酶聯免疫反應加速儀在麻疹病毒IgM抗體檢測中的應用

姜波濤

(哈爾濱醫科大學附屬第一醫院感染科化驗室，哈爾濱 150001)

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·臨床研究·

酶聯免疫反應加速儀在麻疹病毒IgM抗體檢測中的應用

姜波濤

(哈爾濱醫科大學附屬第一醫院感染科化驗室，哈爾濱 150001)

目的 探討酶聯免疫反應加速儀在麻疹病毒IgM抗體檢測中的應用價值。方法 選取2013年6～12月哈爾濱醫科大學附屬第一醫院兒科疑似麻疹病例血清238份，麻疹病毒IgM抗體陽性血清1份，在酶聯免疫吸附試驗中分別采用常規溫育法(常規法)和酶聯免疫反應加速儀法(加速法)進行麻疹病毒IgM抗體的檢測，比較兩種方法在檢測麻疹病毒IgM抗體的重復性、靈敏度及特異性。結果 加速法的變異系數(CV)為2.86%～9.52%，靈敏度為97.40%，特異度為100.00%，均符合試劑盒標準；且加速法和常規法對麻疹病毒IgM的定量檢測結果呈正相關(P<0.05)。結論 酶聯免疫反應加速儀在麻疹病毒IgM抗體檢測中，各項指標均符合試劑盒要求，可應用于臨床檢測。

酶聯免疫反應； 酶聯免疫反應加速儀； 麻疹病毒； IgM

麻疹是由麻疹病毒引起的一種以發熱、呼吸道其他癥狀和全身斑丘疹為特征的急性病毒性傳染病[1]。目前最常用于檢測麻疹病毒IgM抗體的方法是酶聯免疫吸附試驗(ELISA)，該方法成本低廉，操作簡單，但整個檢測過程需耗時3 h。國內已有報道，ELISA加速儀在檢測乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)中可以有效縮短檢測時間。本研究將ELISA加速儀用于檢測麻疹病毒IgM抗體，以探討其在麻疹病毒IgM抗體檢測中的作用。現將相關研究結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 標本來源 2013年6～12月本院兒科疑似麻疹病例血清238份，麻疹病毒IgM抗體陽性血清1份(由哈爾濱市疾病預防控制中心提供)。

1.2 儀器與試劑 ELISA加速儀(四川諾亞醫療科技有限責任公司研制，型號：NY/MMJ)、酶標儀(奧地利安圖斯)、37 ℃電熱恒溫培養箱(上海精宏實驗設備有限公司)、全自動立式洗板機(鄭州基波新科技有限公司)。所有試劑均購自珠海海泰生物制藥有限公司。

1.3 方法

1.3.1 檢測方法 具體操作方法嚴格按《全國臨床檢驗操作規程》[2]及儀器與試劑盒使用說明書進行。使用常規溫育法(簡稱常規法)，37 ℃恒溫箱第1步孵育60 min、第2步孵育60 min，顯色30 min；而使用ELISA加速儀(簡稱加速法)，第1步孵育30 min、第2步孵育30 min，顯色15 min，其余步驟及操作完全一致。所有標本均經實時熒光定量聚合酶鏈反應(PCR)檢測。

1.3.2 重復性試驗 將麻疹病毒IgM抗體陽性血清倍比稀釋,使用同一批號麻疹病毒IgM抗體檢測試劑盒,分別用加速法和常規法對樣本進行檢測，每份樣本檢測20次。

1.3.3 相關性分析 在疑似麻疹病例的血清中隨機抽取56份標本，分別用常規法和加速法進行檢測，結果進行相關性分析。

2 結 果

2.1 重復性試驗結果 經倍比稀釋的麻疹病毒IgM抗體陽性血清分別采用加速法和常規法進行檢測，定性結果相同；在各不同稀釋倍數下，兩種方法所測血清麻疹病毒IgM抗體的樣本/臨床值比值(S/CO值)比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；兩種方法的變異系數(CV)均小于15%，符合試劑盒的規定。見表1。

表1 不同稀釋倍數麻疹病毒IgM抗體陽性血清 兩種方法檢測結果

注：+表示陽性，-表示陰性。

2.2 相關性分析結果 相關性分析結果顯示，加速法和常規法對麻疹病毒IgM的檢測結果呈正相關(回歸方程為Y=1.016X-0.11，P<0.05)。見圖1。

圖1 兩種方法檢測麻疹病毒IgM相關性分析

2.3 靈敏度和特異度 經參考法實時熒光定量PCR檢測，疑似麻疹患者的238份血清中，192份為陽性，列為實驗組；46份為陰性，列為對照組。實驗組和對照組均采用常規法和加速法檢測麻疹病毒IgM抗體，加速法和常規法的靈敏度分別為97.40%、96.35%，兩種方法的特異度均為100.00%，兩種方法的靈敏度與特異度比較差異均無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 兩種方法的檢測靈敏度與特異度

注：+表示陽性，-表示陰性。

3 討 論

麻疹是一種嚴重危害人類健康的傳染病,據世界衛生組織報告，每年約有4 400萬麻疹患者,并有100萬兒童死于麻疹。1954年Enders與Peebles應用人胚腎細胞培養麻疹病毒獲得成功之后，多位學者開始研制麻疹疫苗以控制麻疹的傳染[3]。我國于1965年開始使用麻疹減毒活疫苗,可靠地保護了絕大多數9～12個月乃至年齡更大的兒童[4]。然而，由于麻疹疫苗的廣泛使用，接觸野毒株的機會少，體內抗體水平逐年減少，最終可導致不能完全抵御麻疹病毒的侵襲，出現不典型的臨床表現[5]。于是有效的檢測方法對麻疹的診斷和及時的治療起著重要作用。

麻疹病毒檢測的最直接方法是病毒分離，然而其操作過于復雜，且對標本有嚴格的要求，難以在醫院大面積地推廣。分子生物學手段檢測麻疹病毒核酸的方法也開始運用于實驗室診斷，但是多數實時熒光定量PCR檢測麻疹病毒RNA時有一定的概率出現假陽性和假陰性[6]，且成本較高。目前，臨床主要應用ELISA檢測患者血清中麻疹特異性抗體IgM，該方法敏感性和特異性均較好，但患者血清IgM的陽性率與取血時間有關[7]。一般患者在出現皮疹后3 d至4周內取血，麻疹病毒特異性IgM抗體的陽性率達最高。

ELISA加速儀是基于傳統的孵育方法設計出來的。它綜合采用了先進的正溫度系數(PTC)熱敏陶瓷加熱熱風恒溫技術，利用高頻電磁波對生物分子的生化作用補充能量，并將反應試劑進行內置振蕩，從而穩定地加速了反應過程并減少了人工操作程序和時間。常規ELISA因簡單、易于操作、且準確度高而備受青睞，然而其耗時過長。ELISA加速儀很好地克服了這一缺陷[8]，在不影響實驗結果的前提下將整個實驗時間約縮短了一半，有效地提高了檢測效率。

本研究結果顯示，在重復性方面，兩種方法比較差異無統計學意義(P>0.05)；相關分析結果顯示，兩種方法對麻疹病毒IgM的檢測結果呈正相關(P<0.05)；兩種方法均具有較高的靈敏度與特異度，加速法的靈敏度和特異度分別為97.40%、100.00%，常規法分別為96.35%和100.00%，兩種方法的靈敏度和特異度比較差異均無統計學意義(P>0.05)。表明采用加速法對麻疹病毒IgM進行檢測不會影響檢測結果，同時可以減少檢測時間，提高檢測效率。

綜上所述，將ELISA加速儀運用于麻疹病毒IgM的檢測不會對檢測結果造成影響，同時可以大幅度地縮短檢測時間，提高檢測效率，值得在臨床中推廣應用。

[1]逯光文，高福，嚴景華．麻疹病毒受體與病毒侵入[J]．生物工程學報，2013，29(1)：1-9．

[2]葉應嫵，王毓三，申子瑜．全國臨床檢驗操作規程[M]．3版．南京：東南大學出版社，2006：630-631．

[3]Centers for Disease Control and Prevention(CDC)．Global control and regional elimination of measles,2000-2011[J]．MMWR Morb Mortal Wkly Rep，2013，62(2)：27-31．

[4]Himan AR.中國麻疹控制策略的建議[J]．中國計劃免疫，2002，8(2)：111-115．

[5]Martin DB，Weiner LB，Nieburg PI，et al．Atypical measles in adolescents and young adults[J]．Ann Intern Med，1979，90(6)：877-881．

[6]楊貴清，卓菲，劉衛民，等．基于M基因構建的麻疹病毒實時熒光PCR檢測技術[J]．中國衛生檢驗雜志，2012，22 (8)：1843-1847．

[7]李軼平．麻疹病毒檢測技術進展[J]．中國衛生檢驗雜志，2011，21(6)：1587-1588．

[8]耿珍，劉銘．酶聯免疫反應加速儀在巨細胞病毒IgG 抗體檢測中的應用[J]．中國計劃生育學雜志，2013，21(5)：340-342．

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.05.044

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1672-9455(2015)05-0684-02

2014-09-16

2014-11-28)