UniCel DxH 推染片一體機(jī)染色條件的設(shè)置及效果評價

邢 瑩，屈晨雪，陸 遙，汪 潤，李智慧，王玎玲，宋一楠，朱 鷹

(北京大學(xué)第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100034)

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·臨床研究·

UniCel DxH 推染片一體機(jī)染色條件的設(shè)置及效果評價

邢 瑩，屈晨雪△，陸 遙，汪 潤，李智慧，王玎玲，宋一楠，朱 鷹

(北京大學(xué)第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100034)

目的 探索UniCel DxH推染片一體機(jī)的最佳染色條件，并對染色效果進(jìn)行評價。方法 通過改變?nèi)鹗?吉姆薩復(fù)合染液的染色時間、染液配比等方法獲取推染片一體機(jī)的最佳染色條件，在顯微鏡下觀察并評價不同方法制備的血涂片的染色效果。結(jié)果 延長緩沖液的染色時間可增強(qiáng)血涂片的著色效果，再在緩沖液中加入5%～10%的染液后可進(jìn)一步提高血涂片的染色效率，且對于血細(xì)胞形態(tài)的識別可以達(dá)到手工制片染色的效果。結(jié)論 在適宜的染色條件下，UniCel DxH制備的血涂片基本可以達(dá)到與手工染色相同的效果，對血細(xì)胞異常形態(tài)的識別較準(zhǔn)確，各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立適宜的最佳染色方案。

瑞氏-吉姆薩染色； 白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)； 血液推染片機(jī)

全自動血細(xì)胞分析儀的廣泛應(yīng)用大大地提高了檢驗(yàn)效率，但是儀器檢查只能作為一種篩查手段，很多情況下仍需要進(jìn)行顯微鏡復(fù)檢。由于各個實(shí)驗(yàn)室執(zhí)行的復(fù)檢規(guī)則不同，其血涂片的復(fù)檢率也不盡相同，多數(shù)在10%～50%[1-2]。對于一些大型綜合性醫(yī)院而言，往往標(biāo)本量大且復(fù)檢率高，傳統(tǒng)的手工制片和染色耗時費(fèi)力。近年來，多個血細(xì)胞分析儀生產(chǎn)廠家都推出了全自動的推片機(jī)和染片機(jī)，與血細(xì)胞分析儀組成工作站，將需要復(fù)檢的標(biāo)本直接通過推染片機(jī)即可完成推片和染色過程，可節(jié)約大量的人力資源。目前，我國已有多家實(shí)驗(yàn)室陸續(xù)實(shí)現(xiàn)了上述血細(xì)胞分析儀的“流水線”。然而，推染片機(jī)制備的血涂片質(zhì)量如何，是臨床實(shí)驗(yàn)室最為關(guān)心的問題，目前相關(guān)研究還比較缺乏。本研究以本實(shí)驗(yàn)室的UniCel DxH推染片一體機(jī)為例，探討全自動推染片機(jī)使用時最佳染色條件的設(shè)置并對染色效果進(jìn)行評價。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 血標(biāo)本采集自本實(shí)驗(yàn)室臨床檢測剩余標(biāo)本。

1.2 儀器與試劑 UniCel DxH 推染片一體機(jī)及其配套試劑(美國貝克曼庫爾特公司)，瑞氏-吉姆薩復(fù)合染液(珠海貝索公司)，Olympus CX31雙目顯微鏡(日本奧林巴斯光學(xué)工業(yè)株式會社)。

1.3 方法

1.3.1 染色方法 通過不斷改變?nèi)鹗?吉姆薩復(fù)合染液的染色時間、染液配比等方法，尋找最佳的染色方案以達(dá)到滿意效果。首先參考染液說明書推薦的方法(方法A)進(jìn)行染色；然后通過不斷嘗試，延長染缸2緩沖液的染色時間(方法B)。此外，由于UniCel DxH推染片一體機(jī)可以改變?nèi)靖字腥疽号c緩沖液的比例，進(jìn)一步在2號染缸即緩沖液中加入5%～10%的染液(方法C)。見表1。

表1 不同染色方法染色條件設(shè)置

1.3.2 評價標(biāo)準(zhǔn) 紅細(xì)胞染成淡粉紅色，白細(xì)胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)(細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì))著色清晰，能明顯鑒別不同種類的血細(xì)胞，包括原始細(xì)胞、不成熟粒細(xì)胞、有核紅細(xì)胞等。

注：A為單核細(xì)胞，B為中性粒細(xì)胞，C為嗜酸性粒細(xì)胞。

圖1 方法A染色效果圖(瑞氏-吉姆薩染色，×1 000)

2 結(jié) 果

將UniCel DxH推染片一體機(jī)制備的血涂片置于顯微鏡下確認(rèn)，結(jié)果顯示：采用方法A染色后的血涂片中白細(xì)胞的細(xì)胞核著色偏淺，以單核細(xì)胞最為明顯，見圖1；采用方法B染色后著色效果增強(qiáng)，見圖2；采用方法C染色后可以在較短時間內(nèi)加強(qiáng)染色效果。研究發(fā)現(xiàn)，方法B和方法C均能得到很好的染色效果，對于異常細(xì)胞的識別(如異型淋巴細(xì)胞、不成熟粒細(xì)胞、原始細(xì)胞等)也比較準(zhǔn)確，可以滿足臨床工作的需要。

注：A為中性粒細(xì)胞，B為淋巴細(xì)胞，C為嗜酸性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞。

圖2 方法B染色效果圖(瑞氏-吉姆薩染色，×1 000)

3 討 論

自動化的染片機(jī)在使用時需要自定義染色步驟，其方法與手工染色存在較大的差異。一般情況下，染片機(jī)中放置數(shù)個染缸，血涂片分別在盛有染液、緩沖液及去離子水的染缸中浸泡后完成染色。本實(shí)驗(yàn)室的UniCel DxH推染片一體機(jī)內(nèi)部共有5個染缸，可以設(shè)置每個染缸中加入的成分(如染液、緩沖液或去離子水)，并且可以對其中的成分配比進(jìn)行調(diào)整。由于不同實(shí)驗(yàn)室的溫度、濕度等環(huán)境條件不同，可能同一型號的染片機(jī)也無法使用相同的條件設(shè)置，需要各實(shí)驗(yàn)室摸索出適合本實(shí)驗(yàn)室的染色條件。

本研究在不斷嘗試的過程中總結(jié)出以下幾點(diǎn)經(jīng)驗(yàn)：(1)白細(xì)胞的細(xì)胞核是否清晰是判斷血涂片染色效果的重點(diǎn)，而細(xì)胞核著色以單核細(xì)胞最為困難，其次為粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞，所以觀察時應(yīng)著重以單核細(xì)胞為參照。(2)增加細(xì)胞的著色效果可以通過兩種方法來實(shí)現(xiàn)。第一是延長在染液或緩沖液中的浸泡時間，第二是在緩沖液中加入一些染液。但是有的染片機(jī)無法改變?nèi)靖字谐煞值呐浔?如美國貝克曼庫爾特公司LH755染片機(jī))，因此只能采取第一種方法。在調(diào)整過程中要循序漸進(jìn)，盡量不要同時改變多個設(shè)置，否則不易發(fā)現(xiàn)影響染色效果的因素。(3)染色的過程中，血涂片在1號染缸即染液中浸泡的目的是固定和附著染液，這個過程不需要太長的時間，必須在2號染缸即緩沖液中浸泡才能完成著色。如果染色偏酸可以減少在緩沖液中的浸泡時間或去離子水的沖洗時間，反之亦然。因?yàn)槿旧珪r1號缸中的染液會被不斷帶入2號缸中，染色效果也會隨之加強(qiáng)。(4)儀器與手工方法的染色效果有時存在差異，如嗜酸性顆粒通常比手工染色更紅，單核和淋巴細(xì)胞的胞質(zhì)偏藍(lán)。(5)需要考慮實(shí)驗(yàn)室的濕度，濕度太大時需要適當(dāng)延長血涂片的干燥時間和染色時間。(6)染缸中的染液、緩沖液或去離子水要根據(jù)標(biāo)本量定期更換，染缸也需要定期清洗，每1～2周要從儀器中取出徹底清潔1次。

儀器制備的血涂片細(xì)胞形態(tài)都清晰可辨，對于異常細(xì)胞的識別尚未發(fā)現(xiàn)漏檢情況。由于目前國內(nèi)、外相關(guān)的研究和報道較少[4-9]，還有待于更多的研究來評價和驗(yàn)證。儀器制片的優(yōu)點(diǎn)在于節(jié)約勞動力且效果比較穩(wěn)定，只要找到最佳的染色條件并做好儀器的維護(hù)保養(yǎng)，就可以明顯地提高工作效率。而且，儀器制備的血涂片分布均勻、細(xì)胞形態(tài)規(guī)整，染色后血涂片上的染液沉渣也很少。但是，儀器染色的流程與手工不同，染色效果也略有差異。因此，在使用初期需要與手工方法進(jìn)行比對，尤其對于一些異常細(xì)胞，如原始細(xì)胞、異型淋巴細(xì)胞等要重點(diǎn)觀察。因?yàn)樵技?xì)胞染色質(zhì)細(xì)致不易著色，當(dāng)數(shù)量較多時采用儀器的固有設(shè)置或許無法達(dá)到滿意的效果。所以，手工制片和染色不能完全摒棄，必要時需要用傳統(tǒng)方法進(jìn)行驗(yàn)證。

綜上所述，實(shí)驗(yàn)室在應(yīng)用全自動推染片機(jī)時，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況建立適合本實(shí)驗(yàn)室的染色方案。在染色條件設(shè)置合理的情況下，儀器制備的血涂片基本可以達(dá)到與手工染色相同的效果。而且，儀器操作可以實(shí)現(xiàn)自動化、批量化，染色的效果也較固定，非常適合應(yīng)用于復(fù)檢率高的大型醫(yī)院，可大大節(jié)約人力消耗，提高工作效率。

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10.3969/j.issn.1672-9455.2015.05.040

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1672-9455(2015)05-0676-02

2014-08-02

2014-10-14)

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