HPV E6/E7 mRNA聯合液基薄層細胞學檢測在宮頸病變中的診斷價值

李景然，童克婷，朱健生(安徽醫科大學，合肥230032)

HPV E6/E7 mRNA聯合液基薄層細胞學檢測在宮頸病變中的診斷價值

李景然，童克婷，朱健生(安徽醫科大學，合肥230032)

摘要：目的評價人乳頭瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA檢測聯合液基薄層細胞學(TCT)方法在宮頸病變中的診斷價值。方法對750例高危型HPV DNA陽性患者分別進行TCT、HPVE6/E7 mRNA檢測和陰道鏡病理活檢，比較HPV E6/E7 mRNA在各宮頸病變中陽性率的差異，以及比較單獨檢測和聯合檢測在宮頸病變中診斷價值的差異。結果750例高危型HPV陽性患者進行陰道鏡活檢檢出宮頸上皮內瘤變(CIN)和宮頸癌293例，E6/E7 mRNA陽性患者占286例，各種宮頸病變(意義不明不典型鱗狀細胞、低度鱗狀上皮內瘤變、高度鱗狀上皮內瘤變、鱗狀癌變)患者HPV E6/E7 mRNA陽性率差異有統計學意義(P<0.05)。單用TCT檢出CIN陽性256例，單用E6/E7 mRNA檢出CIN陽性247例，兩者比較無統計學差異，單用TCT或E6/E7 mRNA檢測出CIN陽性率均低于聯合檢測(P均<0.05)。結論HPV E6/E7 mRNA檢測聯合TCT方法可降低宮頸病變的漏診率，優于單獨檢測。

關鍵詞：宮頸病變；人乳頭瘤病毒；液基細胞學

研究證實，人乳頭瘤病毒(HPV)持續感染宮頸上皮是宮頸癌發生的主要原因，HPV E6/E7 mRNA較人類乳頭瘤病毒L1蛋白或人類乳頭瘤病毒顆粒特異性更高，且E6/E7 mRNA可以體現HPV致癌基因的活動程度。液基薄層細胞學(TCT)是一種單層細胞涂片篩查技術，其具有高效性、高質性，結果清晰明了，并且采用TBS系統報告的報告方式，利于臨床醫生考慮患者病情時參考病理學結果。本文探討了HPV E6/E7 mRNA檢測聯合TCT方法在宮頸癌早期篩查中的診斷價值。現報告如下。

1資料與方法

1.1臨床資料選擇2013年1～6月安徽醫科大學附屬醫院收治的750例高危型HPV陽性患者，年齡25～60(41.2±5.6)歲，其中<30歲165例、30～40歲260例、>40～50歲254例、>50～60歲48例、>60歲23例。已婚624例，未婚126例。有生育史615例，無生育史135例。懷孕次數為8(2±1)次，均有性生活史。

1.2方法

1.2.1宮頸病變的TCT檢查檢查前3 d內不得使用陰道內藥物，不得沖洗陰道，1 d內無性行為，生理期不得檢查。用頸管刷收集頸管的脫落細胞，用塑料刮板收集宮頸外口的脫落細胞，將細胞輕輕洗入預先盛有Thin Prep細胞保存液的瓶子內[1]，經Thin Prep2000系統處理，將細胞與體液進一步分離，制成約2 cm的細胞薄層涂片，95%乙醇固定，巴氏染色。細胞學診斷采用TBS分級系統，分為未見上皮內細胞病變(NILM)、意義不明不典型鱗狀細胞(ASCUS)、低度鱗狀上皮內瘤變(LSIL)細胞、高度鱗狀上皮內瘤變(HSIL)細胞、鱗狀癌變(SCC)細胞、腺上皮內意義不明的非典型腺細胞[2]和腺癌細胞。以陰道鏡活檢診斷結果為金標準。用細胞學分析結果與標準及HPV E6/E7進行對照，細胞學陽性診斷包括ASCUS以上病變并進行分級，其準確性與組織學相差范圍為一級的原則，并且各種檢測均雙盲進行。進行陰道鏡活檢后若發現以上細胞進行分級處理。

1.2.2宮頸病變的病理學檢查陰道鏡下對病變最嚴重處多點取材活檢。陽性病理診斷:宮頸上皮內瘤變(CIN)Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ及宮頸癌,以病理學診斷CIN以上病變為金標準。

1.2.3宮頸病變的HPV E6/E7 mRNA檢測標本處理：將TCT檢測后剩余標本，離心棄上清液，用2 mL蒸餾水清洗后再次離心，棄上清液[3]，加入裂解劑(lysis mixture與proteinase K按1∶800混合，Diacarta公司，美國)，65 ℃水浴30 min，得到裂解液，待測[4]。可檢測HPV的16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、66亞型的E6/E7 mRNA的基因片段。

1.2.3統計學方法采用SPSS17.0統計軟件。計數資料采用百分數表示，組間比較采用χ2檢驗。P≤0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1750例高危型HPV陽性患者陰道鏡病理活檢結果見表1。377例NILM中檢出CIN陽性37例，373例TCT陽性患者中檢出CIN陽性248例，宮頸癌8例。

表1　750例高危型HPV陽性患者陰道鏡病理活檢結果(例)

2.2TCT檢測出HPV E6/E7 mRNA的陽性數 見表2。不同宮頸病變中E6/E7 mRNA的陽性率比較有統計學差異(P<0.05)。

表2　TCT檢測出HPV E6/E7 mRNA的陽性數及拷貝數

2.3病理學檢查出HPV E6/E7 mRNA陽性數及拷貝數見表3。不同宮頸病變E6/E7 mRNA的陽性率及拷貝數比較差異均有統計學意義。

表3　病理學檢查出HPV E6/E7 mRNA陽性數及拷貝數

2.4TCT或HPV E6/E7 mRNA單獨檢測與聯合檢測宮頸病變的比較見表4。

表4　TCT或E6/E7 mRNA單獨檢測

注：與聯合檢測比較，*P<0.05。

3討論

美國陰道鏡和宮頸病理學會發布的《子宮頸癌篩查異常婦女處理共識指南》中明確規定應定期用HPV-DNA分型檢測方法對30歲以上的婦女進行宮頸癌篩查。在檢測過程中，發現HPV-DNA分型檢測過程中出現較高的假陰性現象，而且假陰性現象隨著年齡增長而增加[3]。早期病毒癌基因為HPV的編碼區中E6/E7基因，病毒侵染宿主細胞后，HPV DNA自動整合到宿主細胞的DNA中，癌基因會高速表達，是癌細胞急速擴散的主要原因。癌基因的轉錄產物E6/E7 mRNA反映了基因表達的活性，因此，對癌基因E6/E7 mRNA的檢測可以了解癌基因是否整合到宿主DNA上，轉錄是否受到抑制。研究證實HPV的基因表達只有一條途徑[4](先轉錄，再翻譯)，因此，檢測E6/E7 mRNA是了解HPV表達情況的有效途徑，其將是研究宮頸癌的主要方式。TCT可以有效地提高宮頸癌的準確率，排除假陰性患者[5]。

本研究證實，各種宮頸病變患者HPV E6/ET mRNA陽性率差異有統計學意義。單獨采用HPV E6/ET mRNA檢查，有假陰性的存在。而TCT聯合HPV E6/ET mRNA檢測CIN及宮頸癌的陽性率高于單獨TCT或HPV E6/ET mRNA。提示TCT聯合HPV E6/ET mRNA既能掌握癌基因的活性狀態，又能了解細胞病變程度。互相彌補不足，提高了診斷效能。

參考文獻：

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[2] 劉鳳玲，張燕，李海玲.TCT結合高危型HPV-DNA檢測在宮頸癌早期篩查中的應用[J].中國婦幼保健,2012,27(25):3996-3997.

[3] 朱曉敏.LCT、HPV檢測及宮頸多點活檢在宮頸癌篩查的應用[J].中國社區醫師(醫學專業)，2012，14(26)：229-230.

[4] Benevolo M， Terrenato I， Mottolese M， et al. Diagnostic and prognostic validity of the human papillomavirus E6/E7 mRNA test in cervical cytological samples of HC2-positive patients[J]. Cancer Causes Control， 2011，22(6):869-875.

[5] 芮平.HPV-DNA亞型檢測聯合液基細胞學對宮頸癌篩查的臨床價值[J].中國性科學，2012，21(7):48-50.

(收稿日期:2014-02-06)

通信作者：朱健生

中圖分類號：R737.33

文獻標志碼：B

文章編號：1002-266X(2015)09-0052-02

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.09.020