3例單增李斯特菌感染的病原學、臨床及流行病學特征分析

王 紅，王 艷，張正東，陳 曦，鄧建平，肖 波，劉 祥，王 斌，文 海，范 暉，葉長蕓，李 群

3例單增李斯特菌感染的病原學、臨床及流行病學特征分析

王 紅1，王 艷2，張正東1，陳 曦1，鄧建平1，肖 波1，劉 祥1，王 斌1，文 海1，范 暉1，葉長蕓2，李 群1

目的 分析四川省自貢市2014年3例單增李斯特菌感染的臨床特征及其病原學特征。方法 搜集臨床病例信息；采用血清分型，脈沖場凝膠電泳技術和多位點序列分型方法對單增李斯特菌進行分子分型。結果 3例患者均為免疫力低下人群，有發熱和敗血癥癥狀；3株單增李斯特菌中2株為1/2a血清型、ST8型，1株為1/2b血清型、ST778型，3株PFGE帶型均不同。結論 免疫力低下人群易受單增李斯特菌侵襲性感染。通過與國內外食品及病人單增李斯特菌相關流行學資料比較，提示國外流行克隆群以及國內某些流行型菌株可引起國內李斯特菌病散發，甚至成為將來暴發的隱患。

單增李斯特菌；臨床特征；流行病學特征

單增李斯特菌(Listeriamonocytogenes)是一種不生芽孢、無莢膜的革蘭氏染色陽性短桿菌，廣泛存在于多種自然環境中，繼而污染各種肉類，海產品，即食食品以及動物飼料等，伺機引起人類和動物嚴重的感染。單增李斯特菌的感染表現主要分為兩大類，第一類屬于侵襲性感染，是指在無菌部位分離出單增李斯特菌。易感人群是老幼及免疫力低下人群，表現為腦膜炎、腦膜腦炎和敗血癥，具有較高的死亡率。圍生期婦女感染單增李斯特菌表現為流產、早產、甚至死產，若累及胎兒，則胎兒表現為新生兒敗血癥和新生兒腦膜炎。第二類屬于非侵襲性感染，當免疫力正常的成年人誤食入被大量該菌污染的食品后，會出現發熱性胃腸炎癥狀，這種類型的感染多為自限性，故易被忽視。

李斯特菌病在國外的報道很多，歐美多個發達國家曾于上世紀末頻繁發生由單增李斯特菌引起暴發事件[1]，至今仍有零星暴發[2]。我國目前沒有單增李斯特菌暴發的相關報道，但存在由該菌引起的散發病例報告[3]。我國已于上世紀90年代建立了針對食品中單增李斯特菌的監測，本市曾于2005-2007對部分食品展開單增李斯特菌污染情況調查[4]。然而目前關于國內人群中單增李斯特菌的感染狀況尚不清楚，雖然有少數病例報告，但缺乏病原學特征信息。本研究自當地一所綜合性醫院和一所婦幼保健院收集得到3例從血液或腦脊液中分離出單增李斯特菌的病例，對其進行簡要報道，同時對分離到的單增李斯特菌進行血清學鑒定，運用脈沖場凝膠電泳(Pulsed-field Gel Electrophoresis, PFGE)技術和多位點序列分型(Multi-locus Sequence Typing, MLST)方法對菌株進行分子分型，以了解臨床分離的單增李斯特菌病原學特征。

1 材料與方法

1.1 標本 2014年自貢市第一人民院2份，血培養標本和血培養標本/腦脊液標本各1份；自貢市婦幼保健院1份血培養標本。

1.2 單增李斯特菌分離 血液標本為醫院臨床血培養報警陽性且革蘭氏染色為革蘭氏陽性桿菌的標本，純培養后可采用梅里埃API李斯特菌生化鑒定系統進行鑒定，實驗所采用的單增李斯特菌標準菌株CMCC54001購自中國藥品生物制品檢定所。

1.3 血清型分型、PFGE及MLST分型方法 對所有分離得到的單增李斯特菌，采用日本DenkaSeiken公司的血清抗體，按照產品說明書進行血清型鑒定操作。按照巴斯德單增李斯特菌多位點序列分型數據庫操作流程http://www.pasteur.fr/recherche/genopole/PF8/mlst/Lmono.html，針對單增李斯特菌7對管家基因(abcZ,blgA,cat,dapE,dat,ldh,lhkA)部分片段進行PCR 擴增并測序，得到菌株的序列型。根據美國CDC PulseNet的標準操作規程對單增李斯特菌進行脈沖場電泳分型分析，以AscⅠ對菌株進行酶切，菌株的PFGE圖像用BioNumerics(Version5.0)軟件進行聚類分析。

2 結 果

2.1 病例概況 病例1是一位89歲高齡的女性糖尿病患者，發熱至39 ℃，并伴有輕微頭痛，有輕微嘔吐現象，血象和C反應蛋白升高，血培養查見單增李斯特菌。病例2是一位48歲女性患者，因多發性骨髓瘤接受馬法蘭及大劑量激素治療，導致患者免疫力低下。反復發熱2 d，發熱至39.8 ℃，有昏迷現象。患者血象檢測結果顯示白細胞數低、中性粒細胞減少、血小板數低。顱內感染嚴重，腦水腫征象明顯。血培養和腦脊液培養結果均為李斯特菌陽性。患者最終因腦疝形成，呼吸心跳驟停死亡。病例3是一位早產新生兒(34周出生)，其母親有子宮內膜炎。出生后23 h因發熱1 h入院，體溫最高升至37.9 ℃，伴明顯氣粗，鼻扇。血象檢測結果提示感染嚴重，被診斷為新生兒敗血癥。患兒血培養李斯特菌陽性。

2.2 單增李斯特菌血清型、PFGE和MLST分型分析 前兩例患者的單增李斯特菌血清型為1/2a型，MLST都是ST8型，第3例患者分離到的單增李斯特菌血清型為1/2b型，MLST型為ST778型。3株單增李斯特菌有3種不同PFGE帶型(如圖1所示)。

圖1 3株病人分離單增李斯特菌PFGE聚類圖

Fig.1 PFGE cluster for 3 strains ofListeriamonocytogenesfrom patients

3 討 論

單增李斯特菌作為一種重要的食源性疾病病原菌，尤其對于免疫力低下和圍生期婦女造成嚴重危害，死亡率高達20%～50%[5]。本研究中3例患者均屬于免疫力低下人群，患者1為高齡且伴有嚴重的消耗性疾病，患者2因多發性骨髓瘤長期接受免疫抑制劑治療，患者3為剛出生不久的早產兒，這3種類型正是免疫力低下人群的典型代表。臨床癥狀方面，雖然有著各自不同的其他病癥表現，但均發生了不同程度的發熱和敗血癥癥狀。由于李斯特菌病沒有特異性的臨床表現，這也是該菌易被臨床忽略的原因之一，一旦抗感染取得療效，就不再去追究何種病原菌導致，這可能是我國散發性李斯特菌少見報道的原因之一。通過本研究三例病例的報道，也再次提示應當嚴格注意免疫力低下人群的飲食，避免食入被單增李斯特菌污染的食品，以免造成嚴重后果。

我國各地食品監測結果表明存在不同程度的單增李斯特菌污染食品現象，尤其是肉類制品，越來越多由該菌引起的病例報告被報道[3]，說明無論是食品污染還是臨床感染都逐漸被國內衛生和研究部門認識和重視。目前國內相關研究人員已對食品中單增李斯特菌的分子流行病學特征開展了一些研究，方維煥等人[6]對中國東部食品和環境中的單增李斯特菌進行了基因分型，葉長蕓等人[7]對中國12個省(直轄市)食品來源的單增李斯特菌進行了血清分型和基因分型。然而由于臨床菌株收集困難，針對病人來源的單增李斯特菌相關研究罕見，可能的原因為目前國內并未建立有關該菌感染人群的監測系統，以及臨床上認識不足。本研究中病例數極為有限，且沒有當地同期食品來源菌株的相關信息，無法對菌株的來源進行追溯，但所得的菌株信息可以作為該菌在本地流行的背景信息，為持續性監測打下基礎。

本研究的三例病例單增李斯特菌均分離自人體的無菌部位，屬于侵襲性感染，病例之間沒有流行病學相關性，雖然病例一和病例二具有相同的ST型，但PFGE帶型截然不同，從分子水平也進一步證實三者之間不具有流行病學相關性，且同時期未見集體中毒事件的報道，故三例病例屬于散發病例。Sylvain等人[8]分析了來自5大洲300株單增李斯特菌的基因型，對其主要克隆群的全球分布情況進行了描述，分析顯示家系Ⅰ中CC3是一種流行克隆群，在世界各地都廣泛存在。本研究中的第三例病例菌株為ST778，屬于CC3。這提示在國外流行的菌株型別，同樣也造成國內散發感染。ST8型是國內食品源菌株第二大流行菌株型[7]，由于暴露的可能性較大，造成感染的幾率也隨之增大。PFGE分型對于散發病例分離菌株的意義沒有暴發溯源明顯，但其分型結果可作為數據積累，為將來可能的暴發溯源提供數據支持。

本研究對本市2014年的三例散發李斯特菌病臨床表現進行了描述，同時著眼于從這三位臨床病人分離到的單增李斯特菌病原學特征，利用血清分型，PFGE，MLST分型對菌株進行分型分析，并與國內外相關數據進行了比較。菌株數量極為有限，但打破了國內臨床感染菌株病原信息的空白。同時也提示臨床相關機構認識并重視李斯特菌病這一食源性疾病，盡快建立國內病人源性單增李斯特菌感染的監測體系。

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Clinical and epidemiological characteristics of three cases ofListeriamonocytogenesinfection

WANG Hong1,WANG Yan2,ZHANG Zheng-dong1,CHEN Xi1,DENG Jian-ping1,XIAO Bo1,LIU Xiang1,WANG Bin1,WEN Hai1,FAN Hui1,YE Chang-yun2,LI Qun1

(1.ZigongCenterforDiseaseControlandPrevention,Zigong643000,China;2.StateKeyLaboratoryforInfectiousDiseasePreventionandControl,NationalInstituteforCommunicableDiseaseControlandPrevention,ChineseCenterforDiseaseControlandPrevention,Beijing102206,China)

We aimed to investigate the currentListeriamonocytogenes(L.monocytogenes) infection and the molecular characteristics ofL.monocytogenesfrom clinical cases in Zigong, Sichuan Province, China. Detailed clinical information of the patients was collected. ThreeL.monocytogenesisolated from the patients were characterized by serotyping, pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) and multi-locus sequence typing (MLST). Results showed thatL.monocytogenescaused fever and sepsis in all of the three patients, who had decreased immune system function. Two of the three isolations were serotype 1/2a and ST8, and the rest one was serotype 1/2b and ST778. The pulsotypes of the isolations were different from each other. Compared with the epidemiological data ofL.monocytogenesboth in China and abroad, the epidemic clones in other countries and the clones with high prevalence in China caused sporadic listeriosis in China, even might cause outbreaks. It is suggested that the surveillance ofL.monocytogenesin clinic and food products should be built up and enhanced, respectively.

Listeriamonocytogenes; clinical characteristics; epidemiological characteristics

s: Li Qun, Email: lqzgcdc@163.com;Ye Chang-yun, Email: yechangyun@icdc.cn

國家重大傳染病防治科技重大專項(No. 2011ZX10004-001,No. 2013ZX10004-101),傳染病預防控制國家重點實驗室開放課題(No.2012SKLID304)聯合資助(王紅和王艷同等貢獻)

李群，Email: lqzgcdc@163.com 葉長蕓，Email: yechangyun@icdc.cn

1.四川省自貢市疾病預防控制中心，自貢 643000 2.中國疾病預防控制中心傳染病預防控制所，傳染病預防控制國家重點實驗室，北京 102206

10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2015.07.018

R378

A

1002-2694(2015)07-0678-03

2015-03-03；

2015-06-08

Supported by the National Major Science and Technology Project of Prevention and Control in Significant Infectious Disease (Nos. 2011ZX10004-001 & 2013ZX10004-101) and the open project from State Key Laboratory for Infectious Disease Prevention and Control (No. 2012SKLID304)