生脈飲(黨參方)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

楊 堃

(重慶市食品藥品檢驗所，重慶401121)

生脈飲(黨參方)是由黨參、麥冬、五味子共3味藥組成的復(fù)方制劑，收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十冊［1］。功能為益氣復(fù)脈、養(yǎng)陰生津，用于氣陰兩虧、心悸氣短、脈微自汗。原標(biāo)準(zhǔn)僅收載了藥品的性狀和常規(guī)檢查，無處方中藥物的定性鑒別和標(biāo)示成分的含量測定。筆者在此對方中黨參、五味子、麥冬進(jìn)行了薄層色譜定性鑒別，并以高效液相色譜法制定了方中五味子(以五味子醇甲計)含量測定方法，為更好地控制生脈飲(黨參方)質(zhì)量提供了依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 材料 生脈飲(黨參方)(江西匯仁藥業(yè)有限公司，批號130709;通化東寶永健制藥有限公司，批號131011;江西南昌濟(jì)生制藥廠，批號130309)，黨參、麥冬、五味子等處方中的各味藥材由重慶桐君閣中藥飲片有限公司提供。黨參對照藥材(批號121057－200805)、五味子對照藥材(批號120922－201007)、五味子醇甲(批號110857－201211，含量測定用)、麥冬對照藥材(批號121013－200908)，均購自中國藥品生物制品檢定所。

1．2 儀器 高效液相色譜儀Agilent HP1100(包括四元泵、柱溫箱、自動進(jìn)樣器、二級管陣列檢測器);KQ3200B型超聲波清洗器(功率150 W，頻率40 KHz);Sartorius Msu224s－100－du百萬分之一電子分析天平;Sartorius Msa225s－100－du萬分之一電子分析天平。

1．3 試藥 硅膠G、硅膠GF254(化學(xué)純，青島海洋化工廠)、甲醇(安徽時聯(lián)特種溶劑股份有限公司，HPLC級)，Milli－Q reference制備超純水，其余試劑均為分析純。

1．4 方法

1．4．1 黨參的薄層色譜鑒別。取本品10 ml，用正丁醇振搖提取3次，每次10 ml，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇5 ml使溶解，作為供試品溶液。另取黨參對照藥材1 g，加正丁醇20 ml，加熱回流1 h，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 ml使溶解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄ⅥB)試驗，吸取上述2種溶液各1～2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇－乙醇－水(25∶3∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰。

1．4．2 五味子的薄層色譜鑒別。取本品20 ml，用乙醚振搖提取3次，每次20 ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。另取五味子對照藥材1 g，加水50 ml，煎煮30 min，放冷，濾過，濾液同法制成對照藥材溶液。再取五味子醇甲對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄ⅥB)試驗，吸取供試品溶液10μl、對照藥材溶液5μl、對照品溶液2μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(30～60℃)－甲酸乙酯－甲酸(13∶7∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視［2］。

1．4．3 麥冬的薄層色譜鑒別。取本品10 ml，加水10 ml，鹽酸2 ml，回流提取30 min，濾過，濾液用三氯甲烷振搖提取，分取三氯甲烷液，蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液;另取麥冬照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄ⅥB)試驗，吸取供試品溶液5μl、對照藥材溶液5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－丙酮(4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰［2］。

1．4．4 五味子的含量測定。

1．4．4．1 對照品溶液的制備。精密稱取五味子醇甲對照品適量，加甲醇制成每1 ml含23．06μg的溶液。

1．4．4．2 供試品溶液的制備。取“1．1”項下的批號為130709樣品精密量取25 ml，置分液漏斗中，加乙醚振搖提取4次，每次25 ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，0．45 μm 孔濾膜濾過即得［2］。

1．4．4．3 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗。色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇－水(55∶45)為流動相，檢測波長為250 nm。流速1．0 ml/min，柱溫30 ℃［2］。

1．4．4．4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。精密吸取“1．4．4．1”項下制備的對照品溶液，各 5、10、15、20、25、30 μl分別注入液相色譜儀測定，以對照品濃度為橫坐標(biāo)、五味子醇甲峰峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1．4．4．5 精密度試驗。精密吸取“1．4．4．1”項下制備的對照品溶液10μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定每次峰面積，計算峰面積積分值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，要求該值小于3%。

1．4．4．6 重復(fù)性試驗。取“1．1”項下的樣品(批號130709)，按“1．4．4．2”方法制備5 份供試品溶液，測定各份樣品中五味子醇甲的含量，并計算RSD值，要求該值小于3%。

1．4．4．7 穩(wěn)定性考察。取重復(fù)試驗中的5份樣品溶液，于常溫條件放置0、4、8、12、24 h 后，各精密吸取 10 μl，測定五味子醇甲的含量，并計算RSD值。

1．4．4．8 加樣回收率試驗。精密量取已測定含量的同一批樣品15 ml(批號130709，五味子醇甲含量為6．98μg/ml)6份，分別精密加入五味子醇甲對照品(0．092 72 mg)，按

“1．4．4．2”方法操作，測定五味子醇甲含量，計算加樣回收率和RSD值。

1．4．4．9 樣品含量測定。取“1．1”項下 3 批樣品，按“1．4．4．2”方法制備供試品溶液，按照“1．4．4．3”的色譜條件，測定五味子醇甲含量。

2 結(jié)果與分析

2．1 薄層色譜鑒別 按“1．4．1”、“1．4．2”、“1．4．3”方法操作，所得樣品薄層色譜圖(圖1)中的特征斑點明顯，分離度好，重現(xiàn)性好，該方法可行。

2．2 五味子的含量測定

2．2．1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗。由對照品在200～400 nm的波長掃描結(jié)果(圖2)可見，五味子醇甲在220和250 nm處有較大紫外吸收，鑒于有機化合物在230 nm以下干擾重的原因，在此選定最佳檢測波長為250 nm。在該檢測波長及相應(yīng)色譜條件下，繪制對照品及供試樣品色譜圖，由圖3b、c可見，對照品及供試樣品中的五味子醇甲色譜峰的保留時間均為15．1 min，且色譜峰峰形尖銳，對稱性好，樣品所測定主峰旁邊無明顯雜峰，達(dá)到基線分離，經(jīng)計算樣品與其他組份峰的分離度＞1．5，理論塔板數(shù)按五味子醇甲峰計算不低于4 000，且陰性對照無干擾(圖3a)，符合藥典要求。

2．2．2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。通過以上色譜條件定量測定對照品，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，數(shù)據(jù)經(jīng)過回歸處理，得五味子醇甲的回歸方程為 Y=1 745．6X+6．528 4(r=0．999 9)，表明五味子醇甲進(jìn)樣量在0．046 12～0．691 80μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2．2．3 精密度試驗。重復(fù)進(jìn)樣5次，測定每次峰面積，計算峰面積積分值的RSD為0．9%，表明精密度良好，符合含量測定要求。

2．2．4 重復(fù)性試驗。取平行樣5份，測定各份樣品中五味子醇甲的含量，其平均含量為6．98μg/ml，RSD值為1．0%，表明用此方法測定五味子醇甲含量重現(xiàn)性良好。

2．2．5 穩(wěn)定性考察。按“1．4．4．7”方法操作，測定五味子醇甲含量的RSD值為0．91%，表明供試品溶液在24 h基本穩(wěn)定。

2．2．6 加樣回收率試驗。由表1可見，五味子醇甲的平均回收率為98．90%，RSD值為1．5%，表明該方法回收率較好，方法可行。

表1 五味子醇甲加樣回收率試驗結(jié)果

2．2．7 樣品含量測定。方法確定并驗證后，測定了3個廠家生脈飲(黨參方)中五味子醇甲含量，平行測定3次，結(jié)果發(fā)現(xiàn)(表2)，3個廠家的樣品用該方法均能檢出五味子醇甲及其含量，表明該方法準(zhǔn)確、可靠，可推廣用于生脈飲(黨參方)的質(zhì)量控制。

表2 3個廠家樣品測定結(jié)果(n=3)

3 討論

生脈飲(黨參方)是由黨參、麥冬、五味子共3味藥組成的復(fù)方制劑，方中的五味子具有益氣生津、補腎寧心的作用，含有揮發(fā)油、有機酸、木脂素、三萜、倍半萜及多糖等化學(xué)成分［2］。木脂素成分中的五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲為五味子主要藥理活性成分，在此選用五味子的特征成分五味子醇甲作含量測定來控制生脈飲(黨參方)質(zhì)量。

［1］衛(wèi)生部藥典委員會．《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十冊［S］．衛(wèi)生部藥典委員會，1995．

［2］藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)［S］．北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010．