位表達在胸部腫瘤鑒別診斷中的意義

馬建梅李雅莉1陳承2
(西安醫學院臨床醫學院診斷學教研室，陜西西安710068)

〔摘要〕目的探討survivin胞內定位表達在胸部腫瘤鑒別診斷中的意義。方法免疫組化檢測肺癌、食管癌、乳腺癌標本(各50例)中survivin蛋白表達。結果①survivin在肺癌、食管癌、乳腺癌均為高表達。②survivin胞核表達率在肺癌、食管癌、乳腺癌無統計學差異(P＞0.05)。③survivin胞核表達率在不同分化的胸部腫瘤無統計學差異(P＞0.05)。④survivin胞核表達率在有淋巴結轉移的肺癌、食管癌、乳腺癌分別為64.7％、75％、21.4％，其在有淋巴結轉移的肺癌或食管癌與乳腺癌表達有統計學差異(P＜0.05)。⑤Kaplan-Meier生存分析:肺癌survivin胞核表達者生存率低于胞質表達者(P＜0.05)，食管癌、乳腺癌survivin胞核表達者生存率低于胞質表達者，但無統計學意義(P＞0.05)。結論①survivin及其胞核表達與胸部腫瘤的類別和分化程度無關。②survivin胞核表達與有淋巴結轉移的肺癌、食管癌關系密切，與有淋巴結轉移的乳腺癌關系不大。③survivin胞核或胞質表達與肺癌患者的預后有關。

〔關鍵詞〕survivin;肺癌;食管癌;乳腺癌;胞核;胞質

1西安交通大學第二醫院呼吸科2西安市第一醫院眼科

第一作者:馬建梅(1976-)，女，碩士，講師，主要從事肺癌的防治研究。

Expression of survivin intracellular localization in thoracic neoplasms and its clinical significance

MA Jian-Mei，LI Ya-Li，CHEN Cheng．
Department of Diagnosis，Xi＇an Medical University Clinical Medicine College，Xi＇an 710068，Shaanxi，China

【Abstract】Objective To study the expression of survivin intracellular localization in thoracic neoplasms and its significance．Methods The expression of survivin protein was examined by immunohistochemical staining in specimens(50 cases each) from lung and esophageal and breast cancer．The data was analyzed by SPSS13．0 software．Results①The expression rate of survivin was high in thoracic neoplasms．②The expression rate of survivin in nuclear was similar in lung and esophageal and breast cancer．③The expression rate of survivin in nuclear was similar in various differentiation degree of thoracic neoplasms．④The expression rate of survivin in nuclear was 64．7％，75％ and 21．4％ in lymph node metastasis of lung and esophageal and breast cancer，the data of lung or esophageal cancer was significantly different from breast cancer(P＜0．05)．⑤Kaplan-Meier survival analysis showed: survival rate of expression survivin in nuclear was lower than that of cytoplasm in lung cancer patients，the difference was significant (P＜0．05)．Survival rate of expression survivin in nuclear was lower than that of cytoplasm in esophageal and breast cancer patients，the difference was no significant (P＞0．05)．Conclusions①The expression of survivin in cell and nuclear has nothing to do with category and differentiation degree of thoracic neoplasms．②The expression of survivin in nuclear is closely related to lymph node metastasis of lung cancer and esophageal cancer，but there is little correlation between the expression of survivin in nuclear and lymph node metastasis of breast cancer．③The expression of survivin in nuclear or cytoplasm may be served as a prognostic indicator of lung cancer．

【Key words】Survivin; Lung cancer; Esophageal cancer; Breast cancer; Nucleus; Cytoplasm

全國腫瘤登記中心發布的《2012中國腫瘤登記年報》表明，我國近20年來癌癥呈現年輕化、發病率和死亡率走高的趨勢，每年新發腫瘤病例約312萬例。在我國，肺癌年發病率為35 /100 000，成為我國的第一大癌癥，已被衛生部列為癌癥防治的重中之重〔1〕;食管癌病死率占我國惡性腫瘤的第4位;乳腺癌發病率有逐年上升的趨勢，已成為婦女因癌癥死亡的第一位病因〔2〕。早期預測患病風險，及時有效干預，對腫瘤患者的生存至關重要。在腫瘤的發生發展過程中細胞增殖和凋亡失衡是重要因素，survivin就屬于凋亡抑制蛋白(IAP)家族，具有明顯的組織分布選擇特性及強大的抗凋亡作用，在絕大部分人類腫瘤中高表達，而在正常終末分化的成人組織或細胞中不表達。目前有關survivin在單一腫瘤表達的研究較多，而其細胞內定位及在解剖位置相近的腫瘤表達未引起重視，本實驗探討survivin及其細胞內定位表達與肺癌、食管癌、乳腺癌的關系。

1　材料與方法

1.1研究對象西安交通大學第二醫院2004年1月至2008 年5月手術獲得的肺癌、食管癌、乳腺癌標本各50例，所選病例均進行標準的手術切除;平均年齡61.5歲;分化程度為肺癌:高分化20例、中低分化30例，有淋巴結轉移27例、無淋巴結轉移23例;食管癌:高分化22例、中低分化28例，有淋巴結轉移26例、無淋巴結轉移24例;乳腺癌:高分化26例、中低分化24例，有淋巴結轉移22例、無淋巴結轉移28例，患者既往均無腫瘤病史，術前均未行包括放、化療在內的各種抗腫瘤治療。

1.2主要試劑即用型survivin兔抗人多克隆抗體購自福州邁新生物工程有限公司，PicTureTM二步法免疫組化試劑盒(PV-6000)、PBS緩沖液、枸櫞酸緩沖液、DAB顯色試劑盒購自北京中山生物技術工程有限公司。

1.3survivin的檢測組織標本均采用10％甲醛溶液固定、石蠟包埋，4 μm厚連續切片。免疫組化方法:①切片經二甲苯脫蠟，梯度乙醇返水;②用3％的H2O2孵育10 min以消除內源性過氧化物酶活性;③微波抗原修復(將切片置于0.01 mol/L檸檬酸緩沖液中) ;④正常血清封閉，室溫20 min;⑤滴加survivin兔抗人多克隆抗體，37℃孵育1 h;⑥滴加PicTureTM，37℃孵育1 h;⑦DAB顯色，蒸餾水水洗、蘇木素復染2 min，分化、返藍、脫水，二甲苯透明，封片，光鏡下觀察。用緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.4結果判定雙盲閱片，survivin陽性染色為棕黃色顆粒，胞質和(或)胞核中均可出現表達。采用半定量結果判斷，分別對鏡下陽性細胞的百分比和染色強度給予評分。①陽性著色強度:無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。②陽性著色細胞數:每張切片選取5個高倍鏡(×400)視野，計數1 000個腫瘤細胞中陽性染色的細胞數，分為5個等級計分: 0分，＜5％; 1分，5％～25％; 2分，26％～50％; 3分，51％～75％; 4分，≥75％。以染色強度分值與陽性細胞數分值的乘積作為每一例的積分，積分為0者判定為表達陰性，積分≥1者為陽性。

1.5統計學處理采用SPSS13.0統計軟件進行非參數檢驗、χ2檢驗，生存率計算采用Kaplan-Meier法，并進行log-rank檢驗。

2　結果

2.1survivin表達與胸部腫瘤類型的關系survivin陽性染色主要位于細胞質，部分位于胞核，部分胞核胞質均有表達，見圖1。腫癌survivin積分為2.00±2.92;食管癌survivin積分為2.00±2.45;乳腺癌survivin積分為2.00±2.56;肺癌、食管癌及乳腺癌survivin總陽性率分別為76.0％，68.0％及66.0％三者無統計學差異(χ2= 1.23，P＞0.05)，分析顯示: survivin表達與腫瘤類別無關，在肺癌、食管癌、乳腺癌中均為高表達。

圖1　胸部腫瘤中survivin表達(DAB，×400)

2.2survivin胞核表達與胸部腫瘤類型的關系survivin胞核表達率在肺癌最高(34％)，食管癌次之為32％，乳腺癌最低，三者無統計學差異(χ2=0.14，P＞0.05)。因此，survivin胞核表達與腫瘤類別無關。

2.3survivin胞核表達與胸部腫瘤淋巴結轉移的關系survivin胞核表達在有淋巴結轉移的肺癌、食管癌、乳腺癌中分別占64.7％、75％、21.4％，survivin胞核表達在有淋巴結轉移的肺癌、食管癌較高，無統計學差異(P = 0.708) ; survivin胞核表達在有淋巴結轉移肺癌與乳腺癌的關系比較，有統計學差異(P= 0.029) ; survivin胞核表達在有淋巴結轉移食管癌與乳腺癌的關系比較，有統計學差異(P= 0.009)?？梢妔urvivin胞核表達在有淋巴結轉移的三類胸部腫瘤中與肺癌和食管癌關系密切。

2.4survivin胞核表達與胸部腫瘤分化程度的關系survivin胞核表達率在高分化的肺癌(29.4％)、食管癌(28.6％)、乳腺癌(31.3％)相似，在中低分化的肺癌(70.6％)、食管癌(68.7％)及乳腺癌(71.4％)也相似。survivin胞核表達在不同分化肺癌、食管癌、乳腺癌兩兩比較，無統計學差異(P = 1.000) ; survivin胞核表達與胸部腫瘤分化程度無關。

2.5survivin胞內定位表達與胸部腫瘤預后的關系肺癌隨訪結果顯示: 17例胞核表達的肺癌患者中死亡13例，失訪和存活4例，中位生存時間(13±2.57)個月、生存率23.53％，21例胞質表達的肺癌患者死亡11例，失訪和存活10例，中位生存時間(23±5.03)個月、生存率47.62％; Kaplan-Meier生存分析顯示肺癌胞核表達患者生存率低于胞質表達者(P= 0.023 4)。食管癌隨訪結果顯示: 16例胞核表達的食管癌患者中死亡10例，失訪和存活6例，生存率37.5％，中位生存時間(16± 2.95)個月，18例胞質表達的食管癌患者中死亡8例，失訪和存活10例，中位生存時間(19±2.34)個月，生存率55.56％; Kaplan-Meier生存分析:食管癌胞核表達患者生存率低于胞質表達者，差異無統計學意義(P= 0.146)。乳腺癌隨訪結果顯示: 14例胞核表達的乳腺癌患者中死亡9例，失訪和存活5例，中位生存時間(12±2.95)個月，生存率35.71％，19例胞質表達的乳腺癌患者中死亡7例，失訪和存活12例，中位生存時間(21± 2.29)個月、生存率63.16％。Kaplan-Meier生存分析顯示乳腺癌胞核表達患者生存率低于胞質表達者，差異無統計學意義(P=0.094)。

3　討論

survivin是1997年由耶魯大學的Ambrosini等〔3〕利用效應細胞蛋白酶受體-1 cDNA在人類基因組庫中篩選并分離出來，是迄今發現的最強的凋亡抑制因子。研究表明，survivin在人類腫瘤中均表達，但是表達比率不盡相同，孫建建等〔4〕研究顯示:胰腺癌survivin蛋白的表達陽性率為85.2％，國內外報道多種腫瘤的survivin表達比率:胃癌為34.5％，乳腺癌為70.7％，非小細胞性肺癌為85.5％。桂影等〔5〕報道子宮內膜癌為76.7％，導致survivin表達比率不同是否和腫瘤類型有關? survivin在不同腫瘤表達有無相關性?本實驗對惡性程度較高的食管癌、肺癌、乳腺癌標本對比，發現survivin在這三類腫瘤中均高表達，其中肺癌最高，乳腺癌最低，但表達陽性率與腫瘤類型無關。

近年survivin細胞內定位表達的研究受到關注，survivin在細胞核和細胞質表達，有報道: survivin在乳腺癌組織中定位于細胞核的占26％，細胞質染色陽性的占15％，細胞核和細胞質均染色陽性的占35％〔6〕; Grabowski等〔7〕報道的食管鱗癌細胞核陽性率80％，可見survivin細胞內定位表達的研究結果不同。本實驗對肺癌、食管癌、乳腺癌survivin細胞內定位表達作研究，結果: survivin在肺癌、食管癌、乳腺癌中均主要在細胞質表達，部分在細胞核表達，部分胞核胞質均有表達，且胞核表達與腫瘤類型無關。方艷秋等〔8〕研究表明:肝癌組織survivin蛋白表達與腫瘤大小及病理分期無關，Sohn等〔9〕發現乳腺癌標本中survivin表達胞質陽性與臨床分期、分化程度和淋巴結轉移明確相關，本實驗研究發現survivin細胞核表達與腫瘤類別、分化程度無關。有學者分析〔10〕，survivin胞核中表達可能與細胞有絲分裂的調控有關，而survivin在胞質中表達被認為具有細胞保護作用。Zhang等〔11〕證實survivin在放療后晚期前列腺癌的患者中，survivin核染色強度評分＞191.2分的患者5年生存率及總體生存率明顯比染色強度評分＜191.2分的高;在survivin與胃癌的研究中，Yao等〔12〕發現survivin表達于胞核和胞質，且多因素分析表明，細胞核內表達與較好預后有關，細胞質內survivin陽性提示預后差;亦有研究表明〔13〕survivin非小細胞肺癌的核陽性提示腫瘤的浸潤和進展，提示預后不良; Fan等〔14〕綜合了10份有關非小細胞肺癌的數據進行Meta分析: survivin胞核陽性與非小細胞肺癌患者術后總體生存率無關?？梢?，survivin亞細胞定位表達在不同腫瘤甚至同一腫瘤的預后存在不同的結論，導致這種差異與實驗條件、操作方法、結果判讀等有一定關系，因此本實驗選取肺癌、食管癌、乳腺癌標本，避免可控的影響因素，發現survivin胞核與胞質表達與肺癌的發展、預后有密切關系，可能成為判斷其惡性潛能、預測生存期的重要生物學指標。

4　參考文獻

1黃東蘭，鄒建軍，張積仁，等.肺癌患病風險關鍵基因篩選〔J〕．中國腫瘤臨床，2012; 39(23) : 1890-5.

2黃華平，周建榮，曾慶.老年乳腺癌患者術后上肢水腫的危險因素〔J〕．中國老年學雜志，2012; 32(11) : 2236-8．

3 Ambrosini G，Adida C，Alteri DC.A novel anti-apoptosis gene，survivin，expressd in cancer and lymphoma〔J〕．Nat Med，1997; 3(8) : 917-21.

4孫建建，李勝棉，趙松，等.survivin和caspase-3在胰腺癌組織中的表達及與預后的關系〔J〕．腫瘤防治研究，2012; 39(1) : 62-7.

5桂影，王麗娟.survivin與COX-2在老年子宮內膜癌中的表達及其與病理特征的關系〔J〕．中國老年學雜志，2013; 33(2) : 437-8.

6李永平，于芳，呂永剛，等.survivin亞細胞定位與乳腺癌臨床病理特征關系的研究〔J〕．中國美容醫學，2012; 21(5) : 785-7.

7 Grabowski P，Kuhnel T，Muhr-Wilkenshoff F，et al.Prognostic value of nuclear survivin expression in oesophageal squamous cell carcinoma〔J〕．Br J Cancer，2003; 88(1) : 115-9.

8方艷秋，白曉，齊亞靈，等.肝癌及其癌旁組織中細胞凋亡抑制蛋白survivin表達〔J〕．吉林大學學報(醫學版)，2013; 39(1) : 47-50.

9 Sohn DM，Kim SY，Baek MJ，et al．Expression of survivin and clinical correlation in patients with breast cancer〔J〕．Biomed Pharmacother，2006; 60(6) : 289-92.

10 Stauber RH，Mann W，Knauer SK.Nuclear and cytoplasmic survivin molecular mechanism，prognostic，and therapeutic potential〔J〕．Cancer Res，2007，67(13) : 5999-6002．

11 Zhang M，Ho A，Hammond EH，et al.Prognostic value of survivin in locally advanced prostate cancer study based on RTOG 8610〔J〕．Int J Radiat Oncol Biol Phys，2009; 73(4) : 1033-42.

12 Yao C，liu J，Shao L.Rapamycin inhibits the proliferation and apoptosis of gastric cancer cells by down regulating the expression of survivin〔J〕．Hepatogastroentrology，2011; 58(107-108) : 1075-80.

13 He L，Hou M，Zhang J，et al.Subcellular localization of survivin in nonsmall cell lung cancer〔J〕．Ai Zheng，2009; 28(9) : 955-60.

14Fan J，Wang L，Jiang GN，et al.The role of survivin on overall survival of non-small cell lung cancer，a meta-analysis of published literatures 〔J〕．Lung Cancer，2008; 61(1) : 91-6.

〔2014-06-20修回〕

(編輯安冉冉/曹夢園)

基金項目:國家自然科學基金項目(81100665) ;陜西省教育廳科學研究項目(2010JK805)

〔中圖分類號〕R733

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2015) 16-4434-03;

doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2015.16.007