痰熱清聯(lián)合哌拉西林/他唑巴坦對(duì)產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶肺炎克雷伯菌的體外抑制作用

李亞娜，陶慶春，蘇建榮

(1.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100050；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100029)

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·論 著·

痰熱清聯(lián)合哌拉西林/他唑巴坦對(duì)產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶肺炎克雷伯菌的體外抑制作用

李亞娜1，陶慶春2△，蘇建榮1

(1.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100050；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100029)

目的 觀察痰熱清注射液及其與哌拉西林/他唑巴坦注射液(又稱特治星)聯(lián)合應(yīng)用對(duì)體外產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的抑菌效果，為耐藥菌株的防治提供新方式。方法 按照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)推薦的肉湯稀釋法，對(duì)產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌進(jìn)行體外抑菌試驗(yàn)，分析痰熱清注射液?jiǎn)斡眉芭c特治星聯(lián)合應(yīng)用(間隔6 h)的抑菌效果。結(jié)果 痰熱清注射液對(duì)產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌的最小抑菌濃度(MIC)為750 μL/mL；特治星對(duì)產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌的MIC為28.125 μg/mL；加入痰熱清作用6 h后再加入特治星，當(dāng)痰熱清最終濃度大于450 μL/mL時(shí)，特治星的用量比單用時(shí)至少減少5倍。結(jié)論 痰熱清與特治星間隔6 h聯(lián)合應(yīng)用具有明顯的抑菌效果，能大幅度地減少抗菌藥物的用量，這對(duì)臨床治療的改善和減少耐藥菌株的產(chǎn)生都具有積極意義。

肺炎克雷伯菌； 超廣譜β-內(nèi)酰胺酶； 痰熱清注射液； 抑菌試驗(yàn)

近年來(lái)，多重耐藥或者泛耐藥細(xì)菌不斷出現(xiàn)，如產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌，耐萬(wàn)古霉素腸球菌(VRE)，多重耐藥銅綠假單胞菌及全耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌等，給臨床治療及感染控制帶來(lái)了很大的困難。隨著中醫(yī)研究的不斷深入和中西醫(yī)治療的不斷發(fā)展，中藥治療的優(yōu)勢(shì)不斷凸顯。中藥痰熱清具有清熱解毒，提高機(jī)體免疫功能等多種功效，在治療呼吸道感染等方面具有良好的效果[1-3]。本研究采用中藥痰熱清聯(lián)合哌拉西林/他唑巴坦注射液(又稱特治星)，按照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)[4]推薦的肉湯稀釋法，對(duì)產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌進(jìn)行體外抑菌試驗(yàn)，觀察其對(duì)產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌的抑菌效果。現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 菌株來(lái)源 產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌來(lái)自臨床分離菌株，標(biāo)本于2011年3月11日取自北京中醫(yī)藥大學(xué)附屬東直門醫(yī)院送檢的痰標(biāo)本；質(zhì)控菌為肺炎克雷伯菌ATCC 700603，由上海復(fù)祥生物科技有限公司提供。

1.2 儀器與試劑 痰熱清注射液(上海凱寶藥業(yè)股份有限公司)，特治星(石藥集團(tuán)中諾藥業(yè)有限公司)；VITEK 32全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)(法國(guó)生物梅里埃公司)，生物安全柜(北京五洲東方科技發(fā)展有限公司)，電熱恒溫培養(yǎng)箱(北京科偉醫(yī)療器械廠)。

1.3 方法

1.3.1 產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌的分離與鑒定 痰標(biāo)本嚴(yán)格按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第3版標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分離培養(yǎng)。采用VITEK 32全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)進(jìn)行鑒定及表型篩選，并按照CLSI推薦的紙片擴(kuò)散法進(jìn)行確認(rèn)。

1.3.2 試驗(yàn)分組 試驗(yàn)分為5組，第1組：痰熱清濃度對(duì)倍稀釋組；第2組：痰熱清濃度遞減組；第3組：特治星組；第4組：痰熱清+特治星組(間隔6 h)；第5組：痰熱清+特治星組(間隔6 h)。

1.3.3 抑菌試驗(yàn) 第1組采用對(duì)倍稀釋法，35 ℃培養(yǎng)24 h后，確定痰熱清的最小抑菌濃度(MIC)值；第2組在第1組結(jié)果的基礎(chǔ)上采用梯度稀釋法，35 ℃培養(yǎng)24 h后進(jìn)一步確定痰熱清的MIC值；第3組采用對(duì)倍稀釋法，35 ℃培養(yǎng)24 h后測(cè)定特治星的MIC值；第4、5組為二者聯(lián)合應(yīng)用，各自分為10個(gè)小組，在痰熱清作用6 h后再加入特治星，其中第4組采用雙方對(duì)倍稀釋法，第5組痰熱清采用梯度遞減稀釋法、特治星采用對(duì)倍稀釋法，35 ℃培養(yǎng)24 h后對(duì)抑菌情況進(jìn)行測(cè)定。各組痰熱清和特治星濃度，見表1～2。

表1 各組痰熱清濃度(μL/mL)

表2 各組特治星濃度(μg/mL)

2 結(jié) 果

2.1 各組試驗(yàn)現(xiàn)象 第1組的管1無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，管2～10均渾濁；第2組管1～4無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，管5～10均渾濁；第3組管1～6無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，管7～10均渾濁；第4組的第1小組前2管無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，后8管渾濁，第2～10小組均為第1管無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，2～10管渾濁；第5組的第1小組為前6管無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，后4管渾濁，第2～4小組均為前5管無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，后5管渾濁，第5小組為前3管無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，后7管渾濁，第6～10小組為前兩管無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，后8管渾濁。

2.2 抑菌試驗(yàn)結(jié)果 痰熱清注射液對(duì)產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌的MIC值為750 μL/mL，特治星對(duì)產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌的MIC值為28.125 μg/mL；當(dāng)加入痰熱清作用6 h后再加入特治星，痰熱清最終濃度大于450 μL/mL時(shí)，可以使特治星的用量較單用時(shí)至少減少5倍。其作用效果見圖1。

注：虛線代表單用特治星的MIC值(MIC=28.125 μg/mL)。

圖1 痰熱清聯(lián)合特治星(間隔6 h)抑菌效果曲線圖

3 討 論

痰熱清注射液由黃芩、熊膽粉、山羊角、金銀花、連翹組成，具有清熱解毒、解痙、鎮(zhèn)靜止咳、祛痰平喘、抗菌抗病毒及免疫調(diào)節(jié)等作用。其中黃芩為君藥，具有瀉火解毒、清熱燥濕的功效；熊膽粉、山羊角為臣藥，其中熊膽粉的有效成分熊去氧膽酸與鵝去氧膽酸具有清熱、平肝及明目的功效，二者都有加強(qiáng)黃芩功效的作用；連翹具有清熱解毒、疏風(fēng)散結(jié)的功效；金銀花具有解表、宣肺和清熱解毒的作用[5]。有報(bào)道顯示，痰熱清聯(lián)合阿奇霉素治療小兒支原體性支氣管肺炎的療效優(yōu)于單獨(dú)使用阿奇霉素[6-7]。另有報(bào)道表明，在銅綠假單胞菌、鮑曼不動(dòng)桿菌導(dǎo)致的肺部感染治療中，痰熱清聯(lián)合西藥更具優(yōu)勢(shì)[8-9]，此外，有研究表明，單用痰熱清或痰熱清聯(lián)合利巴韋林治療手足口病的效果無(wú)明顯差異，但均優(yōu)于單用利巴韋林的療效[10]。中藥以其多方面的抑菌殺毒作用，在臨床治療中的重要性日益凸顯，成為臨床治療不可或缺的一部分。

本研究結(jié)果顯示，痰熱清作用于產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌6 h后再加入特治星，當(dāng)痰熱清最終濃度大于450 μL/mL時(shí)，可使特治星的用量比單用時(shí)至少減少5倍。與同時(shí)試驗(yàn)的二者同時(shí)加入相比，間隔6 h可以更大幅度地減少抗菌藥物的用量，減少二者同時(shí)應(yīng)用時(shí)可能發(fā)生的互相干涉現(xiàn)象，更好地發(fā)揮各自的功效。中藥的應(yīng)用首先降低了細(xì)菌的耐藥性，從而使抗菌藥物的抑菌效果更加明顯。其根本原因可能是中藥可以消除耐藥菌的R質(zhì)粒，或者妨礙甚至阻斷R質(zhì)粒在細(xì)菌間的傳播途徑，抑制細(xì)菌主動(dòng)外排泵，抑制耐藥基因的表達(dá)，以及干擾細(xì)菌的代謝。同時(shí)痰熱清能增強(qiáng)人體自身的免疫功能，使人體對(duì)外界的抵抗力增強(qiáng)，從而達(dá)到降低細(xì)菌耐藥性的作用。

綜上所述，痰熱清與特治星間隔6h聯(lián)合應(yīng)用具有明顯的抑菌效果，能大幅度地減少抗菌藥物的用量，這對(duì)臨床治療的改善和減少耐藥菌株的產(chǎn)生都具有積極意義。在后續(xù)研究中，需對(duì)濃度450～750μL/mL的痰熱清聯(lián)合特治星的抑菌作用進(jìn)行試驗(yàn)，并且可以加大試驗(yàn)菌株量，以更完整地表述痰熱清與特治星聯(lián)合應(yīng)用的抑菌效果，確保對(duì)臨床用藥的指導(dǎo)意義。

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Bacteriostasis effect in role of Tanreqing combined Tazocin against ESBLs-producing K.pneumoniae

LIYa-na1,TAOQing-chun2△,SUJian-rong1

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedBeijingFriendshipHospital,CapitalMedicalUniversity,Beijing100050,China;2.DepartmentofClinicalLaboratory,ThirdAffiliatedHospitalofBeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029,China)

Objective To observe the bacteriostatic effect in vitro of Chinese medicine Tanreqing Injection combined with Piperacillin/Tazobactam(Tazocin) against ESBLs-producingKlebsiellapneumoniae(K.pneumoniae),and to provide a new way for the prevention and treatment of drug-resistant strains.Methods According to the broth dilution method recommended by the American Clinical and Laboratory Standard Institute (CLSI),the in vitro bacteriostatic test was performed on ESBLs-producingK.pneumoniaefor analyzing the bacteriostasis effect of Tanreqing Injection and the combination use of Tanreqing Injection and Tazocin (interval of 6 h).Results The minimal inhibitory concentration(MIC) of Tanreqing Injection and Tazocin against ESBLs-producingK.pneumoniaewere 750 μL/mL and 28.125 μg/mL respectively.In the combination use of Tanreqing Injection and Tazocin (interval of 6 h),when the final concentration of Tanreqing was more than 450 μL/mL,the dose of Tazocin was decreased by at least 5 times than its single use dose.Conclusion The combination use of Tanreqing Injection and Tazocin (interval of 6 h) has significant bacteriostatic effect and reduce the dose of antibacterial drugs by a large margin,which could possess an active significance in improving the clinical treatment and reducing the emergence of drug-resistant strains.

Klebsiellapneumoniae； extended spectrum β-lactamases； Tanreqing Injection； bacteriostatic test

李亞娜，女，碩士，檢驗(yàn)師，主要從事臨床免疫與微生物研究?！?/p>

，E-mail:taoqc@sina.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.05.020

A

1672-9455(2015)05-0631-02

2014-10-15

2014-11-20)