科爾沁區女性人乳頭瘤病毒感染基因型檢測

包常華，霍 萬

（1.內蒙古民族大學醫學院，內蒙古 通遼 028000；2.內蒙古民族大學病原生物學與免疫學研究所，內蒙古 通遼 028000）

宮頸癌是嚴重威脅女性健康的惡性腫瘤，且年新增患者數達50余萬例，其中80%新增病例發生在發展中國家［1］。人乳頭瘤病毒（humanpapillomavirus,HPV）與宮頸癌的發生密切相關，已知的HPV基因型達100余種，多數感染者呈現短暫并可自行消失的感染［2］，但少數型別尤其是高危型別的感染將導致癌前病變或宮頸癌，是宮頸癌發生的主要病因［3］，因此，HPV感染的基因型檢測已成為臨床篩查和預防宮頸癌的重要手段之一，本研究通過檢測科爾沁地區502例婦科門診女性感染的HPV基因型，以期對我區宣傳預防宮頸癌的發生提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究對象為502例來我研究所檢驗室進行HPV分型檢測的女性。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑

DNA提取試劑盒、HPV21導流雜交試劑盒、核酸導流快速雜交儀（凱普生物技術有限公司）、高速離心機、PCR儀、水浴箱。

1.2.2 采集標本

要求檢測對象于檢測前48h內不要做陰道沖洗或陰道內使用藥物，月經正常的婦女，在月經來潮后10～18d為最佳檢測時間，檢測人員以專用采樣刷采集宮頸脫落細胞，標本于4℃保存，3d內進行檢測。

1.2.3 提取DNA

吸取500μl標本于離心管中，14000rpm離心5min，棄上清液；加溶液Ⅰ400μl于沉淀中，沸水浴15min；再加入 400μl溶液Ⅱ，14000rpm 離心 5min，棄上清液；沉淀即為DNA，60μl無菌水溶解DNA，備用。

1.2.4 目的片段擴增

預裝24μl反應液的PCR管中加入1μl上述DNA溶液進行擴增，PCR反應條件為95℃9min，40個循環（94℃ 20s，55℃ 30s，72℃ 30s），72℃ 5min。

1.2.5 導流雜交

450μl雜交液混合20μlPCR擴增產物浸潤雜交膜，45℃雜交10min，開泵去除液體；加入封阻液500μl，25℃封阻 5min，開泵去除液體；加入 500μl顯色液，36℃條件下顯色5min后，開泵去除液體，觀察并記錄結果。

2 結果

2.1 HPV感染率

502例檢測標本中病毒感染陽性結果117例，總陽性率為23.3%（117/502）。病毒感染陽性患者中單一亞型感染率為66.67%（78/117）。多種亞型感染率為33.33%（39/117），其中雙亞型感染率為 25.64%（30/117），三亞型感染率7.69%（9/117），結果如圖1所示。

圖1 HPV單亞型與多亞型感染率統計圖Fig.1 The infection rate of HPV single and multiple genotypes

2.2 HPV基因型分布

共檢測到18種HPV亞型，其中高危型別14種，所占比例為83.24%；低危型別4種，所占比例為16.76%。低危型別中的43、44型和高危型別中的45型未被檢出。感染者中以HPV16、31、6三種亞型多見，所占比例分別為20.95%、12.57%、8.38%，具體統計結果見表1。

表1 科爾沁地區女性HPV感染亞型統計Tab.1 Distribution of HPV genotype of female patients in Horqin region

3 討論

宮頸癌是嚴重危害女性的一種惡性疾病，HPV的特定型別與宮頸癌的發生存在緊密聯系［4］，采用基因芯片和導流雜交技術，能及時準確地進行病毒感染的檢測與基因型診斷［5］。本研究結果表明，502例樣本中共檢出HPV感染117例，總感染率為23.3%，低于臺州（35.08%）、北京（57.10%）、陽泉（35.20%）及鄂州（30.93%）等地區［6］。本地區檢測出HPV感染的亞型處于前幾位的分別為 16、31、6、39、18，與上述地區相比也存在著區域性的差異：如臺州常見亞型為16、11、52，北京常見亞型為 16、58、52，鄂州常見亞型為 16、58、53。綜上結果表明，本地區HPV亞型即與其他地區的常見感染亞型基本類似，又存在著區域性差異。HPV是宮頸癌的重要致病因素［7］，控制HPV病毒的感染有利于宮頸癌的預防［8］，因此針對女性開展定期的HPV檢測是控制和預防宮頸癌的重要手段。通過本實驗了解科爾沁地區女性HPV的感染及基因型分布現狀，為在科爾沁地區開展預防宮頸癌的宣傳提供理論依據。

［1］ 邵軍輝，楊琳，龔逞英.新余地區2273例女性生殖道人乳頭瘤病毒感染狀況分析［J］.甘南醫學院學報，2014，34（4）：579-581.

［2］ Trottier H, Franco E. The epidemiology of genital human papillomavirus infection［J］. Vaccine，2006，24（Suppl）1：1-15.

［3］ Bosch F X, Lorincz A, Munoz N, et al. The causal relation between human papillomavirus and cervical cancer［J］. Jclin Pathol，2002，55（4）：244-265

［4］ Michael, Matthew, Singh M, et al. IR microspectroscopy：potentinal application in cervical cancer screening［J］.Cancer lett，2007，246（1-2）：1-11..

［5］ Kin C J, Jeong J K, Park M, et al. HPV oligonuckeotide microarray based detection of HPV genotypes in cervical neoplastic lesions［J］. Gynecol Oncol，2003，89（2）：210-217.

［6］ 包常華，張東麗，劉鑫，等.婦科人乳頭瘤病毒感染基因型分析［J］.激光生物學報，2014，23（1）：55-58.

［7］Steben M, Duarte-France E. Human papillomavirus infection：epidemiology and pathophysiology［J］. Gynecol oncol，2007，（107）：2-5.

［8］ 馮陽春，張園，黃艷春.高危型人類乳頭狀瘤病毒負荷量對宮頸上皮細胞DNA倍體的影響［J］.中國病原生物學雜志，2012，7（1）：5-7.