丙型肝炎病原學不同檢測方法的臨床應用價值對比分析*

龍宏洋，葉玉芬，朱學強，王 涵

(廣東省珠海市香洲區人民醫院檢驗科 519070)

?

·論 著·

丙型肝炎病原學不同檢測方法的臨床應用價值對比分析*

龍宏洋，葉玉芬，朱學強，王 涵

(廣東省珠海市香洲區人民醫院檢驗科 519070)

目的 探討抗體、抗原及核酸檢測在丙型肝炎診斷中的應用價值。方法 收集2012年1月到2013年12月珠海市香洲區人民醫院篩查抗-HCV抗體陽性標本48份。用3種抗體試劑、2種抗原試劑及HCV-RNA復核檢測結果。結果 復核陽性麗珠37份，科華36份，新創36份，萊博21份，康潤18份，HCV-RNA 28份。3種抗體試劑復核均陰性的10份標本中檢出HCV-RNA陽性1份，萊博抗原陽性3份，康潤抗原陽性1份。3種抗體靈敏度均為96.4%，陽性預測值為72.9%～75.0%；2種抗原試劑靈敏度分別為40.0%和83.3%，陽性預測值分別為57.0%和83.3%。結論 丙型肝炎病毒抗體檢測具有較高的診斷靈敏度，但診斷特異性較低，對抗-HCV抗體陽性標本采用抗體加抗原模式進行復核對丙型肝炎診斷具有重要的價值，對有疑問的標本再用HCV-RNA進行確證，可預防誤診、漏診。

丙型肝炎病毒； 丙型肝炎病毒抗體； 丙型肝炎病毒抗原； 丙型肝炎病毒核酸

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的一種嚴重威脅人類健康的疾病，據世界衛生組織統計，全球HCV感染者超過1.7億，每年全球新發感染者約350萬人[1]。全國流行病學調查資料顯示，我國一般人群HCV抗體(抗-HCV)陽性率約為3.2%，中國約有4 000萬人感染HCV，約占全球總感染人數的1/4，居世界之首。在HCV感染者中，約80%的急性丙型肝炎患者無明顯癥狀，且在發病初期常被隱匿，這些感染者常發展成嚴重的肝硬化，甚至肝癌。此外，目前尚無HCV的預防疫苗，一旦感染HCV，僅有20%的患者能自發清除病毒，而潛伏的丙型肝炎患者不僅自身健康風險巨大，同時也是威脅社會公共衛生的隱患。控制HCV傳播，需依賴實驗室及時、準確的診斷，并盡早地進行有效的治療。目前臨床用于HCV的檢測方法主要有抗-HCV抗體檢測、HCV核心抗原檢測及核酸檢測。本研究通過采用不同的檢測方法對48份臨床抗-HCV抗體陽性標本進行檢測，探討不同病原學檢測方法在HCV感染診斷中的應用價值。現將研究結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 標本來源 收集2012年1月至2013年12月本院手術前、輸血前患者、產檢孕婦和門診疑似HCV感染患者抗-HCV抗體篩查陽性標本48份。所有標本用原批次抗體試劑雙孔復核陽性，收集雙份血清，其中一份以專用管收集用于HCV-RNA檢測，另一份于-20 ℃保存用于抗-HCV抗體、HCV核心抗原檢測。

1.2 儀器與試劑 所用儀器有美國Bio-Tek公司生產的ELX-800酶標儀、ELX-50洗板機，美國ABI公司生產的7500熒光定量聚合酶鏈反應(PCR)儀。實時熒光定量PCR檢測試劑由湖南圣湘生物科技有限公司提供。常規酶聯免疫吸附試驗(ELISA) 抗-HCV抗體篩查試劑為珠海麗珠試劑股份有限公司生產的抗-HCV檢測試劑盒(簡稱麗珠)。復核抗-HCV抗體的試劑有3種：麗珠試劑(批號201310512)，上海科華生物工程股份有限公司生產的抗-HCV抗體檢測試劑盒(簡稱科華，批號201308011)，英科新創(廈門)科技有限公司生產的HCV-Ab檢測試劑盒(簡稱新創，批號2013085808)；檢測HCV核心抗原的試劑有2種：山東萊博生物科技有限公司生產的HCV核心抗原檢測試劑盒(簡稱萊博，批號201308003)，湖南康潤藥業有限公司生產的HCV核心抗原檢測試劑盒(簡稱康潤，批號20130902)。所有試劑均在有效期內使用，儀器設備定期進行維護、校準。

1.3 檢測方法 3種抗-HCV抗體檢測方法均為間接ELISA，2種HCV核心抗原檢測方法均為雙抗體夾心法，由同一人在相同條件下嚴格按照試劑說明書進行操作，檢測HCV核心抗原、抗體。核酸檢測采用實時熒光定量PCR檢測技術，由廣州金域醫學檢驗中心有限公司完成，HCV-RNA水平小于500 拷貝為陰性，≥500 拷貝為陽性。

1.4 統計學處理 采用SPSS17.0統計學軟件進行數據處理與統計學分析，計數資料以例數與百分率表示，組間比較采用χ2檢驗；以α=0.05為檢驗水準，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 48份抗-HCV抗體初篩陽性標本各種試劑復核結果 所有試劑復核結果與抗體初篩結果比較差異均有統計學意義(P<0.05)；3種抗體檢測試劑的復核結果比較差異無統計學意義(P>0.05)；2種抗原檢測試劑的復核結果比較差異無統計學意義(P>0.05)；抗體檢測的陽性率高于HCV-RNA，但只有麗珠試劑與HCV-RNA檢測陽性率比較差異有統計學意義(P<0.05)；抗原檢測的陽性率低于HCV-RNA，但只有康潤試劑與HCV-RNA檢測陽性率比較差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

2.2 3種抗體試劑復核全部陰性的10份標本抗原及HCV-RNA檢測結果 10份抗體復核陰性的標本檢出HCV-RNA陽性1份，萊博抗原陽性3份，康潤抗原陽性1份，比較差異均無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表1 48份抗-HCV抗體陽性標本各種試劑復核結果[n(%)]

表2 3種抗體試劑復核全陰性標本抗原及 HCV-RNA檢測結果

2.3 抗體、抗原試劑檢測結果與HCV-RNA結果比較 3種抗體的診斷靈敏度、特異性、陽性預測值、陰性預測值比較差異均無統計學差異(P>0.05)；而抗原試劑中，康潤的靈敏度、特異性、陽性預測值、陰性預測值均高于萊博，差異有統計學意義(P<0.05)。抗體的診斷靈敏度及陰性預測值均高于抗原，差異有統計學意義(P<0.05)；而康潤抗原檢測的陽性預測值高于抗體，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 抗體、抗原試劑檢測結果與HCV-RNA結果的比較

3 討 論

丙型肝炎是我國常見的傳染病，由HCV感染引起，主要經輸血傳播，對人類健康危害極大。目前大部分醫院已經開展了HCV檢測項目，常規用于術前、輸血前及孕前產前檢查等。現階段HCV的檢測方法主要有3種，即抗體、核酸及抗原檢測。抗-HCV抗體檢測是最早確立的實驗室診斷方法，被廣泛用于HCV感染的臨床診斷、健康人群體檢和血液篩查[2]。HCV核心抗原幾乎與HCV-RNA同時出現，是HCV感染的早期標志，目前市售的HCV核心抗原檢測試劑盒多采用雙抗體夾心ELISA法來檢測血清總核心抗原或游離核心抗原。本研究結果顯示，48份抗體初篩陽性標本的抗體、抗原及HCV-RNA的復核結果比較差異有統計學意義(P<0.05)，且復核陽性率由大到小依次為抗體、HCV-RNA、核心抗原，與龍潤鄉等[3]研究結果相似。分析原因可能有：(1)抗-HCV抗體篩查存在較大的假陽性率，美國疾病預防控制中心(CDC)研究報道，在抗-HCV抗體陽性率小于10%的人群中，假陽性率平均為35%[4]。值得注意的是有5份標本3種抗體試劑檢測均為強陽性[樣本吸光度(OD)值/臨界值比值(S/CO值)大于9]而HCV-RNA復核為陰性，可能與抗體試劑盒的假陽性有關。(2)核心抗原因其水平較低，對檢測試劑和檢測人員的要求高，或由于標本中的抗-HCV抗體與用于核心抗原檢測的單克隆抗體競爭結合抗原而造成假陰性[5]。

本研究所選48份標本均為抗-HCV抗體陽性標本，理論上用抗體試劑復查時應顯示全陽性，但仍有10份(22.9%)標本3種抗體試劑檢測全陰性。這與王迅等[6]研究結果相似，45.53%的標本抗體復核陰性。與文獻[6]自動化初篩大量標本不同，本研究初篩與復核都為小批量、手工操作，由于初篩與復核有1種相同試劑，排除該因素，10份標本的初篩S/CO都小于3.8。作者認為可能是抗-HCV抗體降解所致，降解的發生可能與標本保存時間過長、保存溫度過高及反復凍融有關，也可能與手工操作存在的差異有關。在該10份抗-HCV抗體復核陰性標本中有1份標本的2種抗原試劑復核陽性，HCV-RNA復核陽性，結合該患者臨床出現黃疸、肝功能異常等癥狀，判斷此患者處于感染早期，抗體效價較低，單純用抗體試劑復核則有漏檢的可能。本研究還發現，假定HCV-RNA檢測為真陽性，3種抗體的靈敏度都為96.4%，陽性預測值為72.9%～75.0%，三者的靈敏度、特異性、陽性預測值、陰性預測值比較差異均無統計學意義(P>0.05)。抗原檢測中，康潤的靈敏度、特異性、陽性預測值、陰性預測值均優于萊博(P<0.05)。此外，抗體的診斷靈敏度及陰性預測值均高于抗原(P<0.05)，而抗原檢測的陽性預測值高于抗體(P<0.05)。然而，張健等[7]研究表明抗體與抗原試劑的檢測結果無明顯差異。

近年來關于丙型肝炎抗體檢測試劑的研究較多。因檢測抗-HCV抗體試劑盒的各生產廠家使用的HCV基因重組抗原種類、抗原區段及各區段的比例不同，所以不同廠家的試劑的靈敏度和特異性存在一定的差異，抗-HCV抗體的檢測結果不盡相同[8-9]。本研究顯示，3種抗體試劑的陽性檢出率比較差異無統計學意義(P>0.05)；但假陽性率高達32.1%(9/28)，陽性預測值低；同時漏檢了1份陽性標本，假陰性率為3.6%(1/28)。2種抗原檢測試劑檢出率比較差異無統計學意義(P>0.05)，但靈敏度、特異性等比較差異有統計學的意義，說明抗原試劑的質量在各廠家之間也存在差異。由此可見，僅用一種試劑判斷HCV感染需謹慎，HCV篩查陽性標本同樣需要進行確證。HCV的確證試驗一般有重組免疫印跡試驗(RIBA)和HCV-RNA檢測。RIBA是具有高特異性的抗-HCV抗體的確證試驗，但因試劑價格昂貴其在實際檢測中的應用受到了限制。而HCV-RNA檢測實驗操作復雜，容易交叉污染形成假陽性，且儀器、試劑同樣昂貴，仍然難以在基層實驗室推廣。我國CDC在HCV臨床診斷的相關規范中要求抗-HCV抗體陽性的標本需要采用原有試劑雙孔或原有試劑加另一種不同實驗原理或廠家的試劑進行復核試驗。國內已有研究對各種不同復核模式進行了探討[10-11]。

綜上所述，采用抗體雙孔或抗體加抗體的復核模式容易造成誤診或漏診。而抗原試劑有較高的陽性預測值，采用抗體加抗原的復核模式，對HCV的診斷具有重要的價值。對有疑問的標本再用HCV-RNA或RIBA進行確證，可預防誤診及漏診。

[1]Lauer GM，Walker BD．HePatitis C virus infection[J]．N Engl J Med，2001，345(1)：41-52．

[2]張瑞，李金明．丙型肝炎病毒感染臨床檢測程序的建立及結果報告與解釋[J]．中華檢驗醫學雜志，2010，33(10)：990-992．

[3]龍潤鄉，楊蓉，白慧珠，等．HCV抗體陽性樣品核酸及核心抗原檢測分析[J]．醫學研究雜志，2010，39(12)：41-43．

[4]Alter MJ,Kuhnert WL,Finelli L,et al.Guidelines for laboratory testing and result reporting of antibody to hepatitis C virus.Centers for Disease Control and Prevention[J]．MMWR Recomm Rep，2003，52(RR-3)：1-13．

[5]譚曉霞，紀勇平，駱昊翠．丙型肝炎病毒核心抗原檢測的臨床應用價值[J]．檢驗醫學，2010，25(2)：134-136．

[6]王迅，劉宇寧，賈堯，等．丙型肝炎病毒抗體篩查陽性結果確證方案的探討[J]．中國輸血雜志，2008，21(4)：255-258．

[7]張健，劉宜仲，楊珊，等．HCV核心抗原檢測在血液篩查中的初步研究[J]．現代檢驗醫學雜志，2012，27(2)：110-111．

[8]孟慶玲，魯健，邱豐，等．丙型肝炎IgG抗體ELISA診斷試劑比對分析[J]．中華實驗和臨床病毒學雜志，2013，27(3)：221-223．

[9]傅立強，桑列勇，蔣國瑾．ELISA試劑檢測抗HCV反應性結果分析[J]．檢驗醫學，2012，27(7)：588-591．

[10]鮮玉萍，楊紅英．丙型肝炎核心抗原檢測的臨床意義[J]．檢驗醫學與臨床，2012，9(18)：2320-2321．

[11]金一鳴，方志紅，曹誼．血液篩查中丙型肝炎病毒檢測方法的應用評價[J]．檢驗醫學與臨床，2013，10(5)：552-553．

Comparative analysis on clinical application values of different methods for detecting hepatitis C pathogens*

LONGHong-xiang,YEYu-fen,ZHUXue-qiang,WANGHan

(DepartmentofClinicalLaboratory,XiangzhouDistrictPeople′sHospital,Zhuhai,Guangdong519070,China)

Objective To investigate the application value of antibody,antigen and nucleic acid detections in the diagnosis of hepatitis C.Methods 48 anti-HCV positive specimens in our hospital from Jan. 2012 to Dec. 2013 were collected.The detection results were re-detected by HCV-RNA,3 kinds of antibody reagent and 2 kinds of antigen reagent.Results The positive result of re-detection was in 37 specimens by Lizhu,in 36 specimens by Kehua,in 36 specimens by Xinchuang,in 21 specimens by Laibo,in 18 specimens by Kangrun,in 28 specimens of HCV-RNA.Among 10 specimens of negative result re-detected by 3 kinds of antibody reagent,1 specimen of HCV-RNA positive,3 specimens of Laibo antigen positive and 1 specimen of Kangrun positive were detected out.The sensitivities of 3 kinds of antibody all were 96.4%,the positive predictive value was 72.9%-75.0%;the sensitivity of 2 kinds of antigen reagent was 40.0% and 83.3% respectively,and the positive predictive value was 57.0% and 83.3% respectively.Conclusion The HCV antibody detection could have the higher diagnostic sensitivity,but its specificity may be lower.Re-detecting the anti-HCV positive samples by using antibody plus antigen model could be of great value to the diagnosis of hepatitis C.Using HCV-RNA for confirming the questionable specimens could be prevent misdiagnosis and missed diagnosis.

hepatitis C virus; hepatitis C virus antibody； hepatitis C virus antigen； hepatitis C virus antigen RNA

廣東省珠海市科技計劃項目(2012D0401990008)。

龍宏洋，男，本科，主管檢驗師，主要從事臨床檢驗方面研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.05.008

A

1672-9455(2015)05-0597-03

2014-11-10

2014-12-28)