外周血細胞因子對慢性乙型肝炎患者療效評判分析

芮志蓮，王永忠

(1.江蘇省溧陽市人民醫院檢驗科 213300；2.江蘇省常州市第三人民醫院檢驗科 213000)

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·臨床研究·

外周血細胞因子對慢性乙型肝炎患者療效評判分析

芮志蓮1，王永忠2

(1.江蘇省溧陽市人民醫院檢驗科 213300；2.江蘇省常州市第三人民醫院檢驗科 213000)

目的 探討慢性乙型肝炎患者外周血細胞因子對疾病療效判斷的評估價值。方法 選取溧陽市人民醫院2012年3月至2013年3月收治的慢性乙型肝炎患者78例作為觀察組，并以同期開展常規體檢的80例健康成人作為對照組，分別對兩組患者開展血液相關檢查以及細胞培養，觀察組患者給予恩替卡韋聯合復方牛胎肝提取物片治療，觀察治療前后外周血細胞因子變化情況。結果 觀察組患者白細胞介素-4(IL-4)、γ干擾素水平與對照組比較，差異具有統計學意義(P<0.05)。觀察組中乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)陽性患者的IL-4、γ干擾素水平與HBeAg陰性者比較，差異有統計學意義(P<0.05)。觀察組患者治療后的各項肝功能指標均獲明顯改善，IL-4與γ干擾素水平與治療前比較，差異有統計學意義(P<0.05)。結論 乙型肝炎患者需要確切的指標來指導治療的開展以及效果的評價，通過對外周血細胞因子開展相關檢測，可進一步確定Th1/Th2免疫應答的平衡狀態，具有一定的臨床應用價值。

慢性乙型肝炎； 細胞因子； 外周血

慢性乙型肝炎是臨床中較為多發的疾病之一[1]，在感染乙型肝炎病毒后，疾病的發展進程主要由機體免疫和病毒決定。病毒侵襲后患者會表現出細胞免疫應答與體液免疫應答，在細胞免疫應答中主要以T細胞為主[2]，其應答類型與患者的免疫狀況存在十分密切的關系，疾病的慢性化主要與輔助T細胞1/輔助T細胞2(Th1/Th2)的失衡存在關聯。本研究選擇78例慢性乙型肝炎患者與80例健康人作為研究對象，分別檢測外周血細胞中的白細胞介素(IL)-4、IL-11以及γ干擾素的水平，以探討外周血細胞因子監測對該病患者臨床療效的指導意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取溧陽市人民醫院2012年3月至2013年3月收治的慢性乙型肝炎患者78例作為觀察組，所有患者均符合臨床診斷標準，患者中無甲型、丙型、丁型、戊型肝炎病毒或存在免疫缺陷型病毒感染者，同時本組患者在近期均未服用糖皮質激素類藥物。觀察組中男43例，女35例；年齡21～55歲，平均(33.9±4.3)歲；乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)呈陽性者64例，陰性者14例。同時選取在本院常規體檢的健康成人80例作為對照組，其中男45例，女35例；年齡22～57歲，平均(34.8±5.2)歲。兩組基本情況比較差異無統計學意義(P>0.05)，組間具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 觀察組患者給予恩替卡韋聯合復方牛胎肝提取物片治療，恩替卡韋(江蘇正大天晴藥業股份有限公司，國藥準字H20100019)，每次0.5 mg，每日1次。復方牛胎肝提取物片(山東希力藥業有限公司，國藥準字H37023809)，每次40 mg，每日3次，以48周為1個療程。

1.2.2 檢測方法 兩組患者均檢測外周血細胞因子，先抽取15 mL肝素抗凝全血，按Ficoll密度梯度離心分離法分離外周血單個核細胞，經2臺盼蘭染色證實細胞活力大于95%[3]。獲取的外周血單個核細胞置于液氮中保存,等待下一步檢測的實行。應用含胎牛血清的培養液調整復蘇細胞的濃度，水平為1×106個/mL，再放置于24孔板內，將獲取標本置于CO2培養箱內，溫度為37 ℃，經72 h后開展離心處理，然后獲取上清液準備檢測。應用雙抗夾心法進行細胞因子的檢測，選用美國R&D公司生產的相關試劑盒，嚴格依照說明書分別對每個標本中的細胞因子數量進行仔細計算。

1.3 觀察指標 記錄兩組外周血單個核細胞內IL-4、IL-10以及γ干擾素的水平，并將觀察組中HBeAg陽性與HBeAg陰性患者分別開展比較。同時對觀察組患者開展治療效果評估，分別檢測每個標本的丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、血清總膽紅素以及清蛋白等肝功能指標，依據改善程度來判斷治療的效果，并對本組患者治療前后的IL-4、IL-10以及γ干擾素開展比較與分析。

2 結 果

2.1 兩組患者的IL-4、IL-10、γ干擾素水平比較 觀察組患者IL-4水平為(18.63±7.14)ng/L明顯高于對照組的(7.89±4.10)ng/L；γ干擾素水平為(39.41±19.35)ng/L，明顯低于對照組的(120.31±40.82)ng/L，差異均具有統計學意義(P<0.05)。但觀察組IL-10水平[(578.83±153.02)ng/L]與對照組[(555.81±249.41)ng/L]比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

2.2 觀察組不同患者的IL-4、IL-10、γ干擾素水平比較 觀察組中HBeAg陽性患者的IL-4水平為(22.01±9.31)ng/L，明顯高于HBeAg陰性者的(11.12±5.11)ng/L；γ干擾素水平為(29.31±12.03)ng/L，明顯低于HBeAg陰性者的(45.05±23.91)ng/L，差異均具有統計學意義(P<0.05)。HBeAg陽性者IL-10水平為(544.23±165.82)ng/L與HBeAg陰性者的(627.68±142.75)ng/L比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

2.3 觀察組治療前后各項肝功能指標水平比較 觀察組患者治療后的ALT、AST、血清總膽紅素、清蛋白水平均明顯好于治療前，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

2.4 觀察組患者治療前后的IL-4、IL-10、γ干擾素水平比較 觀察組患者治療后的IL-4水平為明顯低于治療前；γ干擾素水平明顯高于治療前，差異均有統計學意義(P<0.05)。而IL-10水平治療前后比較，差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

表1 觀察組患者治療前后各項肝功能指標水平比較±s，ng/L)

表2 觀察組患者治療前后的IL-4、IL-10、γ干擾素 水平比較

3 討 論

乙型肝炎病毒感染是當前全球性公共衛生問題[4]，研究顯示全球范圍內感染該病毒的患者超過20億人次，主要包括慢性乙型肝炎患者以及慢性乙型肝炎病毒攜帶者，每一年度約有100萬人死于該病[5]。慢性乙型肝炎存在反復發作的特征，在病情進展過程中會經過肝纖維化階段，進而有可能演變成肝硬化甚至肝部腫瘤疾病[6]。直至目前，臨床針對該疾病仍缺乏指向性的治療措施，其治療問題依然是臨床中的主要研究課題。乙型肝炎治療的關鍵在于有效抑制乙型肝炎病毒，進一步控制肝纖維化，達到緩解病情急速惡化的目的。當前臨床治療藥物主要為核苷類和干擾素[7]，本研究對78例乙型肝炎患者采用恩替卡韋與復方牛胎肝提取物片聯合治療的方式。恩替卡韋是20世紀末被研制出的新型鳥嘌呤核苷類似物藥物，具有較強的抗乙型肝炎病毒作用，能夠在患者體內與磷酸組成三磷酸鹽，進而抑制病毒多聚酶合成，抑制病毒的復制。復方牛胎肝提取物片是當前臨床常用的抗肝纖維化藥物，藥物中小分子多肽含有的細胞因子會對星狀細胞的活化起到抑制作用，進而降低肝纖維化進程。雖然該病當前臨床治療效果仍不滿意，但其治療理念一直處于不斷創新的狀態，藥物聯合治療是抗病毒的主要發展趨勢，但聯合方式仍需臨床進一步研究證實[8]。

慢性乙型肝炎主要是由于細胞的免疫功能對乙型肝炎病毒產生障礙，進而逐漸損傷肝細胞[9]，受到乙型肝炎病毒侵害后，機體抗原會出現進一步分解的表現，演變成為多種抗原成分，轉給T細胞和B細胞。損傷后的肝細胞通常與患者免疫能力存在正相關性，由于Th1/Th2類細胞的進一步失衡，會表現出多種病理變化。抗原呈遞細胞將特異性抗原轉給Th細胞后，會進一步分化成為Th1/Th2細胞亞群。在Th1中以IL-2與γ干擾素為主，會不斷提高細胞的毒性作用，激發超敏反應引起媒介轉導細胞免疫應答。IL-4、IL-6以及IL-10是Th2的主要表達指標，均會引發抗體不斷生成進而出現體液免疫應答[10]。當Th1/Th2失衡后發生了慢性乙型肝炎疾病[11]。

Th1/Th2中免疫應答平衡可保證患者機體內的免疫功能趨于正常。肝組織受損與清除病毒和Th1分化存在相關性。Th1細胞因子逐漸增多后細胞的免疫能力也會增強，使免疫反應提升進而增加了病毒對臟器的損傷程度[12]。有研究顯示當患者的乙型肝炎病毒基因水平下降時其γ干擾素會明顯增加[13]。本研究分別對78例乙型肝炎患者與80例健康成人開展了IL-4、IL-10以及γ干擾素的相關檢測，結果顯示觀察組患者的IL-4明顯高于對照組患者，而γ干擾素水平明顯低于對照組；同時觀察組患者中HBeAg呈陽性的患者IL-4與γ干擾素水平差異表現得更加明顯，差異均有統計學意義(P<0.05)。以上結果說明觀察組患者的免疫功能較低，而Th1/Th2免疫應答細胞因子存在負反饋效果。同時，研究還對78例乙型肝炎患者開展了藥物治療，經過48周的治療后本組患者的各項肝功能指標均獲得好轉，提示病情有明顯好轉。治療后對觀察組患者開展的相關檢測表示，IL-4水平明顯下降，而γ干擾素水平明顯上升，提示治療對Th1/Th2型免疫應答起到了有效的調控與誘導，逐漸改善了Th1/Th2免疫應答的平衡，進而患者獲得了明顯的改善。說明針對抗病毒治療患者開展外周血細胞因子檢驗，能夠依據其變化情況來綜合評估患者機體免疫的改善程度。

綜上所述，乙型肝炎患者病情遷延程度與乙型肝炎病毒存在密切的相關性，臨床治療主要為抑制或阻止乙型肝炎病毒基因的復制，應用抗病毒類藥物治療可獲得減緩病情發展的效果。經過臨床治療后，Th1/Th2型免疫應答會得到有效的調控與誘導，進而促進免疫應答逐漸恢復平衡。但治療也需要確切的效果評價指標來指導治療的開展以及效果的評價，通過對外周血細胞因子開展相關檢測，可進一步確定Th1/Th2免疫應答的平衡狀態，可作為乙型肝炎患者治療效果的參考指標。

[1]滿昌軍，董香玉．外周血T細胞亞群、IL-32、IL-6水平在乙型肝炎患者的表達及相關性分析[J]．中國實驗診斷學，2014，18(1)：62-65．

[2]Raziorrouh B,Schraut W,Gerlach T,et al.The immunoregulatory role of CD244 in chronic hepatitis B infection and its inhibitory potential on virus-specific CD8+T-cell function[J].Hepatology,2010,52(6):1934-1947.

[3]任粉玉，樸熙緒，任淑子．慢性乙型肝炎患者外周血細胞因子的檢測及意義[J]．臨床薈萃，2006，21(8)：567-568．

[4]陸建國．聚乙二醇干擾素α-2a聯合乙肝疫苗治療慢性乙型肝炎療效觀察[J]．實用肝臟病雜志，2014，17(1)：34-36．[5]Lawrence L,Chee KH,Nancy L,et al.Pegylated interferon alpha-2α(40×103) in the treatment of chronic hepatitis B[J].Int J Nanomedicine,2006,1(3):255-262.

[6]黃紅麗，胡志文，聶玉強，等．復方牛胎肝提取物聯合恩替卡韋治療慢性乙型肝炎療效分析[J]．實用肝臟病雜志，2014，17(1)：41-44．

[7]林滬，李元元，王福生．血清HBsAg和HBeAg水平變化與慢性乙型肝炎患者抗病毒療效預測[J]．實用肝臟病雜志，2014，17(1)：98-101．

[8]申婷，游晶，范晶華，等．慢性乙型肝炎抗病毒治療研究進展[J]．實用醫學雜志，2014(3)：339-341．

[9]邱潔，龍啟強，馮艷紅，等．急性和慢性乙型肝炎患者外周血NK細胞和T淋巴細胞亞群的動態變化[J]．實用肝臟病雜志，2013，16(6)：508-510．

[10]徐文莉，林燕華，廖長征．慢性乙型肝炎患者外周血細胞因子檢測的臨床意義[J]．國際檢驗醫學雜志，2012，33(19)：2387-2388．

[11]何文敏，蘇毅．IL-10和IL-17在慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化以及肝硬化合并腹腔感染中的研究進展[J]．世界華人消化雜志，2014，23(3)：333-339．

[12]艾買提江·司馬義，買木熱·肉孜．恩替卡韋對慢性乙型肝炎患者細胞因子和肝纖維化指標的影響[J]．基層醫學論壇，2013，17(23)：3049-3050．

[13]張健珍，馮婉婷，李笑群，等．替比夫定治療HBeAg陽性慢性乙型肝炎患者外周血Th1/Th2型細胞因子水平的動態變化[J]．實用醫學雜志，2013，29(17)：2874-2877．

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.04.036

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1672-9455(2015)04-0523-02

2014-04-24

2014-08-12)