食品防霉劑脫氫醋酸鈉的肉雞耐受性研究

孫得發，楊志斌，屈長波，張莉莉，王 恬*

（南京農業大學動物科技學院，江蘇 南京 210095）

?

食品防霉劑脫氫醋酸鈉的肉雞耐受性研究

孫得發，楊志斌，屈長波，張莉莉，王 恬*

（南京農業大學動物科技學院，江蘇 南京 210095）

摘 要：目的：對食品防霉劑脫氫醋酸鈉進行動物耐受性研究，為其在食品及飼料中的應用確定最高添加劑量及安全性評價提供參考。方法：選取1 日齡健康愛拔益加（Arbor Acres，AA）肉雞240 只，隨機分為4 組，每組6 個重復，每個重復10 只，分別飼喂添加脫氫醋酸鈉0（CON組）、200 mg/kg（TES1組）、1 000 mg/kg（TES2組）、2 000 mg/kg（TES3組）的基礎日糧。測定肉雞的生長性能和血清生化指標。結果：1）肉雞生長前期，TES3組的日采食量、日體質量增量、平均體質量顯著或極顯著低于其他各組（P＜0.05或P＜0.01），飼料效率顯著或極顯著降低（P＜0.05或P＜0.01），TES2組的日體質量增量、平均體質量均顯著低于CON組和TES1組（P＜0.05）；肉雞生長后期，TES3組的日采食量、日體質量增量均顯著低于其他各組（P＜0.05）。2）肉雞生長后期，TES2組和TES3組血液中白細胞含量顯著高于CON組及TES1組（P＜0.05）；3）與對照組相比，肉雞生長后期TES2組血清中白蛋白含量顯著降低（P＜0.05）；與TES1組相比，TES3組血清中天冬氨酸氨基轉移酶含量顯著降低（P＜0.05），肌酐濃度顯著提高（P＜0.05）。結論：日糧中添加2 000 mg/kg脫氫醋酸鈉可顯著降低肉雞生長性能，導致肉雞腎臟功能障礙。在食品中添加應用高劑量脫氫醋酸鈉會對機體代謝產生不良影響，應用時應嚴格按規定控制劑量。

關鍵詞：脫氫醋酸鈉；愛拔益加肉雞；生長性能；血清生化指標

脫氫醋酸鈉（sodium dehydroacetate）是一種新開發的廣譜類、抑菌力較強的食品防腐劑，對霉菌、酵母菌、細菌的抑制能力特別強，廣泛地應用于各類食品加工行業中[1]，其有效抑制劑量為0.05%～0.1%，一般用量為0.03%～0.05%，但高劑量的脫氫醋酸鈉對人體健康有一定危害性，相關毒性研究發現：大鼠口服脫氫醋酸鈉的LD50為1 000 mg/kg（以體質量計，下同），小鼠為1 330 mg/kg，人體長期服用過量脫氫醋酸鈉會引起腎結石[2]，在食品添加中需限量使用，因此我國將脫氫醋酸鈉列入了限量使用食品添加劑[3]，并規定其在醬菜、腐乳中的添加量不得超過0.3 g/kg[4]，國外有規定在面包、乳酪中最高添加量為0.05%[5]。由于肉雞對于外界的不良因素反應更加敏感，本實驗選用愛拔益加（Arbor Acres，AA）肉雞為研究對象，通過對AA肉雞生長性能、器官發育、血常規和血液生化指標的分析，研究AA肉雞對飼料中添加不同劑量脫氫醋酸鈉的耐受程度，為其在食品添加劑中的應用確定最高耐受劑量，以及食品添加劑損傷的預防和修復提供一定理論依據。

1　材料與方法

1.1動物、材料與試劑

AA白羽肉雞，購自南京華牧公司。

脫氫醋酸鈉（C8H7NaO4）由江蘇天成動物保健品公司提供，生產批號2012818，有效成分≥98%，為無臭白色粉末，通過逐級混勻的方式添加到日糧中。基礎日糧參照National Research Council（NRC）1994標準[6]配制，其組成及營養水平見表1。

表1　基礎日糧組成及營養水平Table 1 Basal diet composition and nutrient levels

1.2方法

1.2.1 動物分組及管理

采用單因子完全隨機試驗設計，將240 只健康的1 日齡AA肉仔雞隨機分為4 個處理組，分別在基礎日糧中添加脫氫醋酸鈉0（CON組）、200 mg/kg（TES1組）、1 000 mg/kg（TES2組）和2 000 mg/kg（TES3組），每個處理設6 個重復，每個重復10 只雞。基礎日糧采用玉米-豆粕型，飼養期為42 d，飼養前徹底清掃、沖洗雞舍地面及育雛設備，然后用甲醛熏蒸消毒。肉雞采用籠養，自由采食和飲水，喂料遵循少喂勤添的原則。每天清掃雞舍，定期清洗飲水管道，并及時通風換氣，保證雞舍內環境衛生良好。于10 d時進行雞新城疫（La Sota株）、雞傳染性支氣管炎（H120株）和傳染性法氏囊病三聯多價滅活疫苗及禽流感疫苗免疫，免疫方式采用頸背側皮下注射方式。

1.2.2 樣品采集

于肉雞生長至21 日齡（前期）06：00（此前禁食12 h，自由飲水）每個重復隨機抽取1 只雞，稱質量后頸靜脈采血，4 ℃條件下放置待血清完全析出后，3 500 r/min離心10 min制備血清，與未經離心的血液適當保存，待測。于肉雞生長至42 日齡（后期）時采血，步驟同前，并在雞放血致死后迅速剖開其腹腔，剖檢取心、肝、脾、肺、腎等臟器稱質量，并按照下式計算器官指數。

每天記錄各個重復消耗的飼料質量，并于肉雞生長至21 日齡和42 日齡時，分別對各重復的肉雞進行空腹稱質量。分別計算實驗前期、后期和實驗全期各重復的日體質量增量、日采食量和飼料效率。記錄飼養期間肉雞的腹瀉只數、死亡和淘汰只數，計算腹瀉率和死淘率。

1.2.3 檢測指標

檢測血液常規指標主要包括白細胞（white blood cell，WBC）、血紅蛋白（hemoglobin，HGB）、血小板（blood platelet，PLT）含量等；檢測生化指標主要包括谷氨酸氨基轉移酶（alanine aminotransferase，ALT）、天冬氨酸氨基轉移酶（aspartate transaminase，AST）、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活力，總蛋白（total protein，TPRO）、白蛋白（albumin，ALB）、血尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、肌酐（creatinine，CRE）、血糖（blood glucose，GLU）、球蛋白（globulin，GLO）含量等指標。

1.3數據分析

數據結果用Excel 2007進行初步處理，采用SPSS 16.0中ANOVA進行分析，用LSD法進行多重比較，以P＜0.05作為差異顯著性判斷標準，結果以±s表示。

2　結果與分析

2.1脫氫醋酸鈉對AA肉雞生長性能的影響

表2　脫氫醋酸鈉對AA肉雞生長性能的影響Table 2 Effect of sodium dehydroacetate on growth performance of AA broilers

如表2所示，肉雞生長前期，TES3組的日采食量顯著低于CON、TES1、TES2組（P＜0.05），TES3組的日體質量增量極顯著低于CON、TES1組（P＜0.01），顯著低于TES2組（P＜0.05），平均體質量極顯著低于CON、TES1組（P＜0.01），顯著低于TES2組（P＜0.05），其中TES2組的日體質量增量、平均體質量均顯著低于CON、TES1組（P＜0.05），TES3組的飼料效率極顯著高于CON、TES1組（P＜0.01），顯著高于TES2組（P＜0.05）；在肉雞生長后期，TES3組的日采食量、日體質量增量、平均體質量均顯著低于CON、TES1、TES2組（P＜0.05），但各組間的飼料效率并沒有顯著差異（P＞0.05）；從全期來看，TES3組的日采食量、日體質量增量均顯著低于CON、TES1、TES2組（P＜0.05），飼料效率顯著高于CON、TES1組（P＜0.05）。

表3　脫氫醋酸鈉對AA肉雞死淘率和腹瀉率的影響Table 3 Effect of sodium dehydroacetate on mortality and diarrhea rate of AA broilers

如表3所示，研究脫氫醋酸鈉對AA肉雞死淘率及腹瀉率的影響，結果表明各組間差異均不顯著（P＞0.05），但死淘率隨著添加脫氫醋酸鈉添加劑量的增加有升高的趨勢。

2.2脫氫醋酸鈉對AA肉雞器官發育的影響

表4　脫氫醋酸鈉對AA肉雞器官指數的影響Table 4 Effect of sodium dehydroacetate on organ indexes of AA broilers

由表4可知，不同劑量的脫氫醋酸鈉對AA肉雞器官指數的影響并不顯著（P＞0.05），但TES1、TES2、TES3組的脾臟指數較CON組分別降低了11%、11%和6% （P＞0.05），胸腺指數較CON組分別降低了16%、20%、36%（P＞0.05），法氏囊指數則分別比CON組降低了18%、9%、18%（P＞0.05）。

2.3脫氫醋酸鈉對AA肉雞血液常規指標的影響

表5　脫氫醋酸鈉對AA肉雞血液常規指標的影響Table 5 Effect of sodium dehydroacetate on routine blood test of AA broilers

由表5可知，肉雞生長前期TES3、TES2、TES1組的WBC含量分別比CON組降低了18.7%、15.6%和4.2%，但并無顯著差異（P＞0.05），TES3、TES2、TES1組HGB含量較CON組分別降低了6.4%、6.4%、8.3%，其中TES1組達到顯著水平（P＜0.05）。肉雞生長后期，TES2、TES3組的WBC含量較CON、TES1組升高了14.5%和4.96%（P＜0.05）。

2.4脫氫醋酸鈉對AA肉雞血液生化指標的影響

由表6可知，肉雞生長前期，TES1、TES2和TES3組球蛋白含量分別比CON組低2.2%、1.4%和4.9%，提示脫氫醋酸鈉的添加可能會導致球蛋白含量的減少。與TES1組相比，1 000、2 000 mg/kg劑量能夠顯著降低肉雞生長后期血清中AST活力（P＜0.05）。肉雞生長后期，TES3、TES2、TES1組血清CRE含量分別較CON組升高了133.4%、59.5%和16.6%，其中TES3組達到顯著水平（P＜0.05）。

表6　脫氫醋酸鈉對肉雞血清生化指標的影響TTaabbllee 66 EEfffect of sodium dehydroacetate on serum biochemical indicators of broilers

3　討 論

脫氫醋酸鈉在抑制霉菌生長的同時，同時也會在生物體組織中殘留[7]，當達到一定量時會導致肝、腎和中樞神經系統的損傷，表現為肝、腎功能減弱，出現驚厥、顫抖、共濟失調等神經癥狀，還可能會引起體質量減少和慢性肺水腫，對人體健康造成損害[8-9]。在動物的毒理學實驗中發現，給猴子每周5 次飼喂200 mg/kg脫氫醋酸鈉會導致生長紊亂及器官病理變化[10]。本實驗以AA肉雞為動物模型，結果顯示1 000、2 000 mg/kg的添加量均顯著降低21 日齡肉雞的生長性能；當日糧中脫氫醋酸鈉的劑量為2 000 mg/kg時，42 日齡AA肉雞的日采食量、日體質量增量和平均體質量均顯著降低（P＜0.05），原因可能是過高劑量脫氫醋酸鈉對消化系統黏膜具有毒性作用，破壞黏膜完整性并造成功能障礙[11]，同時因適口性降低而造成其采食量減少。而1 000 mg/kg劑量組對AA肉雞后期生長性能沒有顯著影響，可能原因是肉雞生長前期對于外界應激較為敏感，而后期已經逐漸適應1 000 mg/kg的添加量，全期隨著脫氫醋酸鈉劑量的增加，肉雞的生長性能下降。

研究發現，胸腺、脾臟、法氏囊的質量可用于評價雞的免疫狀況，三者絕對質量和相對質量越大，則說明機體的細胞免疫和體液免疫機能越強[12-13]。胸腺屬于中樞免疫器官，是T細胞繁殖分化的主要場所，決定外周免疫器官的發育，對提高機體的細胞免疫功能具有重要意義[14]。本實驗發現，脫氫醋酸鈉的添加能夠在一定程度上抑制胸腺、脾臟、法氏囊的發育，對AA肉雞的免疫機能造成不良影響，這與本實驗發現的脫氫醋酸鈉能夠降低肉雞的生長性能存在一定聯系。

白細胞數目是應激反應的重要指標之一，白細胞升高往往意味著器官和組織的急性或慢性的感染、炎癥、組織損傷等情況，是機體的一種自我保護措施[15-16]。在本實驗中，高劑量的脫氫醋酸鈉能夠導致AA肉雞血液中白細胞含量的提高，原因可能是其導致機體的應激反應，對器官和組織造成一定傷害。

動物機體的代謝是一個不斷變化的過程，血液中的許多生化參數受年齡、發育階段、營養水平和內分泌狀況的影響，因而這些參數也反映了機體生理狀況是否良好。血液生化指標的測定已經廣泛地應用到許多研究領域，如動物疾病的診斷、體現受試動物對其所在自然生態環境的適應程度等[17]。血清蛋白主要由白蛋白和球蛋白組成，其中球蛋白占比例較大，而球蛋白由單核巨噬細胞系統產生，因此當機體循環抗體水平升高時，血清球蛋白數量增加，引起總蛋白含量上升[18]。本實驗中，肉雞生長前期，血清中球蛋白含量隨著脫氫醋酸鈉添加量的增加有所降低，證實脫氫醋酸鈉的添加會對體液免疫造成不良影響。肌酐是肌酸和磷酸肌酸代謝的終產物，它主要由肌肉中磷酸肌酸通過非酶促反應生成，若肌酐含量高于正常范圍時，則通過腎小球濾過，隨尿液排出體外[19]，不被腎小球重吸收，腎小管也分泌少量的肌酐。若腎臟機能受損，肌酐的正常排泄受到阻礙，致使血清中肌酐含量增加，意味著腎功能受到損害，當發生腎功能障礙，無法排除過多肌酐時會在體內沉積并導致水代謝失調、代謝性酸中毒、腎性骨病、內分泌失調、鈉鉀代謝失調等癥狀[20]，是判斷腎臟功能的重要指標[21]。本實驗中，AA肉雞生長后期TES3組血清肌酐含量顯著提高，說明當脫氫醋酸鈉的添加量為2 000 mg/kg時會對腎功能造成一定損傷。國內研究高劑量脫氫醋酸鈉對機體損傷的報道較少，在本實驗結果的基礎上，進一步細化其添加劑量，探討其造成機體損傷的機理，對指導該食品添加劑的科學應用有重要意義。

4　結 論

在本實驗條件下，基礎日糧中添加0～2 000 mg/kg脫氫醋酸鈉，隨著劑量的增加，AA肉雞的生長性能逐漸降低，死淘率升高并造成免疫應激，影響腎臟的正常代謝。結果表明：在食品中添加高劑量的脫氫醋酸鈉會對機體代謝產生不良影響，應用時應嚴格按規定控制劑量。

參考文獻：

[1]葉銀枝. 脫氫醋酸鈉在食品中的應用[J]. 中國食品添加劑, 2002(3): 64-66.

[2]周家華. 食品添加劑[M]. 北京: 化學工業出版社, 2001: 1.

[3]中華人民共和國衛生部. GB 2760—2011 食品添加劑使用衛生標準[S].北京: 中國標準出版社, 2011.

[4]李青, 白梅, 蔣素, 等. 脫氫乙酸在食品中殘留量檢測方法的研究進展[J]. 中國衛生工程學, 2009, 8(2): 116-117.

[5]UCHIDA O, NAITO K, YASUHARA K, et al. Studies on the acute oral toxicity of dehydroacetic acid, sorbic acid and their combination compound in rats[J]. Eisei Shikenjo hōkoku. Bulletin of National Institute of Hygienic Sciences, 1985, 103: 166-171.

[6]Subcommittee on Poultry Nutrition, National Research Council. Nutrient requirements of poultry[M]. 9th ed. Washington DC: National Academy Press, 1994: 56-87.

[7]杜玉鋒, 桂淦, 束婧婷, 等. HPLC檢測雞組織中脫氫乙酸殘留量的研究[J]. 中國家禽, 2012, 34(24): 25-28.

[8]杜玉峰. 脫氫乙酸的毒性及在雞組織中消除規律的研究[D]. 揚州:揚州大學, 2009: 27-39.

[9]牟冠文, 李光浩. 食品防腐劑的使用安全[J]. 中國衛生檢驗雜志, 2007, 17(3): 528-530.

[10]ZHANG Yumei, DU Yufeng, YIN Jun, et al. Determination and depletion of dehydroacetic acid residue in chicken tissues[J]. Food Additives & Contaminants: Part A, 2012, 29(6): 918-924.

[11]SAKAGUCHI Y, SUGA S, OSHIDA K, et al. Anticoagulant effect of sodium dehydroacetate (DHA-S) in rats[J]. Journal of Applied Toxicology, 2008, 28(4): 524-529.

[12]RIVAS A L, FABRICANT J. Indications of immunodepression in chickens infected with various strains of Marek’s disease virus[J]. Avian Diseases, 1987, 32(1): 1-8.

[13]程相朝, 張春杰. 中藥免疫增強劑對肉仔雞免疫器官生長發育及免疫活性細胞影響的研究[J]. 中獸醫學雜志, 2002(3): 6-8.

[14]王自力, 魯琳, 朱曉宇, 等. 中藥復方對雞免疫器官指數及IL-2表達的動態影響[J]. 中國獸醫科學, 2007, 37(6): 543-546.

[15]趙初嫻, 王椿, 高彥榮, 等. 淋巴結腫大伴白細胞升高[J]. 中華血液學雜志, 2013, 34(12): 1070-1072.

[16]徐麗婷, 杜慧, 孫愛軍, 等. 銀杏達莫注射液致過敏性休克分析[J].實用藥物與臨床, 2013, 16(11): 1064-1066.

[17]李春燕, 甘振磊, 湯德元, 等. 中藥添加劑對豬增重, 血常規指標及免疫功能影響的研究[J]. 動物醫學進展, 2012, 33(10): 53-56.

[18]李亞杰, 趙獻軍. 益生菌、黃芪多糖微膠囊制劑對肉仔雞生長性能、免疫器官指數及血液生化指標的影響[J]. 安徽農業科學, 2007, 35(1): 100-103.

[19]佘微明, 祁國榮. 代謝(一): 糖代謝及其調控與核酸代謝[M]. 北京:科學出版社, 1988: 127-187.

[20]楊冬芝, 于九皋. 肌酐的性質及腎臟病患者體內肌酐的清除[J]. 天津藥學, 2001, 13(5): 5-8.

[21]LEVEY K A, MACKENZIE A P, STEPHENSON C, et al. Increased rates of chorioamnionitis with extra-amniotic saline infusion method of labor induction[J]. Obstetrics & Gynecology, 2004, 103(4): 724-728.

Tolerance of Broilers to Dietary Sodium Dehydroacetate as an Antimildew Agent

SUN Defa, YANG Zhibin, QU Changbo, ZHANG Lili, WANG Tian*
(College of Animal Science and Technology, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China)

Abstract:The tolerance of broilers to dietary sodium dehydroacetate as an antimildew agent was studied in order to provide valuable references establishing its maximum safe dose in food and feed and evaluating its safety. Totally 240 Arbor Acres (AA) broilers were randomly divided into 4 groups with 6 replicates in each group, fed with basal diet (CON), and basal diet supplemented with 200 mg/kg (TES1), 1 000 mg/kg (TES2) and 2 000 mg/kg (TES3) sodium Dehydroacetate, respectively. The growth performance and serum biochemical indicators of broilers were measured. Results showed: 1) during the early growth stage, average daily feed intake (ADFI), average daily gain (ADG), average body weight (ABW), and feed efficiency (FE) of TES3 group were significantly or highly significantly lower than those of other groups (P < 0.05 or 0.01), and TES2 group presented significantly lower ADG and ABW than CON and TES1 groups (P < 0.05); during the later growth stage, ADFI and ADG of TES3 group were significantly reduced when compared with other groups (P < 0.05); 2) the number of white blood cells (WBCs) in TES2 and TES3 groups were significantly higher than in CON and TES1 groups (P < 0.05) during the later growth stage; 3) compared with CON group, the level of serum albumin in TES2 group was significantly decreased at the later growth stage, and TES2 group exhibited a significant reduction in serum aspartic aminotransferase concentration and a significant increase in serum creatinine concentration (P < 0.05) in comparison to TES1 group. These results suggest that 2 000 mg/kg sodium dehydroacetate may negatively influence the growth performance and metabolism of broilers and cause renal dysfunction.

Key words:sodium dehydroacetate; Arbor Acres (AA) broiler; growing performance; serum biochemical indicators

doi:10.7506/spkx1002-6630-201507035

中圖分類號：TS251

文獻標志碼：A

文章編號：1002-6630（2015）07-0189-05

*通信作者：王恬（1958—），男，教授，博士，研究方向為動物生長發育的營養調控。E-mail：twang18@163.com

作者簡介：孫得發（1989—），男，碩士研究生，研究方向為動物營養與飼料科學。E-mail：sun859969@163.com

基金項目：江蘇高校優勢學科建設工程資助項目

收稿日期：2014-04-03