蒙藥水梔子質量標準研究*

蒙藥水梔子質量標準研究*

★李養學1,2*通信作者：李養學，男，碩士。研究方向：中藥新藥研究與質量控制。Tel：020-83502098，E-mail：efongzg@126.com。張岳3李素梅1,2胥愛麗1,2江潔怡1,2(1.廣東省中醫藥工程技術研究院廣州 510095；2.廣東省中醫藥研究開發重點實驗室廣州 510095；3.廣東省食品藥品職業技術學校廣州 510663)

摘要：目的: 應用現代分析方法，建立蒙藥水梔子質量標準。方法: 采用薄層色譜法進行鑒別；采用HPLC法測定水梔子中梔子苷的含量，Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5μm)，乙腈-水為(15∶85)流動相，柱溫25℃，流速1.0 mL/min，在238nm波長下檢測。結果: 薄層色譜斑點清晰，分離度好；含量測定梔子苷在0.1132～1.132μg范圍內呈良好的線性關系(r=0.99996)，平均回收率為100.32%(RSD為1.09%，n=2)。結論: 所建方法簡單、準確、重復性好，可用于蒙藥水梔子的質量控制。

關鍵詞：蒙藥；水梔子；薄層鑒別；高效液相色譜法；質量標準

水梔子為茜草科植物長果梔子GardeniajasminoidesEllisf. Longicarpa Z.W.Xie et Okada的干燥成熟果實[1-2]，又名大梔子、馬牙梔，蒙藥名稱“朱如拉”[1]，是中藥梔子的一個變型[3]，始見于《八閩通志》[4]，主要分布于江西、廣西、湖南、四川等地[5]。水梔子味酸、微苦，燉、燥、涼，具有清血熱，明目，祛“巴達干協日”，生津，調元[1]。

現代研究表明，水梔子含有環烯醚萜類、單萜苷類、二萜類、三萜類、黃酮類、奎寧酸及其衍生物以及倍半萜等成分[6-8]，所含成分具有明顯的鎮痛、抗炎[9-10]、保肝[11]、降血糖[12]、抗血栓[13]等作用。

水梔子作為蒙藥應用歷史已較為久遠，而對其質量標準相關的研究相對較少。本實驗就水梔子的鑒別和含量測定等項目進行了較為全面和系統的研究，為建立和完善其質量標準提供參考。

1儀器與試藥

1.1儀器薄層自動鋪板器(BQ-Ⅱ型，重慶南岸實驗電器廠)；薄層色譜點樣儀(CAMAG 4型，瑞士)、薄層色譜數碼成像系統(CAMAG Reprostar 3，瑞士)；十萬分之一電子分析天平(Mettler-Toledo XS205DU，瑞士)；超純水機(MilliPore Advantage A10，美國)；電熱恒溫水浴鍋(HWS-26，上海)；高效液相色譜儀(Agilent 1200，美國)；電熱恒溫鼓風干燥箱(DHG-9203A，上海精宏設備有限公司)；數控超聲波清洗器(KQ52300DE，昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2試藥梔子苷由中國食品藥品檢定研究院提供(含量：99.7%，批號：110749-201115)；水梔子藥材由內蒙古大漠藥業公司提供(批號：20131101、20131102、20131103、20140201、20140202)，內蒙古自治區藥品檢驗所周凱主任中藥師鑒定為茜草科梔子屬植物長果梔子GardeniajasminoidesEillsf.longicarpaZ. W. Xie et Okada的干燥成熟果實。硅膠GF254薄層板為Merck預制板；水為自制超純水；乙腈試劑級別為色譜純；其它實驗試劑級別為分析純。

2方法與結果

2.1薄層色譜的鑒別

2.1.1取水梔子樣品適量，研細，取粉末約0.1g，加25mL甲醇，超聲30min，溶液進行過濾，濾液水浴蒸干，殘渣加1mL甲醇使溶解，制得水梔子供試品溶液。照2010年版《中國藥典》一部附錄Ⅵ B薄層色譜法試驗，吸取5μL上述溶液，分別于同一Merck硅膠GF254薄層板上點樣，展開劑為：甲苯-甲酸乙酯-甲酸(8∶2∶0.15)，進行展開，取出，晾干。繼續噴以硫酸乙醇溶液(1→10)，并于105℃下加熱，至斑點顯色清晰，置365nm下檢視。供試品色譜中，在色譜相應的位置上，顯七個主要的的熒光斑點。見圖1。

2.1.2取梔子苷對照品(110749-201115)，制成每1mL含2mg梔子苷的甲醇溶液，作為對照品溶液。照2010年版《中國藥典》一部附錄Ⅵ B薄層色譜法試驗，吸取上述供試品溶液5μL，吸取上述對照品溶液5μL，分別點于同一Merck硅膠GF254薄層板上，展開劑為：正丁醇-乙酸乙酯-50%氨水(4∶1∶5)經放置的上層溶液，進行展開，取出，晾干。繼續噴以香草醛硫酸溶液(5→100)，并于105℃下加熱，至斑點顯色清晰。在與對照品色譜相應的位置上，供試品色譜顯相同顏色的斑點。見圖2。

1.水梔子(20131101)；2.水梔子(20131102)；3.水梔子(20131103)；

4.水梔子(20140201)；5.水梔子(20140201)

圖1五批次水梔子薄層色譜圖

1.梔子苷對照品； 2.水梔子(20131101)；3.水梔子(20131102)；

4.水梔子(20131103)；5.水梔子(20140201)；6.水梔子(20140201)

圖2水梔子薄層色譜圖

2.2含量測定[14-16]

2.2.1對照品溶液制備精密稱取梔子苷對照品11.36mg(110749-201115)，置于100mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即制得每1mL含梔子苷0.1132mg的照品溶液，作為對照品溶液。

2.2.2供試品溶液制備取本品粉末(批號：20131101，過四號篩)約0.1g，精密稱定，置具塞三角瓶中(100mL)，精密加入50mL甲醇，密塞，稱重，超聲波清洗器(功率250W，頻率45kHz)超聲處理30min，取出，放冷，再用甲醇將減失的重量補足，搖勻，濾過。取續濾液，精密量取25mL，置50mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.3色譜條件色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18(4.6mm×250mm，5μm)柱；流動相：乙腈-水(15∶85)；檢測波長：238nm；流速：1.0mL/min；柱溫：25℃。見圖3-4。

圖3　梔子苷對照品HPLC圖譜

圖4　供試品HPLC圖譜

2.2.4線性關系考察精密量取“2.2.1”項下對照品溶液1,2,4,6,8,10mL，分別置于10mL量瓶中，甲醇定容，搖勻，分別制成對照品溶液，即每1mL分別含梔子苷為11.32,22.64,45.28,67.92,90.56,113.2μg。分別精密吸取10μL，按“2.2.3”項下高效液相色譜測定條件測定，以積分峰面積(Y)對梔子苷的含量(X)進行回歸計算，得梔子苷標準曲線為Y=1015.03968X+2.8811092，r=0.99996。表明梔子苷在0.1132～1.132μg范圍內呈現良好的線性關系。

2.2.5儀器精密度試驗精密吸取“2.2.2”項下供試品溶液(批號：20131101)10μL，連續重復進樣6次，按“2.2.3”項下高效液相色譜測定條件測定，測得供試品溶液中梔子苷峰面積積分值RSD為0.31%，表明高效液相色譜儀精密度良好。

2.2.6穩定性試驗取“2.2.2”項下供試品溶液，于0、2、4、6、8和12h分別進樣10μL，按“2.2.3”項下高效液相色譜測定條件進行測定，測得供試品溶液中梔子苷峰面積積分值的RSD為0.33%，表明供試品溶液的穩定性在12h內良好。

2.2.7重復性試驗取本品粉末(批號：20131101)，按“2.2.2” 項下供試品溶液制備方法制備供試品溶液6份，分別精密吸取10μL進樣，按“2.2.3”項下高效液相色譜條件進行測定，測得峰面積積分值并計算含量，得梔子苷含量RSD為0.78%，表明本方法重現性較好。

2.2.8加樣回收率試驗分別取水梔子樣品粉末(批號20131101)9份，按回收率試驗方法，分別加入一定量梔子苷對照品，按“2.2.2”項下供試品溶液制備方法處理，按“2.2.3”項下高效液相色譜條件進行測定，計算樣品中梔子苷含量，并計算回收率，結果平均回收率為100.32%，相對標準偏差RSD為1.09% (n=2)，表明本含量測定方法可靠、準確度高，結果見表1。

表1　梔子苷加樣回收率測定結果(n=2)

2.2.9樣品測定分別取各批次水梔子樣品粉末，按“2.2.2”項下供試品溶液制備方法處理，按“2.2.3”項下高效液相色譜條件進行測定，計算各批次水梔子樣品中梔子苷的含量，結果見表2。

表2　各批次樣品含量測定結果(n=2)　mg/g

3討論

3.1蒙藥水梔子含有環烯醚萜類、單萜苷類、二萜類、三萜類等成分，和中藥梔子成分較為接近。通過對水梔子藥材環烯醚萜類成分進行薄層色譜鑒別研究，建立了水梔子藥材中環烯醚萜類成分薄層色譜鑒別方法，同時對前文所述鑒別方法進行了方法學考察(分別對不同溫度、不同濕度及不同廠家的薄層板進行了比較)，結果表明該鑒別方法對不同溫度及不同濕度的適應性較好，色譜圖Rf值適中，且色譜斑點較為豐富、清晰，分離度較好。

3.2水梔子中所含梔子苷為中藥活性成分，故選擇梔子苷作為控制其質量的指標成分。參考《中國藥典》及相關文獻，對水梔子進行了含量測定，對方法中流動相及流動相的比例、柱溫、流速、提取溶劑、提取方式、提取時間以及含量測定方法的方法學等進行了考察。考察結果表明，該含量測定方法簡便、重現性好、靈敏度高、結果準確、可靠，可用于對水梔子樣品的質量控制。

3.3為了全面的了解和控制蒙藥水梔子的質量，更好的為蒙醫用藥服務，還當進一步收集更多產地及批次的樣品進行歸類研究。

參考文獻

[1]中華人民共和國衛生部藥品標準.蒙藥分冊[M].北京：人民衛生出版社，1998:2.

[2]畢立夫.蒙藥質量標準化研究(上)[M].呼和浩特：內蒙古人民出版社,2007:110.

[3]謝宗萬.水梔子的品種考證及品質評價芻議[J].中藥材,1991(7):45.

[4]福建省地方志編纂委員會·八閩通志(上) [M].福州：福建人民出版社，1989:551.

[5]付小梅,賴學文,葛菲,等.中藥梔子類藥材資源調查和商品藥材鑒定[J].中國野生植物資源,2002，21(5):23.

[6]于洋,高昊,戴毅,等.梔子屬植物化學成分的研究進展[J].中草藥,2010,41(1):148.

[7]劉素娟,張現濤,王文明,等.水梔子化學成分的研究[J].中草藥,2012,43(2):238.

[8]張雷紅,劉素娟,趙珍東,等.水梔子果實化學成分的研究[J].海峽藥學,2012,24(3):39.

[9]方尚玲,劉源才,張慶華,等.梔子苷鎮痛和抗炎作用的研究[J].時珍國醫國藥,2008,19(6):1 373.

[10]付小梅,葛菲,褚小蘭,等.梔子和水梔子利膽抗炎作用的對比研究[J].江西中醫學院學報,2001,13(4):165.

[11]賈玉杰,姜妙娜,裴德愷,等.梔子對大鼠出血壞死性胰腺炎早期內臟血流的影響[J].中國中藥雜志1993,18(7):431.

[12]謝文利,李宏捷,晉玉章.京尼平苷的降血糖作用研究[J].武警醫學院學報,2008,17(7):580.

[13]Suzuki,Yasuhiro,kondo. Antithromobotic effect of geniposide and genipin in the mouse thrombosis model[J].Plahta medica.,2001,67(9):807.

[14]國家藥典委員會.中國藥典[S].北京:中國醫藥科技出版社,2010.

[15]楊東愛,戴向東.RP-HPLC法測定益肝涼茶中梔子苷的含量[J].中藥新藥與臨床藥理,2004，15(4):274.

[16]關金鳳,于淑華,劉玉琴,等.反相高效液相色譜法測定蒙藥大梔子中梔子苷的含量[J].中國民族民間醫藥雜志,2001,10(6):355.

(收稿日期：2015-09-05)編輯：曾文雪

中圖分類號：R282

文獻標識碼：A

*基金項目：廣東省科技計劃項目(2012A030100017)。