漢族人外周血二氫尿嘧啶脫氫酶活力影響因素的研究*

丁永娟，許德金**，袁文博，盧紅文，裴澤軍

1江南大學附屬醫院藥學部，無錫 214000；2無錫市第二人民醫院藥劑科，無錫 214000

漢族人外周血二氫尿嘧啶脫氫酶活力影響因素的研究*

丁永娟1，許德金1**，袁文博1，盧紅文1，裴澤軍2

1江南大學附屬醫院藥學部，無錫 214000；2無錫市第二人民醫院藥劑科，無錫 214000

目的：考察年齡、性別、肝功能、腎功能以及是否懷孕這五大因素對漢族人外周血二氫尿嘧啶脫氫酶（DPD）活力的影響，為制定符合我國漢族人群實際的氟尿嘧啶類藥物使用指南提供參考。方法：選取460份漢族人的血樣分成5個大組，以外周血全血溫孵的方法分別考察年齡、性別、肝功能、腎功能以及是否懷孕這五大因素對外周血DPD活力的影響。結果：漢族人外周血DPD活力與年齡負相關，與性別無關，當個體肝腎功能異常時，外周血DPD活力降低，當個體懷孕時，外周血DPD活力增強。結論：使用氟尿嘧啶類藥物時，當患者為老人或肝腎功能異常時，應適當減量；當患者為無法避免用藥的孕婦時，要注意懷孕導致藥物代謝的異常加快。

二氫尿嘧啶脫氫酶；全血溫孵；漢族人群

二氫尿嘧啶脫氫酶（DPD）是臨床常見的氟尿嘧啶類藥物代謝過程中最關鍵的限速酶[1]。研究顯示：氟尿嘧啶類藥物活化進入血液后約85%首先經過DPD代謝失活，剩余的藥物通過參與嘧啶代謝途徑發揮抗腫瘤作用，因此氟尿嘧啶類藥物的毒性大小與DPD在人類血細胞中的活性程度密切相關[2]。

人類DPD活力的個體間變異程度較大。研究顯示[3-4]DPD活力受種族差異、性別差異、生理節律性影響較大，與年齡、肝功能無關。在日本人中[3]，DPD活力與年齡呈正相關。而目前尚未見中國人群中DPD活力對氟尿嘧啶類藥物代謝影響的調查研究。

本文選取了460份漢族人的血樣，以外周血全血溫孵的方法考察了年齡、性別、肝功能、腎功能以及是否懷孕這五大因素對外周血DPD活力的影響，旨在為氟尿嘧啶類藥物的個體化給藥提供參考。

1 資料與方法

1.1 實驗入組條件和分組[5]

2014年5月至11月間，我院與無錫市第二人民醫院合作，共選取460份漢族人的外周血樣，分為5大組進行比較。第一大組考察不同年齡段間的外周血DPD活力差異，選取20～40歲健康人血樣20份，40～60歲健康人血樣20份，60歲以上健康人血樣20份。第二大組考察性別差異對外周血DPD活力的影響，采集健康男性血樣50份，健康女性血樣50份。第三大組考察肝功能對外周血DPD活力的影響，選取肝功能異常者血樣（分級以1983年武漢中國首屆門靜脈高壓癥研討會制定的分級標準[6]為準，三級肝功能異常者的入組比例近似為1∶1∶1）50份，肝功能正常者血樣50份。第四大組考察腎功能對外周血DPD活力的影響，選取腎功能異常血樣（分級按美國CKD分期[7]，各期入組比例近似為1∶1∶1∶1∶1）50份，腎功能正常者血樣50份。第五大組考察懷孕對外周血DPD活力的影響，選取20～40歲孕婦及健康未懷孕女性血樣各50份。以上各組血樣入組時，為避免各因素交互作用的影響，每組血樣僅在研因素發生變化，其余因素保持一致。

利用矩陣的UV分解將每個用戶的潛在因子求出，再利用解析幾何中高維歐幾里得空間中兩個向量夾角的余弦公式相乘就可以得出得分矩陣。于是系統把得分最高的歌曲推薦給相應的用戶即可(如下圖示，統計圖中的紅色的字體即代表推薦的歌曲)

1.2 全血溫孵體系的建立和DPD活力的計算

所謂信息素養就是指利用與其特定相關的一些列工具及資源等方式去感知信息，并且對信息做出識別、轉換、處理和傳遞等基礎操作，它是當前網絡信息背景下學生所必備的基礎性能力.高中信息技術是一門理論與實踐并重、可操作性強的學科，它對學生把握知識的水平以及動手操作轉換能力有很高的要求標準，是幫助教師引導學生建立信息素養的必經之路.因此，在高中信息技術教學過程中，教師應該提高自身專業素質、提升知識水平，在新的時代背景下關注學生個人能力，積極引導使其發揮主體能動性，高效的完成培養學生信息素養的教育目標，培養信息化專業人才.

因為結親工作的調整，朱學江的結親戶有所變動，從原來的結親戶阿班調整為現在的賽力克，結親周活動中朱學江與“親戚”賽力克一同下地，幫助賽力克搬管子。不管跟誰結親，朱學江都盡心、盡力地幫助結親戶解決實際困難。入住結束時，朱學江接到了阿班的電話，阿班熱情地邀請朱學江到家里坐坐。

2.1 對外周血DPD活力影響的單因素分析

2 結 果

所有統計計算均由SPSS19.0中文版軟件完成。考察外周血DPD活力與性別、肝功能、腎功能以及是否懷孕這四大因素的相關性時采用t檢驗。考察外周血DPD活力與年齡的相關性時采用方差分析。以P＜0.05為有統計學意義。

第二大組中男性與女性的外周血DPD活力數據均值接近（t=1.424，P＞0.05），差異無統計學意義。

5組血樣的實驗結果見表1。

表1 年齡、性別、肝功能、腎功能和是否懷孕5大因素對外周血DPD活力影響的統計學結果

第一大組血樣中的青年組（20～40歲）、中年組（40～60歲）和老年組（60歲以上）外周血DPD活力進行方差分析（F=3.832，P=0.042）結果說明，不同年齡組的外周血DPD活力有顯著性差異。

該系統選用Nokia5110液晶模塊作為系統的顯示器件，用來顯示工作模式、角度與速度、PID參數等，方便系統調試。Nokia5110液晶模塊采用PCD8544作為驅動芯片，通過模擬串行總線協議發送指令和寫入數據RAM來控制和顯示數據；采用串行接口與主處理器進行數據通信，接口信號線相較于其他液晶模塊大幅減少，除去電源、背光電源與地，僅有5根信號線。其電路原理圖如圖3。

終體積為500 μL的全血溫孵體系，包括400 μL新鮮全血，pH=7.4的Tris-HCl緩沖液配制的2μmol· L-1還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）50μL和生理鹽水配制的50 μg·mL-1氟尿嘧啶底物50 μL。將全血在37℃預溫孵10 min，迅速加入底物溶液混勻，并加入NADPH 50μL，啟動反應。溫孵60min后，依次加入50 μL含內標5-氯尿嘧啶（0.192 μg·mL-1）的冰甲醇和6%高氯酸溶液200 μL終止反應。此反應體系經4000r·min-1離心10min，上清液過0.22μm濾膜，濾液按文獻方法進行分析和計算活力[8-9]。

第三大組中肝功能正常者的外周血DPD活力均數大于異常者（t=5.802，P＜0.05）。說明在漢族人群中肝功能異常會使得DPD活力下降。

2.2 綜合數據多元回歸分析

能夠積極發現生活中生物學科存在的問題，針對生物學的現象進行提問、觀察、實驗設計與實施方案的結果進行討論與研究，在開展不同工作的同時，都很愿意和團對合作.

第五大組中懷孕與未懷孕者的外周血DPD活力數據差異存在統計學顯著意義（t=3.470，P＜0.05），說明在漢族人群中，懷孕會使得外周血DPD活力增強。

1.3 統計學方法

第四大組中腎功能正常與異常者的外周血DPD活力數據差異存在統計學顯著意義 （t=3.720，P＜0.05）。說明在漢族人群中，腎功能異常會導致外周血DPD活力下降。

將年齡（X1）、性別（X2）、肝功能（X3）、腎功能（X4）、是否懷孕（X5）這5個因素分別作為自變量，外周血DPD酶活力作為因變量Y，進行多元線性回歸。回歸方程為 Y=3.549-0.157X1+0.017X2+0.105X3+ 0.117X4+0.365X5（其中擬合優度R2=0.8121，回歸方程顯著性檢驗P=0.037，常量對應t=0.149，P=0.883；X1對應t=-0.902，P=0.358；X2對應t=0.247，P=0.807；X3對應t=1.352，P=0.258；X4對應t=1.198，P=0.314；X5對應t=1.548，P=0.178）。從多元線性回歸結果可見：外周血DPD活力受性別影響不顯著，與年齡負相關，與肝功能、腎功能、是否懷孕呈正相關。其中外周血DPD酶活力與是否懷孕這一因素的相關性最高。

2）多數海島柴油機煙氣所余熱能可以滿足生活垃圾垃圾干燥，其技術路線是可行的。干燥后的垃圾熱值高，易于焚燒，環境污染小。

3 討 論

3.1 全血溫孵體系評價DPD活力的可行性

文獻曾報道過兩種DPD活力的評價方法，包括放射免疫法和血漿內源性二氫尿嘧啶與尿嘧啶比值法。放射免疫法價格昂貴，操作費時，不易推廣；比值法雖然簡便，但在預實驗中發現有部分入組血樣檢測時出現內源性干擾，會影響結果的準確性，所以本實驗也不能采用。溫孵體系是體外模擬研究藥物代謝的最重要的手段，曾被成功用于解決多種藥物代謝的研究。氟尿嘧啶類藥物活化進入血液后85%首先經過DPD代謝失活，只有極少部分會通過其他途徑代謝。因此，通過建立全血溫孵體系，考察固定采樣時間點的氟尿嘧啶殘留率，也可以間接反應DPD活力的強弱。

3.2 全血溫孵體系的建立和參數優化

一個完整的全血溫孵體系主要包括以下要素：全血、反應底物、啟動劑、反應溫度、反應時間和反應終止劑。實驗中，反應底物為50 μg·mL-1的氟尿嘧啶生理鹽水溶液，用pH=7.4的Tris-HCl緩沖液配制的NADPH是啟動DPD活力的啟動劑。為了模擬體內代謝的溫度條件，選擇37℃為反應溫度。圖1顯示了不同反應時間對氟尿嘧啶殘留率的影響，從圖1中可見，反應時間為60min后氟尿嘧啶的殘留率趨近穩定，因此，選用60 min為溫孵時間。6%高氯酸溶液是一種強酸型的蛋白沉淀劑，可以使血漿中多種酶和蛋白變性失活，因此可以作為反應終止劑[17]。

圖1 全血溫孵時間與氟尿嘧啶殘留率的相關性考察曲線

4 結 論

外周血DPD活力與個體氟尿嘧啶類藥物的耐受性密切相關。本文通過460份漢族人血樣的測定發現：在漢族人群中，外周血DPD活力與年齡呈負相關，與性別無關，當個體懷孕時，外周血DPD活力增強，當個體肝腎功能異常時，外周血DPD活力降低。實驗結果提示：使用氟尿嘧啶類藥物時，對不同性別的患者不必考慮劑量的差異性，當患者為老人或肝腎功能異常時，存在減量的必要性，當患者為無法避免用藥的孕婦時（基本不推薦孕期使用氟尿嘧啶類藥物，除非危及生命的疾病），要注意懷孕導致藥物代謝的異常加快。本實驗的結果可以為制定符合我國漢族人群個體化使用氟尿嘧啶類藥物提供參考。

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Factors Affecting the Activity of Dihydropyrimidine Dehydrogenase in the Chinese Han Population's Peripheral Blood*

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